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Modulacin de la respuesta inmune por virus Antonio Alcami Pertejo Bases moleculares de la patogenia y del potencial anti-cncer viral Jos M. Almendral del Ro Ecologa Molecular de Ambientes Extremos Ricardo Amils Pibernat Divisin Celular Bacteriana y Resistencia a Antibiticos Juan Alfonso Ayala Serrano Biotecnologa y Gentica de Bacterias Termfilas Extremas Jos Berenguer Carlos VPPA: modelos virales de evasin y proteccin ngel L. Lpez Carrascosa Morfognesis bacteriana Miguel ngel de Pedro Montalbn Variabilidad gentica de Virus RNA Esteban Domingo Solans Expresin gnica en Streptomyces y levaduras Antonio Jimnez / Mara Fernndez Lobato Ingeniera de Virus Mauricio Garca Mateu Efectos de elementos extracromosmicos sobre el comportamiento de su husped Bacillus Wilfried J.J. Meijer
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Retrotranscriptasa del virus de la inmunodeficiencia humana y terapia antirretroviral Lus Menndez Arias Virus de la peste porcina Africana Maria Luisa Salas Falgueras Desarrollo de nuevas estrategias para el control y prevencin de enfermedades virales: el virus de la fiebre aftosa como modelo Francisco Sobrino
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Home Jefe de Lnea: Antonio Alcami Pertejo Postdoctorales: Ali Alejo Herberg Abel Viejo Borbolla Alberto Lpez Bueno Daniel Rubio Muoz Elena Merino Rodrguez Soledad Blanco Chapinal Imma Montanuy Sellart Juan Alonso Lobo Becarios Predoctorales: Marcos Palomo Otero Sergio Martn Pontejo Nadia Martnez Martn Carla Mavin Haleh Heidarieh Tcnicos de Investigacin: Roco Martn Hernndez Carolina Snchez Fernndez Cientficos visitantes: Joanne Devlin (University of Melbourne, Australia) Julia Fahel (Trinity College, Dublin, Ireland)
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Andrs G., Leali, D., Mitola, S., Coltrini, D., Camozzi, M., Corsini, M., Belleri, M., Hirsch, E., Schwendener, R. A., Christofori, Alcami, A. and Presta, M. (2009) A pro-inflammatory signature mediates FGF2-induced angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 13, 2083-2108. Waibler, Z., Anzaghe, M., Frenz, T., Schwantes, A., Phlmann, C., Ludwig, H., Palomo-Otero, M., Alcami, A., Sutter, G. and Kalinke, U. (2009) Vaccinia virus-mediated inhibition of type I interferon responses is a multi-factorial process involving the soluble type I interferon receptor B18 and intracellular components. J. Virol. 83, 1563-1570.
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Carson, C., Antoniou, M., Ruiz-Argello, M. B., Alcami, A., Christodoulou, V., Messaritakis, I., Blackwell, J. M. and Courtenay, O. (2009) A prime/boost DNA/Modified vaccinia virus Ankara vaccine expressing recombinant Leishmania DNA encoding TRYP is safe and immunogenic in outbred dogs, the reservoir of zoonotic visceral leishmaniasis. Vaccine 27, 1080-1086. Alcami, A. and Saraiva, M. (2009) Chemokine binding proteins encoded by pathogens. Adv. Exp. Med. Biol. 666, 167-179. Poole, E., Groves, I., Ho, Y., Benedict, C., Alcami, A. and Sinclair, J. (2009) Identification of TRIM23 as a co-factor involved in the regulation of NFkB by the human cytomegalovirus gene product UL144. J. Virol. 83, 3581-3590. Alejo, A., Ruiz-Argello, M. B., Viejo, A., Saraiva, M., Fernndez de Marco, M. M., Salguero, J. and Alcami, A. (2009) Adaptation of a transient dominant selection method to the generation of ectromelia virus recombinants: in vivo analysis of ectromelia virus CD30 deletion mutants. PLoS ONE 4(4):e5175. Alcami, A. and Viejo-Borbolla, A (2009) Identification and characterization of virus-encoded chemokine binding proteins. Methods Enzymol. 