Un vistazo a E.

Coli
ETEC (E. coli enterotoxignico) es un tipo patognico de esta especie que
agrupa cepas capaces de producir enterotoxinas proteicas termolbiles (LT) o
termoestables (ST), las cuales no se ingieren preformadas ni ingresan al medio
interno, sino que se forman y ejercen su accin localmente sobre la mucosa
intestinal, promoviendo hipersecrecin de agua y electrolitos. La toxina lbil
tiene una estructura y una funcin muy similares a la toxina de Vibrio cholerae;
ST es un pequeo polipptido de mayor jerarqua como factor patognico, dado
que son principalmente las cepas productoras de ST, o de LT y ST, pero no las
que producen slo LT las que se asocian con alteraciones intestinales (Reis y
col, 1982). ETEC se localiza sobre las clulas epiteliales del intestino delgado
por medio de fimbrias proteicas de diversa composicin antignica y
estructural, y all produce sus toxinas que adhieren a receptores celulares,
ingresan a los epiteliocitos y modifican su funcin dando lugar a una diarrea
lquida, sin fiebre ni inflamacin de la mucosa. Tanto los genes responsables de
la produccin de toxinas como los que codifican las adhesinas bacterianas
estn localizados sobre plsmidos transferibles, por lo cual esta variante
patognica de E. coli incluye a numerosos serotipos que han sido capaces de
incorporar esos componentes del genoma procariota (Tabla 4). ETEC es agente
de diarrea aguda del nio en regiones pobres, y tambin de enfermedad
espordica o epidmica de origen alimentario, que los microbilogos del
hemisferio Norte llaman diarrea del viajero. En cualquier caso, las dosis
infectantes son relativamente altas, y los vehculos habituales de infeccin son
el agua y los alimentos contaminados que permiten la sobrevida y
multiplicacin de los grmenes. En nuestro pas, ETEC es el virotipo de E. coli
que sigue en frecuencia a EPEC como agente de diarrea aguda en los nios. No
ha sido adecuadamente investigado como causante de casos o brotes de ETA.
Su investigacin requiere la demostracin en las cepas de genes codificantes
de toxinas (por PCR o sondas gnicas) o de las enterotoxinas por ELISA
(Svennerholm y col., 1985). Ver tabla 5. EIEC (E. coli enteroinvasor) es una
variante patognica comn en pases vecinos, especialmente Brasil, pero
aislada pocas veces en nuestro pas pese a la vigilancia sistemtica de muchos
aos. Producen infeccin por transmisin persona a persona, y tambin brotes
de origen alimentario o hdrico. Se trata de cepas metablicamente muy
similares a Shigella (habitualmente lactosa negativos o tardos, anaerognicos,
inmviles, lisina negativos: Silva y col., 1980) poseedoras como Shigella de un
gran plsmido de virulencia (Lan y col. 2001) y capaces de provocar diarrea
lquida o inflamatoria, aunque en dosis infectivas significativamente mayores,
del orden de 106. Pertenecen a ciertos serogrupos caractersticos, lo que junto
a sus propiedades metablicas tpicas permite identificarlos (Tabla 4).
Localmente hemos producido antisueros para el diagnstico de EIEC por
procedimientos de aglutinacin y por Elisa dirigido a sus protenas de
membrana externa caractersticas (Tabla 5). Hemos obtenido aislamientos de
cepas O124 y O29, en nios con diarrea aguda.62 EAEC (E.coli
enteroagregativo) es un conjunto de cepas de esta especie originalmente
agrupadas por su modo peculiar de adherencia entre s y a clulas eucariotas
en cultivo, segn observaciones originales de Craviotto, Scaletsky y Nataro

