Simposio de Metrologa 2008

Santiago de Quertaro, Mxico, 22 al 24 de Octubre

Calibracin de Retcula Ocular Micromtrica

Jos L. Cabrera T., Jos A. Salas, Juan A. Guardado, Jos M. Jurez.
Centro Nacional de Metrologa
km 4,5 Carretera a Los Cus, 76246, Quertaro, Mxico.
jcabrera@cenam.mx
RESUMEN
Para conseguir decisiones correctas, los resultados de las mediciones tienen que ser confiables. Para un observador, la
medicin o la calibracin pueden parecer una simple accin, en particular cuando son llevadas a cabo en concordancia
con un procedimiento dado. Los problemas surgen cuando se hace la estimacin de la confiabilidad de los resultados
obtenidos. Por esta razn, los resultados de la medicin o calibracin deben ser trazables y estar acompaados por su
incertidumbre, obtenida de acuerdo a un mtodo internacionalmente aceptado. Esto es de particular importancia en el
campo de las micromediciones.

1. INTRODUCCIN
El presente trabajo se describe las bases para llevar
a cabo la calibracin de una retcula ocular,
utilizando como patrn una retcula objetiva,
presentando una discusin de la estimacin de la
incertidumbre
asociada
con
el
resultado
correspondiente.
La metrologa1 (definida como la ciencia de la
medicin) ha sido una parte importante de la
infraestructura global desde tiempos antiguos.
Todos los resultados y decisiones hechas en los
campos de la ciencia, tecnologa y economa son
basados en datos obtenidos por mediciones.
Por ejemplo: En la agricultura por lo regular estn
presentes diferentes tipos de microorganismos
nocivos (esporas de hongos) que enferman los
cultivos. Estos microorganismos pueden clasificarse
por medio de su morfologa y sobre todo por su
tamao, por lo que al ser medidos adecuadamente
microscpicamente,
se
pueden
identificar
correctamente cada tipo de especie diferente y, por
consiguiente, asignarle un fungicida adecuado para
cada uno de ellos. El no hacer una medicin
apropiada, dara como resultado el seleccionar
errneamente un fungicida que no destruira el
microorganismo y entonces, los cultivos del campo
mexicano
podran
tener
ms
severas
consecuencias. El progreso en la ciencia es
inconcebible sin mediciones sofisticadas.
Para mejorar la confiabilidad de los resultados de
medicin, las mediciones deben ser llevadas a
cabo por laboratorios competentes, donde son

utilizados equipos de medicin calibrados y mtodos

de medicin aceptados. Los resultados de la
medicin o calibracin deben ser trazables y estar
acompaados por su incertidumbre, obtenida de
acuerdo a un mtodo internacionalmente aceptado.
La calibracin esta definida como un conjunto de
operaciones que proporcionan la relacin entre las
indicaciones de un instrumento de medicin y los
correspondientes valores del mensurando. Si
recordamos que la medicin es definida como el
conjunto de operaciones que tienen el objetivo de
determinar un valor de una cantidad, se puede
concluir que la calibracin es tu tipo especial de
medicin [1].
2. MTODO DE CALIBRACIN
2.1. Calibracin de Retcula Ocular Micromtrica
Pasos a seguir para calibrar una retcula ocular
micromtrica [2]:
a) Ver a travs del ocular y enfocar la imagen de la
retcula objetiva usando la combinacin de lente
objetiva e intermedia deseada.
b) Sobreponer la retcula ocular y la retcula
objetiva, haciendo coincidir uno de sus extremos
de cada una.
c) La medicin deber ser consistente, desde el
extremo en que coinciden ambas retculas hasta
otra subdivisin coincidente, Fig. 1.
d) La calibracin de la retcula ocular puede ser
determinada dividiendo la longitud conocida de
la retcula objetiva (Lp) entre el nmero de
divisiones coincidente de la retcula ocular (#dO).
Este clculo da por resultado el valor real de la
longitud de cada subdivisin de la retcula ocular
(VRSub):

Del griego metrologa, teora de proporciones, del metron,

medicin.

