INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

PRECIPITACIN, SEPARACIN Y PUNTO ISOELCTRICO
DE PROTEINAS
Casillas Ramos Guillermo Arturo, Orta Camargo Berenice
3FV2 SECCION 2
Introduccin:
La solubilidad de la mayora de las protenas se debe a las
interacciones hidrofilica de las molculas polares del agua y los
grupos ionizados de las protenas. Las protenas en disolucin
muestran cambios profundos de su solubilidad en funcin del
pH, la fuerza inica, las propiedades dielctricas del solvente y
la temperatura. El pH al que una protena muestra un mnimo de
solubilidad es su punto isoelctrico, que es aquel valor en el
que la molcula no posee carga (su carga neta es 0). Una
protena tiene mltiples grupos acido-base lo que hace sus
propiedades de solubilidad dependiente de la concentracin de
sal, polaridad del solvente, pH y temperatura.

Tabla 2. Precipitacin por efecto del pH y

solventes.
TUBO No.
Clara de huevo filtrada, dil.
1:3 (mL)
HCl 0.1 N ( mL)
NaOH 0.1 N ( mL)
Regulador de acetatos 0.1 M,
pH 4.7 ( mL)
Observaciones
Etanol 96 ( mL)
Observaciones

1
3.0

2
3.0

1.0
-

1.0
-

Precipitado blanco
3.0
Presenta dos ligeras
fases

No precip
3.0
No precip

Objetivos:
- Examinar los posibles efectos que producen una alteracin en
los factores fisicoqumico sobre la solubilidad de las protenas a
analizar
-Definir el punto isoelctrico de la insulina, apoyndonos en sus
propiedades de solubilidad a distintos valores de pH.

Resultados:
Durante el desarrollo de la prctica realizamos varios
experimentos, uno de ellos fue separacin de protenas por
precipitacin con sales (salting out) en el que en utilizamos clara
de huevo diluida con solucin saturada de sulfato de amonio,
despus de centrifugar la mezcla se separa en dos fases
(filtrado y precipitado) a las cuales a cada una se les hace la
prueba de Biuret, se realiza este proceso dos veces en los
cuales los resultados se muestran en la siguiente tabla (tabla1).

Tabla 1. Resultados del

Filtrado 1

Biuret
Positivo

Precipitado 1

Positivo

Filtrado 2

Negativo

Precipitado 2

Positivo

El siguiente experimento fue Precipitacin por metales pesados

en el que se prepararon una serie de 6 tubos con 1 mL de clara
de huevo diluida a cada uno, y se les adiciono 0.25 mL de un
reactivo en especfico a cada tubo que fueron cloruro de
mercurio 5%, nitrato de plata 2%, acetato de plomo 5%, cloruro
de bario 5%, cloruro de sodio 5% y agua quedando los
resultados que se expresan en la tabla 3.

Tabla 3. Precipitacin por metales

pesados.

TUBO No.
Clara de huevo
filtrada, dil. 1:3
(mL)
Cloruro de
mercurio 5%
(mL)
Nitrato de plata
Salting-Out.
2% (mL)
Interpretacin
Acetato de
Positiva debido a la presenciaplomo
de
5% (mL)
protenas.
Cloruro de
Positiva debido a la presencia debario 5%
protenas.
Cloruro de
Negativa debido a la ausenciasodio
de 5% (mL)
protenas.
Agua (mL)
Positiva debido a la presenciaObservaciones
de
protenas.

Para el experimento de precipitacin por efecto de pH y

solventes realizamos una serie de tubos cada uno con 3 mL de
clara de huevo diluida y a cada uno se le adiciono una sustancia
diferente, HCl, NaOH, y regulador de acetatos respectivamente
y observamos lo que pasaba en cada uno de los tubos, despus
se le agregaron 3 mL de etanol 96 y observamos los resultados
que quedaron como se muestran en la tabla 2

1
1.00

2
1.00

3
1.00

4
1.00

0.25

0.25

0.25

0.25

Presenta un
precipitado
lechoso

No
precipita
ligero
cambio de
coloracin
(blanco)

Precipitado
de color
blanco
lechoso

En el experimento de determinacin del punto isoelctrico de

insulina se prepararon 5 tubos con cido actico, acetato de
sodio e insulina con volmenes diferentes de cada reactivo, se
observaron los resultados y se obtuvo el valor de pH con la

No presen
cambios
precipitad

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frmula de La ecuacin de Henderson-Hasselbalch que es la
siguiente:

[ A]
pH= pka+log
[ HA ]

Estos datos se encuentran en la tabla 4.