(Mathewson y Cravioto, 1989). Esta adherencia y la colonizacin del intestino

delgado por EAEC son mediadas por fimbrias codificadas en plsmidos (Tabla
4). La deteccin mediante sondas marcadas o PCR de las secuencias de estas
adhesinas, y la observacin del patrn de fijacin caracterstico sobre clulas
Hep-2 son los mtodos ms tiles de identificacin de estos cultivos (Tabla 5).
EAEC produce una reaccin inflamatoria con formacin de mucus y segrega
toxinas proteicas propias que contribuyen al dao epitelial (Okeke y Nataro,
2001). El resultado es una diarrea lquida o mucosa, con escasa fiebre o
vmitos, que en muchos casos se vuelve persistente (de duracin superior a 14
das), como ha sido descrito en nios de Brasil, de Mjico y de otras regiones
(Fang y col., 1995). En nuestro pas, nuestros estudios iniciales realizados con
sondas marcadas con digoxigenina y ensayos de PCR desarrollados en el
Laboratorio de Referencia de E. coli en Lugo, Espaa, revelan la presencia de
estos grmenes en algunos casos de gastroenteritis infantil. Los datos
requieren todava confirmacin y organizacin, pero muestran que el grupo
microbiano merece atencin localmente. EAEC ha sido reconocido como causa
tambin de "diarrea del viajero" (Adachi y col., 2001) y de brotes de
enfermedad de origen alimentario (Smith y col., 1994), pero estos aspectos no
han sido explorados todava en Uruguay.
E. coli enterotoxignica
Las ETEC colonizan la mucosa del intestino delgado por medio de pilis o fimbrias que
tienen diversas formas denominadas CFA (colonization factor antigens), siendo su
principal mecanismo de patogenicidad la sntesis de alguna o ambas enterotoxinas
llamadas toxina termolbil (LT) y toxina termoestable (ST). Sus genes estn en un
plsmido que tambin puede tener informacin gentica para los CFAs, aunque
algunos genes de ST se han encontrado en transposones.6-8 Las toxinas LT y ST
aumentan el nivel intracelular de cAMP y cGMP respectivamente, que se encuentran en
la membrana de las clulas intestinales, provocando la salida de agua y iones.9
Las ETEC son importantes en lactantes, principalmente en nios menores de dos aos,
y en particular durante los primeros seis meses de vida. La frecuencia de aislamiento
de este grupo patgeno de E. coli en nios con diarrea es de 10 a 30%. En los nios en
edad escolar y en adultos puede ser asintomtica y poco frecuente o producir la
diarrea del viajero. La enfermedad tiene un periodo de incubacin de 14 a 50 h.
El cuadro clnico se caracteriza por diarrea aguda, generalmente sin sangre, sin moco,
sin pus y en pocos casos se presentan fiebre y vmito. La diarrea producida por ETEC
puede ser leve, breve y autolimitada pero tambin puede ser grave. 2,4,10
La contaminacin fecal de agua y alimentos es la principal fuente de infeccin, siendo
la dosis infectiva de 108 UFC (unidades formadoras de colonias). El cuadro III indica los
mtodos de diagnstico.
E. coli enterohemorrgica
Riley describi y relacion a EHEC con brotes caracterizados por dolor abdominal,
diarrea acuosa con angre y poco o nada de fiebre, cuadro al que se le llam colitis