Centro Nacional de Metrologa

SM2008-M212-1064-1

Simposio de Metrologa 2008

Santiago de Quertaro, Mxico, 22 al 24 de Octubre

Lp (mm)

Dos (2) subdivisiones de la retcula ocular (#dO = 2

subdivisiones) coinciden con la distancia conocida
de 0,3 mm con respecto a la retcula objetiva (LP =
0,3 mm). La longitud por unidad de divisin (VRSub)
puede ser calculada como sigue:

# d O ( subdivisin)

= VRSub (mm / subdivisin) . (1)

Nota: Por supuesto, se debe repetir el

procedimiento
arriba
listado
para
varias
combinaciones de lentes objetivas- intermediasoculares, ya que no es el mismo valor de VRSub a
50X que a 1000X. Se puede crear una tabla de
calibracin de la retcula ocular para todas las
amplificaciones posibles.
Retcula Objetiva

VRSub =

LP
# dO

0,3 mm
2 subdivisiones

= 0,15 mm / subdivisin . (2)

Esto significa que cada subdivisin nominal de la

Retcula Ocular vale 0,15 mm vista con un lente
objetivo de 40X.
Nota: Para convertir el valor de milmetros (mm) a
micrmetros (m) realizar el siguiente clculo:

1000 m

= 150 m / subdivisin . (3)

2 subdivisiones 1 mm
0,3 mm

Lneas coincidentes
Retcula Ocular

Fig. 1. Lneas coincidentes.

Retcula Objetiva
(Lnea coincidente = 0,3 mm)

Retcula Ocular
(Lnea coincidente = 2
subdivisiones)

Fig. 2. Alineacin de las lneas de retcula ocular y

objetiva.

Ejemplo A: Calibracin de Retcula Ocular a la

amplificacin de cuatrocientos aumentos (400X)
Para una configuracin dada de lentes2 en un
microscopio ptico (ocular de 10X y objetivo de
40X), se determina la longitud por valor de divisin
de un ocular micromtrico. La lnea de la retcula
objetiva (vista a 400X) fue alineada con la lnea de
la retcula ocular, Fig. 2.
2

Para un microscopio compuesto, la amplificacin total (Mt) de

una imagen vista a travs del lente ocular es el producto de la
amplificacin de la lente objetiva (Mo), la amplificacin del lente
ocular (Me) y, si esta presente, la amplificacin del sistema de
aumento u otro sistema de lentes intermedios (Mi). Se puede
expresar la amplificacin total por medio de la siguiente ecuacin:
Mt = (Mo)(Me)(Mi). Ejemplo 1: Para un microscopio configurado
con un lente objetivo de 10X, un lente ocular de 10X y una lente
intermedia de 1,25X, la amplificacin total observada a travs del
ocular puede calcularse mediante: Mt =(10X)(10X)(1,25X)=125X .

Centro Nacional de Metrologa

2.2. La correccin y su Incertidumbre

El mtodo ms ampliamente empleado para calibrar
instrumentos de medicin es el mtodo directo [1],
que implica que la cantidad reproducida por un
patrn de medicin P es medida por el instrumento
de medicin a ser calibrado (IMC), Fig. 3.

xP

IMC

IIM

xind

x= xP - xind
Fig. 3. Diagrama esquemtico del mtodo directo.

En este caso, el patrn de medicin P puede ser

una Retcula Objetiva y el IMC una Retcula Ocular.
La calibracin implica que el valor xP del patrn de
medicin y la indicacin xind del instrumento de
medicin a ser calibrado son obtenidos. La
indicacin actual xind tiene que ser corregida por
efectos que pudieran tener influencia en l y para
hacer que corresponda con condiciones para las
cuales la calibracin ser establecida como vlida,
por ejemplo, una temperatura de referencia
establecida. Por lo tanto, la indicacin corregida
(reducida) xind-c es:
N 2

xind-c = xind + i=1

xi

(4)

Donde xi, es la correccin debida al ensimo factor

de influencia del total de N-2 factores considerados,
esto es xind = xind-c - xind = iN=1 2 xi . El valor N-2 es
SM2008-M212-1064-2

Simposio de Metrologa 2008

Santiago de Quertaro, Mxico, 22 al 24 de Octubre

seleccionado porque en la Ec. (4) se asume que

hay N cantidades de entrada en conjunto. Por
consiguiente, la correccin x = xP xind-c toma la
forma:

x = xP - xind - iN=1 2 xi .