460, 173-191. Shang, L., Thirunarayanan, N., Viejo-Borbolla, A., Martin, A. P., Bogunovic, M., Marchesi, F., Unkeless, J. C., Ho, Y., Furtado, G. C., Alcami, A., Merad, M., Mayer, L. and Lira, S. A. (2009) Expression of the chemokine binding protein M3 promotes marked changes in the accumulation of specific leukocytes subsets within the intestine. Gastroenterology 137, 1006-1018. Lpez-Bueno, A., Tamames, J., Velzquez, D., Moya, A., Quesada, A. and Alcami, A. (2009) High diversity of the viral community from an Antarctic lake. Science 326, 858-861. Alejo, A. and Alcami, A. (2010) Chemokine binding proteins as therapeutics. In: Leurs, R., Smit, M. and Lira, S. (eds) Chemokine Receptors as Drug Targets. Wiley-VCH, Weinheim, Germany, pp.359-374. Rubio, N., Palomo, M. and Alcami, A. (2010) Interferon a/b genes are upregulated in murine brain astrocytes after Theilers murine encephalomyelitis virus infection. J. Interf. Cyt. Res. 30, 253-262. Viejo-Borbolla, A., Muoz, A., Tabares, E. and Alcami, A. (2010) Glycoprotein G from pseudorabies virus binds to chemokines with high affinity and inhibits their function. J. Gen. Virol. 91, 23-31. Fernandez de Marco, M. M., Alejo, A., Hudson, P., Damon, I. K. and Alcami, A. (2010) The highly virulent variola and monkeypox viruses express secreted inhibitors of type I interferon. FASEB J. 24, 1479-1488. Devlin, J. M., Viejo-Borbolla, A., Browning, G. F., Noormohammadi, A. H., Gilkerson, J. R., Alcami, A. and Hartley, C. A. (2010) Evaluation of immunological responses to a glycoprotein G deficient candidate vaccine strain of infectious laryngotracheitis virus. Vaccine 28, 1325-1332. Alcami, A. and Lira, S. A. (2010) Modulation of chemokine activity by viruses. Curr. Opin. Immunol. 22, 482-487. Alcami A. (2010) The interaction of viruses with host immune defenses. Curr. Opin. Microbiol. 13, 501-502. Viejo-Borbolla, A., Martin, A. P., Muniz, L. R., Shang, L., Marchesi, F., Thirunarayanan, N., Harpaz, N., Garcia, R. A., Apostolaki, M., Furtado, G. C., Mayer, L., Kollias, G., Alcami, A. and Lira, S. A. (2010) Attenuation of TNF-driven murine ileitis by intestinal expression of the viral immunomodulator CrmD. Mucosal Immunol. 3, 633-644. CBMSO 2009-2010
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Miembro de Editorial Board de Journal of Virology Consejero del World Health Organization Advisory Committee on Variola Virus Research Editor de un nmero especial de Curr. Opin. Microbiol. sobre Interacciones microbiohospedador: Virus, vol. 13, agosto 2010
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Home Jefe de Lnea: Jos M. Almendral del Ro Exit Personal Cientfico: Begoa Aguado Orea (*) Antonio Talavera Dez Ivn Ventoso Bande
Investigador Posdoctoral: Elena Domingo Gil Esther Grueso Hierro Francisco Hernndez-Torres (*) Estudiante de posgrado: Noelia Blanco Menndez Maria Elizalde Arbilla Ren Toribio Lpez Olatz Villate Bejarano (*) Alberto Rastrojo Lastras (*) Raquel Lpez-Dez (*) Estudiante: Marian Fernandez Estevez Julia Wienke (*)
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Blanco, AM, L Rausell, B Aguado, M Perez-Alonso, R Artero. (2009). A FRET-based assay for characterization of alternative splicing events using peptide nucleic acid fluorescence in situ hybridization. Nucleic Acids Research 37 e116. Riolobos, L., Valle, N., Hernando, E., Maroto, B., Kann, M., and J. M. Almendral. (2010). Viral oncolysis that targets Raf-1 signaling control of nuclear transport. J. Virol., 84, 2090-2099.
Ventoso, I., Berlanga, J.J., and J. M. Almendral. (2010). Translational control by the Protein Kinase R restricts Minute Virus of Mice infection: role in parvovirus oncolysis. J. Virol., 84, 5043-5051. Toribio R, Ventoso I. Inhibition of host translation by virus infection in vivo. (2010). Proc Natl Acad Sci USA. 107(21):9837-42.