hemorrgica (CH) y que era debido a la ingestin de carne cruda o mal cocida. todos
los casos fue E. coli del serotipo O157:H7. Karmali en 1983, urmico hemoltico (SUH)
caracterizado por dao renal agudo, trombocitopenia y anemia hemoltica
icroangioptica, precedida por diarrea con sangre, con la presencia en heces de E.
coli productora de una citotoxina con actividad en clulas Vero, por lo que se le llama
verotoxina (VT), y a las cepas capaces de producirla se les denomin E.
coli verotoxignicas (VTEC).11La bacteria aislada de12 la asoci con casos aislados de
sndrome13 Adems, se observ que la citotoxina se neutraliz con antitoxina obtenida
a partir deShigella dysenteriae tipo 1, por lo que tambin se le llam shiga-like toxin
o toxina semejante a shiga (SLT) o shiga toxin (STX), y a las E. coli capaces de
producirla se les da el nombre e STEC.4,14
La capacidad toxignica de las cepas es necesaria para que el paciente desarrolle colitis
hemorrgica y diarrea con sangre, ya que la citotoxina STX es el principal mecanismo
de patogenicidad de EHEC y su sntesis est relacionada con la presencia del
bacterifago STX, que est insertado en el genoma. La STX acta a nivel de sntesis de
protenas ya que se une a la subunidad 60S de los ribosomas de las clulas intestinales
o renales del hospedero.15 En las cepas EHEC aisladas, se han encontrado las variantes
STX1 y STX2 que son inmunolgicamente diferentes, de tal manera que se pueden
aislar bacterias que sinteticen alguna de las toxinas o ambas.4,5,16Adems de la toxina,
las EHEC tienen otros mecanismos de patogenicidad como el fenmeno de adherencia
y esfacelacin (A/E), y presentan el gene cromosomal eae que codifica para la protena
de membrana externa (OMP) de 94 kilodaltones (kDa), llamada intimina, cuya
expresin es regulada por genes plasmdicos; el gene eae tambin se encuentra en las
cepas EPEC. Otro factor de patogenicidad es el plsmido pO157, de 60 megadaltones
(MDa), que codifica para la enterohemolisina.17,18
Actualmente hay al menos dos clasificaciones del grupo EHEC. Una es en funcin de la
presencia de sus factores de patogenicidad: a) cepas tpicas cuando tienen el fago, el
plsmido de 60 MDa y presentan el fenmeno de A/E, y b) cepas atpicas, cuando no
producen lesiones de A/E y pueden presentar o no el plsmido de 60 MDa.
La otra clasificacin es en funcin del serotipo: a) cepas E. coli O157:H7. Este serotipo
no fermenta el D-sorbitol ni la ramnosa y no produce -glocuronidasa; esta bacteria
puede producir principalmente SUH y CH. E. coli O157:H7 se puede encontrar en
bovinos, cabras, borregos y con menos frecuencia en cerdos y pollos; su principal
reservorio es el intestino de ganado bovino.5Tambin se ha logrado recuperar de frutas
y vegetales como lechuga, rbanos, alfalfa; adems en productos industrializados
como mayonesa y jugos de naranja y manzana no pasteurizados, aun cuando estos
alimentos tengan un pH de 3.4, condicin en la que puede sobrevivir varios das. La
transmisin deE. coli O157:H7 puede ser por ingerir carne cruda o mal cocida, leche
bronca, agua contaminada; tambin puede ser de persona a persona o debida a los
manipuladores de alimentos.19-21 Hay estudios que sugieren la importancia de la mosca
domstica como vector en la transmisin de E. coli O157:H7,22 y b) cepas no-O157:H7
cuya frecuencia de aislamiento es cuatro veces mayor que las O157:H7.
Estas cepas pueden ser sorbitol positivo, y sus serotipos son diferentes del O157:H7.
Actualmente hay ms de 200 serotipos, como muestra el cuadro II. El cuadro clnico
causado por las cepas no-0157 se caracteriza por diarrea acuosa con dolor abdominal y

colitis hemorrgica. Las cepas no-O157 son capaces de causar brotes o casos aislados
de diarrea y en ocasiones no se logra establecer la fuente de contaminacin, aunque se
sabe que se pueden aislar de los mismos alimentos que las cepas de serotipo O157:H7
y tambin de carne de guajolote, ternera, pescado y mariscos.4,5
El principal mecanismo de patogenicidad de las cepas EHEC no-O157:H7 es la toxina
STX; tambin tienen el fenmeno de A/E y la presencia de pO157.
El periodo de incubacin de EHEC es de 1 a 8 das; inicialmente produce diarrea sin
sangre, con o sin vmito, dolor abdominal, fiebre, y despus de 1 a 2 das la diarrea se
torna sanguinolenta y se intensifica el dolor abdominal, de una duracin de 4 a 10 das,
con heces abundantemente sanguinolentas. Se cura o bien llega hasta SUH.
La identificacin de EHEC se puede hacer como indica el cuadro III. Las pruebas
moleculares como RFLP, hibridacin, campos pulsados, PCR y RAPD-PCR pueden
detectar hasta 102 UFC/0.1g de materia fecal, adems de que permiten realizar una
subtipificacin con fines epidemiolgicos de este grupo de bacterias.23-25
Es importante el trabajo conjunto del laboratorio y los epidemilogos para la vigilancia
y deteccin oportuna de E. coli O157:H7 para prevenir posibles brotes en Mxico,
principalmente en zonas tursticas y fronterizas.
E. coli enteroinvasiva
El grupo EIEC y Shigella spp estn relacionados gentica y bioqumicamente ya que
son descarboxilasa negativas, no mviles y lactosa negativas. El mecanismo de
patogenicidad de EIEC es la invasin del epitelio del colon; para ello el primer paso es
la adherencia de la bacteria a las vellosidades de la mucosa requiriendo de mucinasa y
adhesinas, para despus entrar por endocitosis a la clula, y posterior multiplicacin
de la EIEC dentro de la clula y diseminacin a clulas sanas adyacentes.4,26 La
informacin gentica para este mecanismo est en loci del cromosoma y del plsmido,
adems de tener la capacidad de elaborar una o ms enterotoxinas que pudieran ser
importantes en la produccin de diarrea. Los genes necesarios para la invasin se
encuentran en un plsmido de 140 MDa llamado pInv, que codifica para protenas,
como por ejemplo las Ipa y otras que estn involucradas en el proceso de
patognesis.2,27,28
Los sntomas caractersticos en personas infectadas por EIEC son diarrea acuosa, con
sangre y moco, pero algunos casos slo presentan diarrea, sta en ocasiones es
indiferenciable de la que produce ETEC. Las cepas EIEC se asocian ms con brotes que
con casos aislados, en los cuales la transmisin puede ser de persona a persona, por
ingestin de alimentos y agua contaminada, convirtindose en un patgeno importante
en nios mayores de seis meses. 2,29
El diagnstico de EIEC se hace por prueba in vivo como la de Sereny, que es la
inoculacin de un cultivo puro de la bacteria en un ojo de un cobayo en el cual despus
de 24 a 96 h se produce una ulceracin en el ojo, pero tambin hay mtodos
inmunolgicos y moleculares como se indica en el cuadro III.30-32