(5)

Debe notarse que en muchos casos el mejor

estimado de xi es cero. Sin embargo, an tales
trminos necesitan ser incluidos en la Ec. (5),
porque ellos contribuyen a la incertidumbre de x.
El modelo directo de calibracin es usado, por
ejemplo para calibracin de verniers, micrmetros,
voltmetros y ohmetros, tambin como para todos
los instrumentos de calibracin y dispositivos de
prueba cuando el patrn de medicin es un material
de referencia.
2.2.1. La Correccin de xP
El estimado xP del valor del patrn, usado en la Ec.
(5) puede a menudo ser expresado como xP= xP, nom
+ xP, donde xP, nom es el valor nominal (indicado) del
patrn y xP es la correccin del valor nominal
obtenido de la calibracin del patrn. Ver el
siguiente ejemplo:
Ejemplo B: Valor estimado corregido de la
Retcula Objetiva
En el certificado de la Retcula Objetiva del ejemplo
A, el valor nominal (xP, nom) para la lnea que coincide
(con la lnea de la Retcula Ocular) es de 0,3 mm
(xP, nom.= 300 m). La desviacin correspondiente a
esa lnea (xP) es de 0,000 2 mm (xP = 0,2 m), por
lo que la distancia conocida corregida (LPcorregida)
ser:

LPcorregida = xP , nom + xP

LPcorregida = 0,3 mm + 0,0002 mm = 0,3002 mm .

(6)

2.2.2. Expresin General de la Correccin x

En muchos casos, las contribuciones restantes para
la correccin de un instrumento de medicin pueden
juntarse en dos trminos, uno concerniente a la
contribucin del instrumento para ser calibrado y el
otro concerniente a efectos ambientales. El modelo
general de calibracin dado por la Ec. (5) puede
entonces ser expresado como:

x = (xP, nom + xP - xind) - xobj - xamb ,

(7)

es la indicacin del instrumento de

donde xind
medicin a ser calibrado, xobj es la correccin de la
Centro Nacional de Metrologa

indicacin xind debida a todos los efectos causados

por la medicin del instrumento a ser calibrado,
xamb es la correccin de la indicacin xind debida a
todos los efectos ambientales a ser considerados.
En realidad, las correcciones indicadas en la Ec. (7)
pueden consistir de muchos componentes, siendo 0
(cero) su mejor estimado en muchos casos.
2.2.3. Estimacin de Incertidumbre de x
La incertidumbre estndar u(x) del estimado x de
la correccin es obtenida de la Ec. (8):
N

u 2 ( y ) = u i2 ( y ) ,
i =1

(8)

como:

u (x ) = u 2 (x P ) + u 2 ( xind ) + u 2 (xobj ) + u 2 (x amb )

(9)
donde u (x P ) es la incertidumbre estndar de la
correccin aplicada a la medicin del patrn,
u ( xind ) es la incertidumbre estndar de la
indicacin del instrumento de medicin a ser
calibrado, u (x obj ) es la incertidumbre estndar de
la correccin debida a todos los efectos causados
por el instrumento de medicin a ser calibrado, y
u (x amb ) es la incertidumbre estndar de la
correccin debida a todos los efectos ambientales a
ser considerados.
Se debe notar que no es necesario considerar la
incertidumbre del valor nominal xP, nom del patrn en
la Ec. (7) porque su contribucin est ya contenida
en u (x P ) .
2.2.3.1. Incertidumbre de u (x P )

La estimacin u (x P ) de la incertidumbre estndar

del valor xP de la medicin del patrn es encontrada
del certificado de calibracin.
Ejemplo C: Incertidumbre del Certificado de
Calibracin del Patrn
Si la incertidumbre es dada como una incertidumbre
expandida U(xP) con un nivel de cobertura del 95
% y se asume una distribucin normal a ella, la
incertidumbre estndar sera u (x P ) = U(xP)/2. En
el certificado del Ejemplo B, el valor de U(xP) es

SM2008-M212-1064-3

Simposio de Metrologa 2008

Santiago de Quertaro, Mxico, 22 al 24 de Octubre

igual a 0,8 m, por lo que u (x P ) = 0,8 m/2 = 0,4

m.

corregido o no). Tomando el valor de VRSub

del Ejemplo B, se tiene que:

u (x obj ) =

2.2.3.2. Incertidumbre de u ( xind )

La indicacin xind en la Ec. (7) es a menudo un
promedio aritmtico de varios mensurandos
repetidos. Asumiendo que el proceso de calibracin
esta bien establecido y bajo control estadstico, ah
puede existir una desviacin estndar s(xind) que
describe la dispersin de los resultados. Si este es
el caso, la incertidumbre u ( xind ) del promedio
aritmtico x puede ser estimada con la ayuda de la
siguiente ecuacin:

u ( xind ) =

s ( xind )

