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UNTECS

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

UNTECS CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Asignatura: ECOTOXICOLOGÍA Laboratorio No.:12 Tema: Determinación

Asignatura: ECOTOXICOLOGÍA

Laboratorio No.:12

Tema: Determinación de Plaguicidas

Nombre del profesor:

APESTEGUÍA INFANTES JOSÉ ALFONSO

Integrantes del Grupo:

- Aquiño Poma Carla Paola

- Coria Benavides Kassandra Geraldine

- Falconi Castilla Cristhian

- Jara Jara Hans

- Moreno Fuentes Denisse

- Ramos Parco Jonatan

- Utane Choque Carlos

- Marcos Rivera Carlos Alfonso

- Huisacayna Arias Miguel Ángel

- Núñez López Manuel

Carrera:

Ingeniería Ambiental

Horario:

viernes de 8:30 10:10

Fecha:

04 -07-2014

Ecotoxicología Aislamiento de Tóxicos Orgánicos Fijos

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1.- INTRODUCCIÓN

Sabemos por nuestra vida universitaria que los plaguicidas han sido utilizados por más de 50 años, proporcionando tratamientos económicos y efectivos para un gran número de cultivos. Sin embargo algunos residuos de estos plaguicisdas persisten en los alimentos y constituyen un riesgo para la salud humana.

Los plaguicidas o pesticidas son sustancias destinadas a matar, repeler, atraer, regular o interrumpir el crecimiento de algunos seres vivos considerados como plaga. Pueden ser producidos mediante síntesis química, biológica o ser productos naturales. Entre los plaguicidas más comunes están los organofosforados y organoclorados además de los piretroides.

Es por ello que se ha hecho este informe para la determinación de estos plaguicidas a través de reveladores y utilizando una cuba cromatográfica viendo su fase estacionaria.

2.- RESUMEN

En el presente informe se determinaremos la presencia de plaguicidas organoclorados y organofosforados utilizando el método de cromatografía de capa fina. Este método se realiza normalmente de modo ascendente, esto es, al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi en vertical, por la acción de la capilaridad. La cromatografía se realiza en una cubeta. Para conseguir la máxima saturación posible de la atmósfera de la cámara, las paredes se impregnan del eluyente. Luego del proceso a realizar calcularemos los valores de Rf de varias sustancias y correlacionaremos a la selección adecuada del eluyente y deduciendo la relación que existe entre la polaridad de la sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.

3.- MARCO TEÓRICO

Plaguicidas

La misión de los plaguicidas es abatir o, al menos controlar todo tipo de plagas. Se encuentran numerosas aplicaciones tanto industriales para impregnar la madera, como agrícolas para el control de insectos, maleza, hongos y roedores.

El empleo de plaguicidas en la agricultura se inició hace algo más de cien años y su consumo ha ido aumentando, sobre todo cuando en 1939 se descubre las

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propiedades insecticidas del DDT (C14 H9 C15). El comienzo de los

plaguicidas sintéticos comenzó durante la época de 1940 y favoreció el incremento de la producción alimentaria, también contribuyo a la salud humana

a través del control de insectos vectores de enfermedades, luego a partir de 1960 comenzaron a manifestarse sus impactos adversos al medio ambiente a

la salud humana.

Los plaguicidas son el grupo más amplio de químicos potencialmente tóxicos que se han introducido voluntariamente al medio ambiente, e incluyen insecticidas, herbicidas, fungicidas, entre otros.

Clasificación

Los plaguicidas se pueden clasificar según los siguientes criterios:

Concentración: ingrediente activo, plaguicidas técnico, plaguicida formulado

Organismos que controlan: insecticidas, acaricidas, bactericidas, rodenticidas, etc.

Modos de acción: de contacto, repelentes, de ingestión, defoliantes, fumigantes.

Composición química: organoclorados, organofosforados, triazinas, compuestos de cobre, piretroides, organuzufrados.

Presentación de formulaciones: solidos, liquidos y gases

Uso al que se destinan: agrícola, urbano, pecuario, industrial, forestal, doméstico.