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Home Olatz Villate. Splicing en el MHC de clase III: caracterizacin y expresin de las isoformas del gen NFkBIL1. Estudio de su relacin con artritis reumatoide. Directora, Begoa Aguado. Ren Toribio Lpez. Cambios traduccionales que regula la interaccin virus hospedador. Implicacin en el desarrollo de virus oncolticos. Director, Ivn Ventoso
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En el grupo de Biologa Molecular de Extremfilos se estn desarrollando en la actualidad dos lneas de investigacin: Ecologa Molecular de Ambientes Extremos: Esta rea de investigacin persigue los siguientes objetivos: Acidfilos: ecologa microbiana convencional (cultivos de enriquecimiento, aislamiento, fisiologa), ecologa molecular (DGGE, FISH, CARD-FISH, clonaje), biologa molecular (genmica, metagenmica, protemica, expresin diferencial de genes) y biotecnologa (control de la biolixiviacin, secuestro especfico de metales y fitorremediacin) de ambientes cidos extremos (la cuenca del Ro Tinto, distintas lagunas cidas de la Faja Pirtica Ibrica, ro Agrio (Argentina), zonas volcnicas de Islandia y la Antrtida). - Caracterizacin geomicrobiolgica de ambientes extremos como modelos de habitabilidad de inters astrobiolgico: la cuenca del Tinto (anlogo geoqumica de Marte), depsitos de sulfuros metlicos de la Antrtica (anlogo de Marte), la laguna hipersalina de Tirez (anlogo de Europa, en colaboracin con la profesora I. Marn del Dpto de Biologa Molecular de la UAM), el salar de Uyuni (anlogo de Europa, en colaboracin con la profesora I. Marn), reas volcnicas de Islandia y zonas de permafrost de Alaska (anlogos de Marte). - Geomicrobiologa del subsuelo de la Faja Pirtica Ibrica (IPB): distintas tcnicas se estn implementando para la caracterizacin del bio-reactor subterrneo en la IPB responsable de las condiciones extremas de la cuenca del Tinto. Este trabajo se est desarrollando en colaboracin con el Centro de Astrobiologa (Proyecto Origin IPBSL). - La lnea de ecologa microbiana de ambientes anaerobios, dirigida por el profesor J.L. Sanz (UAM) se est desarrollando en los nuevos laboratorios que el Departamento de Biologa Molecular tienen en el edificio de Biologa. Este trabajo de colaboracin est centrado en la caracterizacin de las actividades anaerobias en los distintos modelos de estudio del grupo de investigacin (cuenca del Tinto, IPB, laguna de Tirez). Micologa. Esta rea de investigacin est dirigida por el Dr. Aldo Gonzlez y tiene los siguientes objetivos: - Gentica molecular y microbiologa de Basidiomicetos (Pleurotas ostreatus como sistema modelo de estudio). - Uso de hongos filamentosos como fuente de metabolitos secundarios, encimas lignolticas y para secuestro especfico de metales. - Control y eliminacin de hongos de aire de interior.
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Posdoctorales: Moustafa Malki Monika Oggerin de Orube Lourdes Rufo Nieto Javier Ruiz Prez
Becarios predoctorales: Patxi San Martn Uriz Enrique Marn Palma Carlotta Vizioli Irene Snchez Andrea Tcnicos: Nuria Rodrguez Gonzlez Catalina del Moral Juarez Cientficos visitantes: Linda Amaral (MBL, Woods Hole, USA) Jim Field (Arizona State University, USA) Alberto Gonzlez Fiaren (NASA-Ames, USA) Eric Zettler (MBL, Woods Hole, USA)
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Fairen, A.G., Dvila, A.F., Duport, L.G., Amils, R., McKay, C.P. (2009) Nature, 459: 398-400. Fairen, A.G., Schulze-Makuch, D., Rodrguez, A.P., Fink, W., Dvila, A., Uceda, E.R., Furfaro, R., Amils, R., McKay, C.P. (2009) Planet. Space Sci., 57: 276-287.
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Daz-Garretas, B., Asensi, A., Rufo, L., Rodrguez, N., Snchez-Mata, D., Amils, R., de la Fuente, V. (2009) Northeastearn Naturalist, 16 : 56-64. Carnicero, D., Daz, E., Escolano, O., Rubinos, D., Ballesteros, O., Barral, M.T., Amils, R., Garca Frutos, F.J. (2009) Adv. Materials Research, 71-73: 677-680. Eugenio, M.E., Carbajo, J.M., Martn, J.A., Gonzlez, and A.E. Villar, J.C. (2009) J. Basic Microbiol. 49(5): 433-440. Gonzlez-Toril, E., Aguilera, A., Souza-Egipsy, V., Diez, M., Lpez-Pamo, E., Snchez-Espaa, J., Amils, R. (2009) Adv. Materials Research, 71-73: 113-116. Amils, R., Gonzlez-Toril, E., Aguilera, A., Rodrguez, N., Fernndez-Remolar, D., Daz, E., GarcaMoyano, A., Sanz, J.L. (2009) Adv. Materials Research, 71-73: 13-19. Garca-Moyano, A., Gonzlez-Toril, E., Amils, R. (2009) Adv. Materials Research, 71-73: 109-112. Gonzlez-Toril, E; Amils, R; Delmas, RJ, et al. 2009. Biogeosciences, 6(1): 33-44. de la Fuente, V., Rufo, L., Rodrguez, N., Amils, R., Zuluaga, J. (2009) Biol Trace Elem Res, DOI 10.1007/s12011-009-8471-1. Aguilera, A., Souza-Egipsy, V., Gonzlez-Toril, E., Rendueles, O., Amils, R. (2010). Internat. Microbiol., 13: 29-40. DOI: 10.2436/20,1501.01.109. Gonzlez-Toril, E., Aguilera, A., Rodrguez, N., Fernndez-Remolar, D., Gmez, F., Daz, E., GarcaMoyano, A., Sanz, J.L., Amils, R. (2010) Hydrometallurgy, 104: 329-333.