(10)

donde n es el nmero de mediciones llevadas a

cabo bajo condiciones de repetibilidad.
2.2.3.3. Incertidumbre de u (x obj ) y u (x amb )
La contribucin

u (xobj ) para la incertidumbre,

debida a todos los efectos causados por el

instrumento de medicin a ser calibrado, depende
de la situacin actual. A menudo la resolucin del
dispositivo de la indicacin provee la contribucin
dominante. En este caso, quedara de la siguiente
manera:

u (xobj ) =

Indicacin

2 3

0,1501 / 2

2 3

= 0,0217 mm . (12)

Consideraciones similares son validas para la

contribucin u (x amb ) debida a todos los efectos
ambientales que tienen que tomarse en cuenta.
3. RESULTADOS
a) La calibracin de la Retcula Ocular (para cierta
amplificacin) consiste en determinar el valor de
cada subdivisin de la misma, por medio de la
Retcula Objetiva, a travs del mtodo descrito
anteriormente en el punto 2.1. En este caso, el valor
de la indicacin corregida xind-c es igual al valor de
cada la indicacin ms su correccin x:
xind-c = xind + x.

(13)

Considerando que los factores ambientales no

contribuyen significativamente con el proceso de
calibracin ( x amb y u (x amb ) = 0), adems que se
consideran
uniformemente
espaciadas
las
subdivisiones de la Retcula Ocular y despreciando
cualquier otra fuente que afecte el proceso de
calibracin (xobj = 0), se tienen los siguientes datos
tomados de los ejemplos:
XP= xP, nom + xP = LPcorregido = 0,3002 mm,

(11)

VR SubCorregido =

2 3

donde indicacin es la mnima indicacin de la

Retcula Ocular. La Ec. (11) se establece de esta
forma,
porque
asumimos
una
distribucin
rectangular. En otros casos, varias fuentes de
incertidumbre tienen que ser consideradas y xobj
tiene que ser asumida como la suma de estas
contribuciones.
Ejemplo D: Incertidumbre causada por la
resolucin finita de una indicacin de un
dispositivo
Considerando que la resolucin es la ms pequea
diferencia entre indicaciones que puede ser
percibida de manera significativa [3], la componente
de la incertidumbre que caracteriza la resolucin de
la Retcula Ocular ser el valor de la mitad de una
subdivisin, o sea el valor de VRSub/2 (ya sea
Centro Nacional de Metrologa

VRSub / 2

corregido

L Pcorregida
# dO

= 0,1501 mm / sub.

(14)
(15)

Si en la Fig. 2 se consideran 2 subdivisiones,

entonces el valor de xind = 0,1501 + 0,1501 = 0,3002
mm, x amb = 0 y xobj = 0.
Sustituyendo estos valores en la Ec. (7), se tiene
que x = (0,3002 0,3002) 0 0 = 0, por lo que de
la Ec (11) tenemos que xind-c = 0,1501 mm = 150,1
m en la primera subdivisin; xind-c = 0,3002 mm =
300,2 m en la segunda subdivisin; y as
sucesivamente.
b) Para la estimacin de incertidumbre se tienen los
siguientes datos:
u (x P ) = 0,4 m
(ejemplo C)

u ( x Ind ) = 0,095 m

(dato)

SM2008-M212-1064-4

Simposio de Metrologa 2008

Santiago de Quertaro, Mxico, 22 al 24 de Octubre

u (x obj ) = 0,0217mm = 21,7 m

(ejemplo D)

u (x amb ) = 0

(dato).

Sustituyendo estos valores en la Ec. (9), se tiene:

u (x) =

(0,4) 2 + (0,095) 2 + (21,7) 2 + (0) 2

(16)