Los principales productos utilizados como plaguicidas de interés en la toxicología:

Insecticidas

Organoclorados, organofosforados, carbamatos, piretrinas, nicotina

Herbicidas

Triclorodiclorofenoxil herbicidas, derivados de la úrea, carbamatos

Fungicidas

Carbamatos, organofosforados, captano, captofol, pentaclorofenol, sulfuro elemental

Rodenticidas

Cumarinicos, anticoagulantes de acción corta, fosforo, cianuro, estricnina

Nematocidas

Bromuro y cloruro de metilo, fosfina.

Compuestos organofosforados

Los organofosforados son sustancias orgánicas de síntesis, conformadas por un átomo de fósforo unido a 4 átomos de oxígeno o en algunas sustancias a 3 de oxígeno y uno de azufre. Una de las uniones fósforo-oxígeno es bastante lábil y el fósforo liberado de este “grupo libre” se asocia a la acetilcolinesterasa inhibiendo la transmisión nerviosa y provocando la muerte. Sus características principales son su alta toxicidad, su baja estabilidad química y su nula acumulación en los tejidos, característica ésta que lo posiciona en ventaja con

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respecto a los organoclorados de baja degradabilidad y gran bioacumulación.

Se trata de compuestos, en general, marcadamente apolares, lo que significa que desde el punto de vista químico la mayoría son escasamente solubles en agua, aunque con grandes diferencias de un compuesto a otro, y desde el punto de vista biológico tienden a disolverse en grasas. Por tal motivo, la piel, donde se encuentra una importante capa de tejido con elevado contenido en lípidos, puede constituirse en una importante vía de entrada. La estabilidad de los organofosforados depende del pH del medio; a pH fuertemente alcalino se descomponen, lo que puede ser utilizado para destruirlos.

Exposición

Destaca el personal de empresas dedicadas a la aplicación de plaguicidas de tipo agrícola, de tipo ambiental (en interior de locales), trabajadores de empresas agrícolas que manipulan o aplican tales productos; en la industria alimentaria; trabajadores de unidades de salud pública, centros veterinarios; pilotos y personal auxiliar que interviene en las aplicaciones agrícolas aérea, trabajadores de aplicaciones forestales y de tratamientos estructurales de edificios; trabajadores de la desinfección de barcos o grandes almacenes, y desde luego, los que se dedican a la fabricación, formulación y/o envasado de organofosforados, es decir, su producción industrial.

Aun sin manipular ni utilizar estos productos en ningún momento, puede estar laboralmente expuesto de manera accidental (por circunstancias que no son inherentes a la propia actividad y como consecuencia de tratamientos incorrectos realizados por terceras personas): el personal que trabaja en centros hospitalarios, al que se considera como “grupo de alto riesgo” de exposición por las frecuentes y “programadas” aplicaciones de insecticidas, el de hostelería, oficinas, centros docentes, recreativos, residencias de ancianos, entre otros.

Así mismo, pueden estar expuestas las personas que a tales centros acuden como pacientes (enfermos), simples ciudadanos, niños, adultos o ancianos, muchos de ellos más susceptibles por sus características o condiciones de salud que la mayoría de la población general, lo que constituye un problema de salud pública adicional al que debe prestarse especialísima atención.

Vías de exposición

En el ámbito laboral, la exposición puede tener lugar por las tres vías clásicas:

digestiva, inhalatoria y dérmica. La vía digestiva directa se suele considerar como accidental (ingestión de una solución por error o con fines suicidas, o de alimentos directa o indirectamente contaminados). Deberá, por tanto, evitarse en todo momento el contacto de alimentos (y su almacenamiento) con tales productos, así como comer, beber o fumar durante su manipulación o sin lavarse previamente las manos y la cara.

Organoclorados

Los organoclorados conforman un grupo de pesticidas artificiales desarrollados principalmente para controlar las poblaciones de insectos plaga. Su origen se

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remonta a la fabricación del DDT (diclorodifeniltricloroetano) en 1943. De ahí en adelante y por muchas décadas, dicho clorado fue un arma importante en la lucha química y una casi ineludible en el control del mosquito Anopheles transmisor de la malaria.

Los organoclorados son, en esencia, hidrocarburos con alto contenido de átomos de cloro y fueron los insecticidas más criticados por los grupos ecologistas. El DDT fue casi un símbolo de veneno químico, debido a su difícil degradación y su gran acumulación en el tejido animal, característica ésta que comparte con los demás integrantes del grupo.