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Cid, C., Garcia-Descalzo, L., Casado-Lafuente, V., Amils, R., Aguilera, A. (2010) Proteomics, 10: 20262036 DOI 10.1002/pmic.200900592. Souza-Egipsy, V., Aguilera, A., Mateo-Mart, E, Martn-Gago, J.A., Amils, R. (2010). Geomicrobiol. J., 27: 692-706.
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Lalueza, J., Rius, A., Puig, R., Mart, E., Mart, J.F., Rodrguez, N., Amils, R. (2010). Journal of American Leather Chemists Association, 105: 210-221. Amaral-Zettler, L., Zettler, E.R., Theroux, S.M., Palacios, C., Aguilera, A., Amils, R. (20010) ISME J. doi:10.1038/ismej.2010.101.
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Arana-Cuenca, A., Tllez Jurado A., Yage, S., Fermian, E., Carbajo, J.M., Gonzlez, T., Domnguez, A., Villar, J.C., and Gonzlez, A.(2010) Forest Systems 19 (2): 234-240. Eugenio, M.E., Santos, S.M., Carbajo, J.M., Martn, J.A., Martn-Sampedro, R., Gonzlez, A.E., and Villar, J.C. (2010) Bioresources Technology 101(6): 1866-1870. Fairn, A.G., Chevier, V., Abramov, O., Marzo, G.A., Gavin, P., Davila, A.F., Tornabene, L.L. , Bishop, J.L., Roush, T.L., Gross, C., Kneissl, T., Uceda, E.R., Dohm, J.M., Schulze-Makuch, D., Rodrguez, J.A.P., Amils, R., McKay, C.P. (2010) PNAS (USA), doi/10.1073/pnas.1002889107.
Fairen, A. G., Dvila, A.F., Lim, D., Bramall, N., Bonaccorsi, R., Zavaleta, J., Uceda, E.R., Stoker, C.,, Wierzchos, J., Amils, R., Dohm, J.M., Andersen, D., McKay, C. (2010) Astrobiology, 821- 843. DOI:10.1089/ ast. 2009.0440. Fernndez-Remolar, D., Snchez-Romn, M., Amils, R. (2010) Sustainability, 2: 2541-2554, doi:10.3390/su2082541. Gmez; F., Mateo-Mart, E., Prieto.Ballesteros, O., Martn-Gago, J., Amils, R. (2010) Icarus, doi:10.1016/j. icarus.2010.05.027. Carbajosa, S., Malki, M., Caillard, R., Lpez, M.F., Palomares, F.J., Martn-Gago, J.A., Rodrguez, N., Amils, R., Fernndez, V.M., De Lacey, A.L. (2010) Biosensors and Bioelectronics, 26: 877-880. Fernndez-Remolar, D., Prieto-Ballesteros, O., Gmez-Ortiz, D., Fernndez-Sampedro, M., Sarrazin, P., Gailhanou, M., Amils, R. (2010) Icarus, 211: 114-138. Menor-Salvn, C., Tornos, F., Fernndez-Remolar, D., Amils, R. (2010) Earth Planet. Sci. Lett., doi: 10.1016/j.epsl.2010.09.020.
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Captulos de libros: Cinco captulos de libro. Libros: Amils, R., Segura, J. (2010) Ro Tinto viaje a Marte, ediciones Alfar (Sevilla).