E. coli enteropatgena
EPEC fue el primer grupo que se identific serolgicamente y se asoci con casos de
diarrea en infantes, siendo la adherencia su principal factor de patogenicidad. El
proceso de adherencia ntima entre la bacteria y la membrana de las clulas del
epitelio intestinal, seguida de la destruccin de la microvellosidad, con polimerizacin
de actina, que lleva a la alteracin del citoesqueleto en el sitio de la unin de la
bacteria, debido al aumento de los niveles de calcio intracelular y de protena cinasa C,
ha sido denominado adherencia y esfacelamiento (A/ E). E).2,33 La adherencia est
mediada por pilis o fimbrias rizadas que se llaman Bfp (bundle-forming pilus) cuya
informacin gentica est codificada en un plsmido de 50-70MDa denominado EAF
(EPEC adherence factor) y de algunos genes cromosomales.34,35 En la adherencia es
necesaria la sntesis de una protena de membrana externa de 94 kDa llamada
intimina, codificada por el gene cromosomal eae y que sirve como seal en A/E.2,4
En ensayos in vitro las cepas EPEC se caracterizan por formar microcolonias en el
citoplasma de las clulas Hep-2 y su estudio incluye factores de patogenicidad como el
efecto A/E, presencia de plsmidos y fimbrias.2,4,36
Las cepas EPEC se consideran tpicas cuando tienen los genes eae para la intimina,
que participa en A/E, y el plsmido EAF que codifica para el Bfp; se dice que son
atpicas cuando slo presentan los genes eae pero no el plsmido EAF.4,37
EPEC puede ocasionar brotes o casos aislados de diarrea. Este grupo afecta
principalmente a nios menores de seis meses y a los de dos aos. Tambin puede
aislarse en adultos enfermos y sanos, principalmente cuando hay un factor
predisponente como diabetes. La forma de transmisin de la enfermedad es fecal-oral
por manos contaminadas de manipuladores de alimentos. Los reservorios de EPEC
pueden ser nios y adultos con o sin sntomas.
El cuadro clnico que produce EPEC se manifiesta con diarrea aguda, la cual puede ser
leve o grave, con vmito, fiebre baja y mala absorcin.
El diagnstico de EPEC incluye ensayos in vitro en cultivos celulares y mtodos
moleculares como se observa en el cuadro III.
E. coli enteroagregativa
Scaletsky y Nataro encontraron cepas aisladas de pacientes con diarrea, las cuales por
serologa no correspondan al grupo EPEC pero si presentaban un patrn caracterstico
de adherencia diferente a EPEC y que adems eran negativas a la prueba de EAF. En
estudios posteriores se encontr el fenotipo de adherencia agregativa, caracterizada
por autoaglutinacin de las bacterias entre s y por ser inespecfica, porque las
bacterias se adhieren a la superficie de las clulas Hep-2 y a la superficie del
cubreobjetos libre de clulas Hep-2.2,4,38
La adherencia a clulas Hep-2 y la hemaglutinacin de eritrocitos humanos se debe a
la presencia de una fimbria o adhesina flexible llamada fimbria I de adherencia
agregativa (AAF/I), codificada por el gene aggA que se encuentra en un plsmido de