Existen casos de resistencia de insectos a organoclorados, principalmente al DDT, dado el gran uso que se ha hecho del mismo. Como en el caso de los carbamatos y los organofosforados, es recomendable un uso moderado de estos productos.

Aldrín, clordano, dieldrín, endrín, heptacloro, HCH (hexaclorociclohexano), lindano y toxafeno son organoclorados integrantes de la llamada “docena sucia” que engloba a aquellos pesticidas que más problemas ambientales han generado. Actualmente los organoclorados están prohibidos en Argentina y en casi todo el mundo y para casi todos los usos, debido a sus problemas de acumulación, a su alta estabilidad química, su gran estabilidad a la luz y su difícil degradación biológica. En algunos casos inclusive, se ha comprobado que son carcinogénicos y mutagénicos.

Lamentablemente existe un uso clandestino de los organoclorados, incluido el DDT, debido a su entrada por contrabando y un uso agrícola con escasos controles internos.

4.- OBJETIVOS

Determinar principalmente la presencia de plaguicidas organoclorados y organofosforados utilizando el método de cromatografía de capa fina.

Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, (ccf), sus características y los factores que en ella intervienen.

Calcular valores de Rf de varias sustancias y correlacionarlo a la selección adecuada del eluyente y deducir la relación que existe entre la polaridad de la sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.

5.- MATERIALES

 Estufa  Cloruro de paladio (PdCl2)  Ddimetil amino benzaldehido  Etanol Ecotoxicología –
 Estufa
 Cloruro de paladio (PdCl2)
 Ddimetil amino benzaldehido
 Etanol
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Reveladores

Capilares

Cuba cromatográfica

Placa cromatográfica

 Cuba cromatográfica  Placa cromatográfica 6.- METODOLOGÍA Y PROCEDIMIENTO 6.1.-METODOLOGÍA RESIDUO
 Cuba cromatográfica  Placa cromatográfica 6.- METODOLOGÍA Y PROCEDIMIENTO 6.1.-METODOLOGÍA RESIDUO
 Cuba cromatográfica  Placa cromatográfica 6.- METODOLOGÍA Y PROCEDIMIENTO 6.1.-METODOLOGÍA RESIDUO
 Cuba cromatográfica  Placa cromatográfica 6.- METODOLOGÍA Y PROCEDIMIENTO 6.1.-METODOLOGÍA RESIDUO
 Cuba cromatográfica  Placa cromatográfica 6.- METODOLOGÍA Y PROCEDIMIENTO 6.1.-METODOLOGÍA RESIDUO
 Cuba cromatográfica  Placa cromatográfica 6.- METODOLOGÍA Y PROCEDIMIENTO 6.1.-METODOLOGÍA RESIDUO

6.- METODOLOGÍA Y PROCEDIMIENTO

6.1.-METODOLOGÍA

RESIDUO

ACIDO

Plaguicidas (IOF,

IOC, IOCl, piretroides, warfarina)

ACIDO Plaguicidas (IOF, IOC, IOCl, piretroides, warfarina) . . . . ST IOF IOC Fase estacionaria

.

.

.

.

ST

IOF IOC

Fase estacionaria silicagel

ST

MP1

MP2

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Cuba cromatográfica Fase móvil Metanol:acetona 5:1 . . . . Después de pasar por la
Cuba cromatográfica Fase móvil Metanol:acetona 5:1 . . . . Después de pasar por la

Cuba cromatográfica

Fase móvil Metanol:acetona

5:1

Cuba cromatográfica Fase móvil Metanol:acetona 5:1 . . . . Después de pasar por la estufa

.

.

.

.

Después de pasar por la estufa se evidenciaran los resultados. Serán de color : rojo naranja o amarillo.

1)

I.O.F. -> PdCl 2 al 0.1 %

2)

I.O.C. -> P.DAB al 1 %

DAB: dimetil amino benzaldehído

FUENTE

SOLUTO

FUENTE SOLVENTE

dimetil amino benzaldehído FUENTE SOLUTO FUENTE SOLVENTE . . . . Según los resultados dados ,
. . . .
.
.
.
.

Según los resultados dados , se halla el RF.

Para poder hallarlo se hace una división simple.

RF = Fuente Soluto/Fuente Solvente

y el resultado siempre es menor que 1 .