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Home Amils, R. Malki, M., Fernndez, V., de Lacey, A.L. Ttulo: Electrodo bacteriano aerbico para nodo de una pila de combustible sin mediadores redox ni membrana intercambiadora de protones. N de solicitud: 200701534. Fecha de concesin: 23/12/2009
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Home Los objetivos de nuestro grupo son el estudio desde un punto de vista molecular del proceso de crecimiento y divisin bacteriana y de los diversos mecanismos de resistencia a los antibiticos b-lactmicos, que se han desarrollado por los microorganismos patgenos de origen clnico. Dentro de este esquema general, hemos desarrollado varios aspectos, por un lado la caracterizacin molecular de b-lactamasas de la familia CTX-M, su mecanismo de movilizacin y el origen ltimo de la subfamilia CTX-M-1. As como la identificacin de las PBPs y el estudio de su implicacin en los mecanismos de resistencia en estirpes anaerobias y en bacterias entricas Gram-negativas. Una nueva familia de PBPs, perteneciente al COG1680, que presenta homologa a b-lactamasas de clase C y puede estar implicada en la morfognesis bacteriana est siendo estudiada en un nuevo proyecto. Basado en el anlisis de la estructura del peptidoglicano en mutantes de PBP4 en Aeromonas hemos propuesto un modelo de induccin de la expresin de b-lactamasa mediado por un sistema de dos componentes (ver figura adjunta). Durante la divisin celular, la concentracin de protenas en el anillo de divisin tiene el efecto de constriccin de la membrana y la produccin de un tabique de la pared celular. La sntesis de este tabique peptidoglicano involucra un conjunto de enzimas dedicadas, como las protenas de unin a penicilina. Hemos logrado la purificacin de varias de estas enzimas (PBP1B, PBP3, y variantes inactivas), junto con un buen nmero de sustratos (incluyendo sculos, como la estructura ms grande disponible, peptidoglicano fragmentado y precursores de menor tamao como lpido II y UDP muramil-pentapptido) para conseguir el establecimiento de un ensayo de screening de inhibidores in vitro.
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Figura 2. Actividad DD-endopeptidasa de AmpH identificada por HPLC. Los picos corresponden a M4.NAcGlc-NAcMur-tetrapptido, M5.- NAcGlc-NAcMurpentapptido, D45.- Disacrido-tetra-pentapptido, y C.- cefmetazol.
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Home Jefe de Lnea: Juan Alfonso Ayala Serrano Exit Postdoctoral: Silvia Marina Gonzlez Leiza Becarios Predoctorales: Cristian Gustavo Aguilera Rossi Alaa Ropy Mahmoud Sayed Estudiantes: Godofrey Cherry Yasemin Ezgi Ertrk Andrs Caballero Laura Vuolo Jose Roberto Angeles Vzquez Nicolas Cordeiro Ana Fernndez Gonzlez Sorelis Urdaneta Fernndez Lucia Lozano Paula Andrea Espinal Mara Margarita Bernal Cientficos visitantes: Ayelen Patricia Porto (Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina) Ana Catarina Souza Lopes (Universidade Federal de Pernambuco, Brasil) Bartolome Moya (Universidad Islas Baleares, Mallorca) Judith J. Velasco (Universidad de los Andes, Mrida, Venezuela) -Jzsef Ski University of Szeged, -Elizabeth Nagy University of Szeged, -Gabriella Terhes (University of Szeged, Szeged, Hungary) Sergei Borchsenius (Institute of Cytology, RAS, Saint-Petersburg, Russia)
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D. Korsak, Z. Markiewicz, G. O. Gutkind, and J. A. Ayala. (2010) Identification of the full set of Listeria monocytogenes penicillin-binding proteins and characterization of PBPD2 (Lmo2812). BMC Microbiology, 10:239-251 Ins Bado, Nicols F. Cordeiro, Luciana Robino, Virginia Garca-Fulgueiras, Vernica Seija, Cristina Bazet, Gabriel Gutkind, Juan A. Ayala, and Rafael Vignoli. (2010). Detection of class 1 and 2 integrons, extendedspectrum -lactamases and qnr alleles in enterobacterial isolates from the digestive tract of Intensive Care Unit inpatients. Intern. J. Antimicrob. Agents, 36(5):453-458 A.C.S. Lopes, D. Leal Veras, A.M.S. Lima, R.C. Andrade Melo, and J.A. Ayala. (2010). bla(CTX-M-2) and bla(CTX-M-28) extended-spectrum beta-lactamase genes and class 1 integrons in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae from Brazil.. MIOC. 105(2):163-167. Amy E. Tayler, Juan A. Ayala, Pannika Niumsup, Katrin Westphal, Timothy R. Walsh, Bernd Wiedemann, Peter M. Bennett, and Matthew B. Avison. (2010). Induction of beta-lactamase production in Aeromonas hydrophila is responsive to beta-lactam-mediated changes in peptidoglycan composition. Microbiology. 156(Pt 8):2327-35. Porto, Ayeln; Ayala, Juan; Gutkind, Gabriel; and Di Conza, Jos. (2010). A novel OXA-10-like -lactamase is present in different Enterobacteriaceae. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 66:228-229. M. Macedo-Vias, N. F. Cordeiro, I. Bado, S. Herrera-Leon, M. Vola, L. Robino, R. Gonzalez-Sanz, S. Mateos, F. Schelotto, G. Algorta, J. A. Ayala, A. Echeita and R. Vignoli. (2009). Surveillance of antibiotic resistance evolution and detection of class 1 and 2 integrons in human isolates of multiple resistant Salmonella Typhimurium obtained in Uruguay from 1976 to 2000. International Journal of Infectious Diseases, 13:342-348.