= 21,704 m
Por lo tanto, el valor de cada subdivisin tiene una
incertidumbre de 43,408 m, con k = 2.
4. DISCUSIN
4.1. Presentacin de los Resultados de
Calibracin
El resultado inmediato de una medicin es la
indicacin provista por el instrumento de medicin.
Sin embargo, como hemos visto, este no es el
resultado final de una calibracin, porque la
indicacin necesita procesarse con ms detalle. En
general, los resultados deben ser presentados en un
documento separado que es marcado en una
manera apropiada. Este es comnmente llamado
certificado de calibracin.
El documento debe nicamente identificar el
laboratorio en cuestin, el instrumento de medicin
calibrado y el organismo o persona que ha
ordenado la calibracin. El mtodo de calibracin y
las condiciones bajo las cuales la calibracin fue
llevada a cabo deben establecerse.
El documento debe tambin contener al menos una
declaracin general de la trazabilidad del laboratorio
para las mediciones concernidas. Es una buena
prctica evitar juicios subjetivos, tales como, por
ejemplo, concernientes a la conveniencia del
instrumento calibrado para un propsito dado, o
declarar recomendaciones de intervalos de
recalibracin, si el cliente no ha solicitado
explcitamente tener este tipo de informacin
incluida en el documento. Un caso tpico es la
inclusin de una declaracin de conformidad. El
documento debe ser firmado por una persona
apropiadamente nombrada.
Los resultados deben ser presentados en una forma
concisa pero lucida y bien ordenada. En general,
una presentacin en forma de tabla es preferida.
Algunas veces es de gran ayuda soportar las tablas
con grficas, pero una presentacin solamente
grfica debe ser evitada. Si se incluye una curva de
calibracin o curva de correccin, la ecuacin de
Centro Nacional de Metrologa

regresin usada debe ser presentada, as como la

informacin de cmo fue obtenida.
Es esencial hacer evidente si la cantidad presentada
es un error estimado de la indicacin del
instrumento calibrado, o una correccin con la
intensin de compensar el error. Algunas veces es
aconsejable presentar tanto las indicaciones del
instrumento y el valor del patrn utilizado
(apropiadamente corregido para reducirlos a
condiciones establecidas en el mtodo de
calibracin) y sus diferencias.
Los resultados de calibracin deben siempre estar
acompaados por una declaracin de incertidumbre
de las mediciones asociadas a ellas. Es habitual
establecer la incertidumbre de los resultados de la
calibracin como una incertidumbre expandida
correspondiente a una probabilidad de cobertura. En
muchos casos, es razonable asumir que la
distribucin de probabilidad de la cantidad estimada
es aproximadamente normal. Sin embargo, el uso
indiscriminado de un factor de cobertura de k=2
para una probabilidad de cobertura del 95 % debe
ser evitada.
Se debe tener especial atencin en el redondeo de
los resultados de calibracin, para facilitar el uso
sensato del instrumento de medicin calibrado. En
algunos casos, esto implica que los resultados
deben ser redondeados a lo ms, al dgito que
corresponda a la resolucin del instrumento.
Para laboratorios de calibracin acreditados,
requerimientos mandatarios usualmente aplican con
referencia a los certificados de calibracin emitidos
por ellos. En la mayora de los casos, la acreditacin
esta basada en requerimientos dispuestos en la
ISO/IEC 17025 y por consiguiente, laboratorios de
calibracin acreditados bajo los lineamientos de
sta, tienen que satisfacer los requerimientos de los
certificados de calibracin establecidos en ste
documento.
5. CONCLUSIONES
La calibracin de una Retcula Ocular puede
parecer una simple accin, en particular cuando se
lleva a cabo en concordancia con el procedimiento
descrito en la referencia [2]. Sin embargo, hacer la
estimacin de la confiabilidad de los resultados
obtenidos es ms complicado, pero no imposible.
Todos los esfuerzos para obtener un estimado
valido de la calibracin y su incertidumbre asociada,
SM2008-M212-1064-5

Simposio de Metrologa 2008

Santiago de Quertaro, Mxico, 22 al 24 de Octubre

pueden resultar ser intiles, si se torna evidente que

el resultado no es trazable.
En conclusin, la trazabilidad es una propiedad del
resultado de una medicin y por consiguiente, el uso
de un instrumento de medicin calibrado trazable es
una condicin necesaria para conseguir trazabilidad.
AGRADECIMIENTOS
Agradezco la participacin de los coautores y al
Comit Tcnico del Simposio de Metrologa 2008
por su apoyo continuo con sus observaciones y
comentarios durante la preparacin de este artculo.
REFERENCIAS
[1] Rein Laaneots, Olev Mathiesen, An Introduction
to Metrology, Estonia: TUT Press, pp. 217-237,
(2006).
[2] ASTM (American Society for Testing and
Materials) Standards: E 1951 -02, Standard
Guide for Calibrating Reticles and Light
Microscope Magnifications.
[3] ISO
(International
Organization
for
Standardization): Vocabulario Internacional de
trminos bsicos y generales en metrologa VIM
(publicada por ISO en nombre de BIPM, IEC,
IFCC, IUPAC y OIML). Segunda edicin.

Centro Nacional de Metrologa

SM2008-M212-1064-6