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6.2.- PROCEDIMIENTO

-Prepara las placas cromatográficas con Silica gel G60.

-Prepara las placas cromatográficas con Silica gel G60. - Se tiene 4 muestras, 1 de insecticidas
- Se tiene 4 muestras, 1 de insecticidas organofosforado, carbámico y 2 muestras problemas (G1,
-
Se tiene 4 muestras, 1 de insecticidas organofosforado, carbámico
y
2 muestras problemas (G1, G2, G3, G4)
-
Se procede a echar alcohol etílico a los viales. Luego en las placas ya
cubiertas con, se cultiva con los capilares de vidrio, las 4 muestras
(dejando un margen del borde de 2cm).
-

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- Las muestras estándar se cultiva 3 veces (organofosforado y carbanico) y 6 veces las
- Las muestras estándar se cultiva 3 veces (organofosforado y carbanico) y 6 veces las
- Las muestras estándar se cultiva 3 veces (organofosforado y carbanico) y 6 veces las

- Las muestras estándar se cultiva 3 veces (organofosforado y carbanico) y 6 veces las 2 muestras problemas. (Las muestras problema G1,G2 ,G3,G4 se echan el doble de volumen debido a que no muestran la misma pureza que el grupo estándar.)

a que no muestran la misma pureza que el grupo estándar.) - En la placa más

- En la placa más pequeña se cultiva una de las muestras estándares y

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las 2 muestras problemas, en la otra placa se cultiva las 2 muestras estándares y las 2 muestras problemas.

- En el recipiente de vidrio se vierte el metanol acetona. Y se coloca las 2 placas hasta que corra las ¾ partes (El envase de vidrio se cierra casi herméticamente para evitar pérdidas de material volátil. Y que las muestras no tengan algún contacto de contaminación la cual puedan alterar el procedimiento normal de más mismas).

cual puedan alterar el procedimiento normal de más mismas). - Después de un tiempo, se ve
cual puedan alterar el procedimiento normal de más mismas). - Después de un tiempo, se ve

- Después de un tiempo, se ve en las placas que las muestras se han desplazado hacia arriba (frente de solvente)

muestras se han desplazado hacia arriba (frente de solvente) - En la primera placa se rosea

- En la primera placa se rosea cloruro de paladio, y en la placa más

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grande se rosea cloruro de paladio y p-dimetilaminobenzaldehido, ya que esta placa tiene muestras.

DETECTA

REACIVO

COLOR

ORGANOFOSFORADOS

cloruro de paladio

Naranja o marrón

CARBÁMICOS

p-dimetilaminobenzaldehido

Amarrillo intenso

- Finalmente se dibuja los centros de cada mancha, y se coloca el origen, con estos puntos se mide: frente de soluto (cm) y el total que es frente de solvente (cm). Y se hace el cálculo respectivo.

frente de solvente (cm). Y se hace el cálculo respectivo. 7.-RESULTADOS Ecotoxicología – Aislamiento de Tóxicos

7.-RESULTADOS

(cm). Y se hace el cálculo respectivo. 7.-RESULTADOS Ecotoxicología – Aislamiento de Tóxicos Orgánicos

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8.- CONCLUSIONES  Este método nos proporcionó gran ayuda en determinar los compuestos químicos en

8.- CONCLUSIONES

Este método nos proporcionó gran ayuda en determinar los compuestos químicos en un residuo básico y acido ya sea en una muestra liquida o sólida.

Se observó la formación de dos tipos de filtrado, el primer filtrado fue fundamental para separar la fase orgánica con la fase acuosa esta última nos dio un residuo, pero básico determinando algunos alcaloides y derivados del benceno, pero no solamente se puede obtener residuos básicos sino otro residuo, pero acido que también se observó algunos compuestos como salicatos, compuestos fenólicos, organoclodorados, etc. Es así que el compuesto para dar un residuo base fue el reactivo hidróxido de amonio NH4 (OH).

8.- RECOMENDACIONES

Es recomendable utilizar los equipos de seguridad como guantes quirúrgicos para no contaminar la muestra.

Las medidas de precaución deben ser las máximas posibles durante el traslado de las muestras y en la aplicación de los métodos.

Un mal manejo de la técnica puede derivar en errores, por lo que se

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recomendaría en caso de duda y si la circunstancias lo permiten, repetir

el examen aunque lo más apropiado sería seguir al pie de la letra la

metodología e instrumentación propuesta para obteber resultados

confiables.