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Home Profesor Ad Honorem, Facultad de Medicina, Universidad de la Republica, Uruguay Julio, 2009. Exit
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Empleamos la bacteria termfila extrema Thermus thermophilus (Tth) como modelo de trabajo principal. Tth crece muy rpido a 70 C, forma colonias sobre placas, y presenta competencia natural. Como otros termfilos sus enzimas cristalizan mejor que sus homlogas de mesfilos, convirtindolo en un excelente modelo en Biologa Estructural. Su filogenia ancestral tambin aade inters biolgico y evolutivo al modelo. Empleando Tth perseguimos objetivos tanto biotecnolgicos como bsicos. Biotecnologa: i) Sobreproducimos y empleamos enzimas termostables para biotransformaciones en colaboracin con grupos externos especializados en biocatlisis; ii) Evolucionamos enzimas y protenas de forma dirigida para incrementar su estabilidad mediante seleccin in vivo o para aumentar la actividad especfica a baja temperatura; y iii) Desarrollamos nuevas herramientas genticas para su uso en termfilos. A lo largo de los ltimos dos aos hemos sobreproducido ms de 50 termozimas (deshidrogenasa, esterasas, y glicosidadas) y llevado a cabo procesos de seleccin de variantes termoestables de tres protenas. A nivel ms bsico, estudiamos el metabolismo energtico de Tth, especficamente la respiracin de xidos de nitrgeno desnitrificacin-, su control gentico, y los mecanismos implicados en su transferencia lateral (LGT). Mediante secuenciacin genmica hemos descubierto que el proceso es catalizado por un grupo de reductasas codificadas por un megaplsmido en una isla gentica de desnitrificacin (DI) transferible horizontalmente. La DI concentra la informacin para permitir el reemplazamiento de los complejos respiratorios I y III por enzimas ms sencillas o por otras con doble funcin como reductasa-transportador de electrones. En la DI tambin se encuentran codificados nuevos sistemas de deteccin-transmisin de seales que le permiten seleccionar los componentes de su cadena respiratoria de acuerdo con seales medioambientales. En los prximos aos continuaremos con estos estudios e iniciaremos el anlisis de mecanismos no convencionales que previenen la LGT entre especies bacterianas.
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Figura 1. El aparato de desnitrificacin de Thermus thermophilus. Se muestra un esquema de la localizacin y papel de la NADH deshidrogenasa (Nrc) y de las reductasas de nitrato (Nar), nitrito (Nir) y xido ntrico (Nos). Observe el papel de Nar como transportador de electrones reemplazando al complejo III. El paso de electrones se indica como flechas rojas.
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Home Jefe de Lnea: Jos Berenguer Carlos Exit Personal Cientfico: Aurelio Hidalgo Huertas Postdoctorales: Daniel Vega Leticia Torres Becarios Predoctorales: Federico Acosta Eloy Ferreras Puente Zahra Chahlafi Marcos Almendros Gimenez Laura lvarez Muoz Carlos Bricio Garber No Rigoberto Rivera Yamal Al-Ramahi Gonzlez Martin Hesseler Estudiantes: Alba M Sanchez Nio, Akbar Espaillat Fernndez ngel Cantero Camacho Daan Swarts Tcnico de Investigacin: Esther Snchez Freire Maria Jos de Soto Lpez Cientficos visitantes: Estariette van Heerden Koos Albertin Derek Litthauer Godfrey Tlou Philip Armand Bester Mariana Erasmus Novalanda Betty Mabizela Susana Alarico Hernn Costa
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Larsen,M., Zielinska, D.F., Martinelle, M., Hidalgo, A., Jensen, L., Bornscheuer, U.T. and Hult, K. (2010) Suppression of water as a nucleophile in Candida antarctica lipase B catalysis. ChemBioChem 11,796-801. Cava, F, Hidalgo, A., and Berenguer, J. (2009) Thermus thermophilus as biological model. Extremophiles, 13, 213-231. Schliemann, A., Hidalgo, A., Berenguer, J. and Bornscheuer, U.T (2009). Increased Enantioselectivity by Engineering Bottleneck Mutants in an Esterase from Pseudomonas fluorescens. ChemBioChem 10,29202923 (cover feature). Rocha-Martin, J., Vega D., Cabrera Z, Bolivar JM. Fernandez-Lafuente R., Berenguer J. and Guisan, J.M. (2009) Purification, immobilization and stabilization of a highly enantioselective alcohol dehydrogenase from Thermus thermophilus HB27 cloned in E. coli. Proccess in Biochemistry, 44,1004-1012. Bolivar J.M., Rocha-Martin J., Mateo C., Cava F., Berenguer, J, Vega D. , Fernandez-Lafuente R., Guisan J.M. (2009) Purification and stabilization of a glutamate dehygrogenase from Thermus thermophilus via oriented multisubunit plus multipoint covalent immobilization. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 58, 158-163. Almendros M., Sinisterra JV, and Berenguer J. (2009) Thermus thermophilus Strains Active in Purine Nucleoside Synthesis. Molecules 2009, 14, 1279-1287. Bolivar J.M, Rocha-Martin J. Mateo C., Cava F., Berenguer J., Fernandez-Lafuente R., Guisan J. M. (2009) Coating of soluble and immobilized enzymes with ionic polymers: full stabilization of the quaternary structure of multimeric enzymes. Biomacromolecules 10, 742-747 Bolivar J., Mateo, C., Rocha-Martin, Cava F., Berenguer J., Fernandez-Lafuente R., Guisan J. M. 2009. The adsortion of multimeric enzymes on very lowly activated supports involves more enzyme subunits: stabilization of glutamate dehydrogenase from Thermus thermophilus by immobilization on heterofunctional supports. Enzyme Microb. Technol. 44, 139-144. Cava, F., Chahlafi, Z., Alavare, L., and Berenguer, J. (2009) Respiracin y desnitrificacin en Thermus thermophilus. In: Bonete, M. J., and Martnez-Espinosa R. M. (ed) Avances en el metabolismo del nitrgeno. Editorial Club Universitario, Alicante. pp. 173-186.
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Home Procedimiento de inmovilizacin de una glutamato deshidrogenasa. PCT/ES2008/070166. Exit Nuevo marcador termoestable para la seleccin gentica de Thermus spp P200603279. (Concesin 28-05-2010).
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Home Durante los ltimos aos hemos investigado sobre lneas celulares susceptibles al Virus de la Peste Porcina Africana (VPPA) para la produccin y titulacin de aislados virales tanto de campo como de laboratorio, as como para la generacin de virus recombinantes con genes especficos delecionados. Estos mutantes de delecin se utilizan para profundizar el estudio del papel de una serie de genes relacionados con la evasin de la respuesta antiviral celular en el proceso infectivo, y pueden servir como modelos virales atenuados en la generacin de posibles vacunas que induzcan inmunidad protectiva contra la PPA. En este sentido hemos confirmado el papel de la lectina del VPPA (gen EP153R) en la modulacin de la expresin de los antgenos MHC-I en la membrana de la clula infectada y estamos inactivando diversos genes virales en un aislado (NHV) parcialmente atenuado, que ha sido capaz de generar proteccin cruzada contra otro aislado virulento (L60), pero que mantiene una virulencia residual demasiado elevada para ser aceptado como vacuna. Las lneas celulares de origen porcino susceptibles al VPPA se estn utilizando tambin para determinar los niveles de diversas citoquinas inducidos por aislados virales con distintos grados de virulencia, en la bsqueda de un perfil de virulencia/atenuacin, cuya consecucin supondra en la prctica la reduccin sustancial de las infecciones in vivo para la determinacin del grado de virulencia de los aislados virales. Otro objetivo de nuestro Grupo es la optimizacin del uso de antivirales no convencionales tipo lauril galato en la prevencin y/o tratamiento de enfermedades virales de inters clnico y veterinario. Hemos determinado su baja citotoxicidad y su eficacia en la inhibicin de la produccin de diversos virus (VPPA, influenza, herpes,) en clulas infectadas en el laboratorio, y pretendemos ampliar el estudio sobre el grado de proteccin que pueden conferir estos antivirales en infecciones in vivo.
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Home Jefe de Lnea: ngel L. Lpez Carrascosa Exit Postdoctoral: Patricia de Len Valds Estudiantes: Alba Martnez Flrez Tcnico de Investigacin: Maria Jos Bustos Snchez
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Hurtado, C., Bustos, M. J. and Carrascosa, A. L. (2010). The use of COS-1 cells for studies of field and laboratory African swine fever virus samples. J. Virol. Methods 164, 131-134.