60 MDa. Tambin se ha descrito la fimbria AAF/II inmunolgicamente diferente a AAF/I

y que est codificada por el gene aafA; sin embargo, no todas las EAEC presentan
estas fimbrias.39,40
En el mecanismo de patogenicidad de EAEC estn implicadas la bacteria y diversas
molculas que ella produce; tambin se sabe que las cepas EAEC tienen la capacidad
de incrementar en la mucosa la produccin y secrecin de moco que atrapa a las
bacterias que se autoaglutinan en una fina pelcula en el epitelio intestinal. La
produccin de moco puede estar relacionada con la capacidad de EAEC para colonizar
persistentemente el intestino y causar diarrea. En el plsmido de 60 MDa de EAEC
tambin se encuentran los genes que codifican para la toxina EASTI.41,42
Eslava y colaboradores identificaron dos protenas de alto peso molecular de cepas
EAEC, aisladas de nios que murieron de diarrea persistente. Estas proteinas fueron
probadas en asa ligada de rata observndose vellosidades cortas, hemorragia y
necrosis. El gene para una de estas protenas se encontr en un plsmido de 65 MDa y
a la protena se le dio el nombre de Pet (plasmid-encoded toxin) la cual tiene la
capacidad de producir efecto citoptico en clulas Hep-2, caracterizado por
arredondamiento y desprendimiento de las clulas as como contraccin del
citoesqueleto y prdida de fibras de actina. En EAEC se ha descrito tambin la protena
Pic que est codificada en el genoma y que tiene actividad de proteasa.43-45
El sitio blanco de dao de EAEC puede ser la mucosa del intestino grueso y delgado,
con un periodo de incubacin de menos de ocho horas y puede durar hasta 18 o 20
das. Esta bacteria puede causar brotes o casos aislados de diarrea persistente. En
nios puede manifestarse con diarrea lquida, de color verde, con moco, sin sangre, y
que en ocasiones puede llegar a ser severa y requerir rehidratacin intravenosa.
Algunas veces el cuadro clnico se presenta como diarrea con moco con o sin sangre,
vmito y sin o con poca fiebre.4,46,47La prueba de referencia para el diagnstico de EAEC
es la observacin de la adherencia agregativa en clulas Hep-2 de cultivos bacterianos,
previamente inoculados en medio Luria e incubados en condiciones estacionarias y a
37 C. Otras pruebas de diagnstico se indican en el cuadro III.36,48,49
E. coli de adherencia difusa
Las cepas de E. coli de adherencia difusa, no forman microcolonias cuando se adhieren
a clulas Hep-2 (2). Se sabe poco de su mecanismo de patogenicidad pero se ha
caracterizado una fimbria de superficie, conocida como F1845, involucrada en el
fenmeno de adherencia difusa.50 Los genes que codifican para esta fimbria se pueden
encontrar en el cromosoma o en un plsmido. El fenmeno de adherencia difusa
tambin se ha asociado con una protena de membrana externa de 100 kDa, en una
cepa del serotipo 0126:H27, cuyos genes se han secuenciado pero slo se han
encontrado en una minora de las cepas aisladas.51 Al realizar ensayos in vitro en
clulas CaCo y Hep-2, las cepas DAEC tienen la capacidad de inducir la formacin de
estructuras protuberantes, semejantes a dedos, las cuales confieren proteccin a las
bacterias, pero la presencia de dichas estructuras no se ha demostrado in vivo.
El grupo DAEC se puede aislar tanto de personas sanas como en personas con diarrea,
siendo ms importante en nios de 4 a 5 aos. Los principales sntomas que se

presentan son diarrea acuosa sin sangre y sin leucocitos. En el cuadro III se indican los
mtodos de diagnstico. La hibridacin con sondas derivadas de un fragmento del
gene daaC, que codifica para la fimbria F-1845, tambin se ha empleado para el
diagnstico pero puede presentar falsos positivos, y el diagnstico empleando PCR an
no se ha desarrollado. 4,52
Aislamiento, identificacin y caracterizacin de E. coli patgena
Para el aislamiento, la identificacin y la caracterizacin de cepas de E. coli se aplican
mtodos tradicionales, mtodos in vivo e in vitro y de biologa molecular; a
continuacin se mencionarn los mtodos tradicionales y los de biologa molecular.1,3,4
El mtodo tradicional es el aislamiento de la bacteria, tomada directamente de materia
fecal o con hisopo rectal. Despus se siembra con la punta del hisopo en la parte
superior de una placa de agar Mac Conkey u otro medio selectivo y, con una asa
redonda de nicromel, se contina el aislamiento, sembrando por estra cruzada;
despus se incuba a 37 C durante 18-24 h. Posteriormente se seleccionan de 5 a 10
colonias tpicas de E. coli lactosa positivas.
En muestras provenientes de casos de diarrea con sangre se deben seleccionar
tambin cepas lactosa negativa que pudieran ser EIEC.