Tabla 4. Determinacin del punto

isoelctrico de la insulina
TUBO No.
1
2
3
4
5

cido
acetico 0.2 M
(mL)
0.23
0.15
0.05
0.01
0.00

Acetato de
sodio 0.2 M
(mL)
0.02
0.10
0.20
0.24
0.25

Insulina 40
U/mL
0.06 mL
0.06 mL
0.06 mL
0.06 mL
0.06 mL

Discusiones:
En el primer experimento notamos que tanto en el filtrado 1 y
precipitado 1 y 2 la prueba de Biuret da positiva mientras que en
el filtrado 2 da negativo, esto se debe a que sabemos que la
prueba de Biuret es para identificar protenas, y al agregar
sulfato de amonio solido hasta la saturacin y llevar a
centrifugacin la mezcla de las protenas se separan por
completo quedando estas en el precipitado 2 por la tanto el
filtrado 2 queda sin protenas rectificamos esto con la prueba de
Biuret que nos da negativo.
Para el segundo experimento logramos ver que en los tubos 1 y
3 que contenan HCl y regulador de acetatos respectivamente
se observaba un precipitado color blanco que eran las protenas
y en el tubo 2 que contena NaOH la clara de huevo se
solubilizo y no presento ningn tipo de precipitado debido a que
la protena en un pH bsico presentan mayor solubilidad, y al
agregar etanol las protenas se solubilizaron menos, debi a que
los solventes orgnicos como lo es el etanol al contacto de una
solucin acuosa de protena le disminuye su
constante
dielctrica del agua y favorece la interaccin protena- protena y
esto hace que se favorezca la precipitacin
Para el tercer experimento que fue el de precipitacin por
metales pesados pudimos observar que los tubos 1, 2 y 3 dieron

positivo en la prueba que fueron los tubos que contenan cloruro

de mercurio, nitrato de plata y acetato de plomo ya que estos
reaccionan con el agua y se pierde la interaccin protena-agua
propiciando que la protena se precipite, en cambio en los tubos
4, 5 y 6 no se present ningn tipo de precipitado ya que estos
contenan sales y estas reaccionan solubilizando a la protena y
debido a eso su interaccin con el agua es ms fuerte.
Y por ltimo en la determinacin de punto isoelctrico de la
insulina observamos que no presenta cambio alguno ms que
en el tubo numero 3 ya que a ese valor de pH la solubilidad de
la insulina es la ptima, en otras palabras es su punto
isoelctrico, ya que en este punto se presenta la mayor
3.63solubilidad de las sustancias.
4.5
5.3
Conclusiones:
6.08
2.4 Analizamos los efectos que se producen al alterar de manera
fsica o qumica a las protenas, y concluimos que estos afectan
directamente su solubilidad
Determinamos el punto isoelctrico de la protena insulina al
observar precipitados mediante el cambio de su pH

Bibliografa:
Eric E. Conn, Paul K. Stumpf, George Bruening,
Roy H. Doi, 1998, Bioquimica fundamental
Ed. Limusa.
McKeeT. Bioquimica la base molecular de la vida, 4
edicin, editorial McGraw Hill inter americana.
David L. Nelson, Michael M. Cox, Claud. M Cuchillo,
Principios de Bioquimica, Ediciones Omega, p.p. 131135
Donald Voet, Judith G. Voet, Charlotte W. Pratt, 2007
Fundamentos de Bioquimica 2 edicion, editorial Medica
Panamericana p.p. 101