Buen uso y manejo de las placas

9.- PREGUNTAS

¿INDICAR OTRAS FASES ESTACIONARIAS?

FLORISIL

Antes de su uso, el Florisil se activa en el laboratorio por un tiempo mínimo de 5 horas a 130'C. Su fuerza de adsorción se verifica por la elución de 1 ml de una mezcla de testigos de plaguicidas para identificar el porcentaje de recuperación, así como para establecer las mezclas de solventes idóneas para la recuperación cuantitativa de los plaguicidas y la recuperación menor posible de sustancias que interfieren en la determinación cromatografía.

Para mejorar la separación de los plaguicidas de los carotenos y los sulfatos orgánicos procedentes de las muestras, cubrieron la superficie del Florisil con nitrato de plata (Beyer, 1981 y Thier, 1981 citados por Waliszewski, 2001 y Suzuki et al. 1979).

La purificación de los extractos en las columnas empacadas con Florisil se recomienda para los plaguicidas no polares o moderadamente polares (Viersino et al. 1971). Por ello, la estandarización del Florisil se realiza con compuestos relativamente no polares.

Los plaguicidas polares, como el Metamidofós, debido a su fuerte enlace con el adsorbente, son casi imposibles de recuperar. Cierta variación en la fuerza adsorbente del Florisil entre los lotes diferentes puede afectar la elución de los plaguicidas estudiados, lo que indica cambios importantes en el volumen de elución, especialmente para los plaguicidas más polares. Al cambiar a un lote nuevo, se recomienda realizar un estudio de elución para determinar el volumen de retención para los plaguicidas estudiados y evaluar el porcentaje de recuperación durante el proceso de purificación de la muestra.

ÓXIDO DE ALUMNIO

El óxido de aluminio se introdujo en el análisis de residuos de plaguicidas sustituyendo al Florisil, con la ventaja de su menor precio y condiciones constantes de adsorción. Para recuperar los residuos de plaguicidas de una columna de óxido de aluminio se utilizan los mismos solventes orgánicos

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recomendados para el Florisil; para mejorar la recuperación de los plaguicidas de una columna de óxido de aluminio, se procede a la desactivación previa con una determinada cantidad de agua.

Así, para el análisis Greve et al. (1974) citados por Waliszewski (2001), utilizaron óxido de aluminio Woelm básico desactivado con 9% de agua.

SILICAGEL

El gel de sílice o ácido silícico es uno de los más utilizados, es débilmente ácido, su pH oscila entre 4-5. Con lo cual no se deberá utilizar con sustancias que se corrompan con los ácidos. Los geles de sílice normales suelen contener impurezas de hierro y/o aluminio, este factor también se debe tener en cuentas respecto al uso de componentes. El tamaño del grano suele ser de 10 a 40 micras ( µ) y el tamaño de poro varía de 20 a 150Å.

Generalmente lleva incorporado un agente aglomerante, yeso (sulfato de cálcico semihidratado), para proporcionar firmeza al adsorbente. También han sido incorporados dos indicadores del ultravioleta, juntos o por separados (amarillo y/o verde), en diversos tipos de gel de sílice.

Se trata de un adsorbente polar, pero puede ser tratado con hidrocarburos para neutralizar los grupos -OH, de forma que se haga apto para separar componentes lipófilos (esteroides, ácidos grasos, ceras, vitaminas liposolubles, etc.). A este proceso se le denomina cromatografía de fase reversa.

10.- BIBLIOGRAFÍA

http://www4.ujaen.es/~esiles/TEMA3PROTEINASalumno.pdf

Abbott D. Y Andews R. S., Introducción a la Cromatoqrafía, 3a ed., Alhambra,

Madrid, 1970.

Ault A., Techniques and Experiments for Orqanic Chemistrv. University Science

Books. USA. 1998.

Ávila Z. G. et a/. Química Orsánica. Experimentos con un enfoque ecolóqico.

Dirección General de Publicaciones y Fomento Editorial, UNAM, México,

200'1.

Bates R.8., Schaefer J.P. Ténicas de lnvestiqación en Química Orsánica,

Prentice-Hall lnternacional. Madrid. 1977.

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