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Hurtado, C., Bustos, M. J., Granja, A. G., de Len, P., Sabina, P., Lopez-Vias, E., Gomez-Puertas, P., Revilla, Y., and Carrascosa, A. L. (2010). The African swine fever virus lectin EP153R modulates the surface membrane expression of MHC class I antigens. Arch. Virol. DOI: 10.1007/s00705-010-0846-2.
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Morfognesis bacteriana
Resumen de Investigacin
Home Nuestro tema central es la investigacin, a nivel estructural y molecular, de la pared bacteriana (sculo o capa de peptidoglicano) como elemento morfogentico primario de la clula procaritica. En la actualidad nos centramos en el estudio de los procesos de diferenciacin celular, adaptacin y generacin de distintos apndices (prostecas, flagelos, pili tipo IV y hold-fast) en alfa-proteobacterias, principalmente Asticcacaulis biprosthecium, y otras bacterias de morfologa compleja. Pretendemos extender el conocimiento adquirido en organismos de ciclo celular simple como Escherichia coli a otros ms complejos como A. biprosthecium. Esta bacteria presenta un ciclo celular dimrfico, con una fase mvil flagelada que da lugar por un proceso de diferenciacin a una forma sesil con dos prostecas (prolongaciones de forma tubular) en posiciones laterales (ver figura). Slo la forma ssil es capaz de dividirse dando lugar a clulas flageladas mviles que entran en un nuevo ciclo de diferenciacin. Investigamos como se modifica y regula el metabolismo y estructura de la pared celular en consonancia con las distintas etapas del proceso de diferenciacin morfolgica y como se produce el crecimiento y diferenciacin de las prostecas y otros elementos celulares con topologa definida en el espacio y el tiempo (flagelo, pili, hold-fast). Recientemente hemos emprendido una nueva lnea centrada en el descubrimiento de un sistema de regulacin del metabolismo de la pared celular mediado por la produccin de D-amino cidos en Vibrio cholerae y otras bacterias. Este sistema es parte de la respuesta general a estrs, y tiene el potencial de poder actuar como sistema de sealizacin inter e intra especfico. Adems mantenemos colaboraciones para el anlisis de aspectos estructurales y biosintticos de la pared celular en otros organismos como Listeria monocitogenes, o Leptospira biflexa asociados a morfologas peculiares o al establecimiento de relaciones simbiticas o patolgicas.
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Morfognesis bacteriana
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Resumen de Investigacin
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Figura 2. Clulas de Vibrio cholera creciendo activamente (A) y en fase estacionaria (B) visualizadas por ESM.
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Morfognesis bacteriana
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Jefe de Lnea: Miguel ngel de Pedro Montalbn Becarios Predoctorales: Said Taimani Estudiantes: Marisela Domnguez Domnguez Mara Hidalgo Garca Irene Cartas
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Morfognesis bacteriana
Publicaciones
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Lam, H, Oh, D.C., Cava, F., Takacs, C.N., Clardy, J., de Pedro, M.A. and Waldor, (2009) D-amino acids govern stationary phase cell wall remodeling in bacteria. Science 325:1552-1555.
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de Pedro, M.A. (2009). Peptidoglycan (Murein), In Encyclopedia of Microbiology. (Moselio Schaechter, Ed.), pp. 453-469, Oxford: Elsevier.
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Home El inters principal del grupo es entender las bases moleculares de la extincin de virus RNA por mutagnesis letal y explorar protocolos antivricos empleando agentes mutagnicos e inhibidores. Hemos documentado una doble accin mutagnica e inhibidora del 5-fluorouracilo durante la replicacin del virus de la fiebre aftosa (VFA) y caracterizado mutantes del VFA resistentes al anlogo mutagnico de purinas ribavirina. En particular, hemos descrito un cambio de aminocido en la polimerasa del VFA capaz de evitar la accin detrimental de la ribavirina mediante la modulacin del tipo de mutaciones producidas por la droga. La supervivencia del virus por modulacin de tipos de mutaciones, sin alterar la fidelidad de la polimerasa, constituye un nuevo mecanismo de resistencia a un agente mutagnico. A pesar de la presencia de mutaciones de resistencia a agentes mutagnicos, la extincin de virus puede lograrse con tratamientos mutagnicos alternativos. Contrariamente a lo establecido para tratamientos antivirales clsicos, una administracin secuencial primero de un inhibidor y despus de un agente mutagnico puede ser ms ventajosa que la administracin simultnea de ambos para la extincin de virus. Como paso importante para entender implicaciones del comportamiento de virus como cuasiespecies, se ha caracterizado una dinmica de competicin y colonizacin entre subpoblaciones de VFA surgidas en clulas en cultivo por diversificacin de un clon biolgico del virus. Nuestro laboratorio ha participado en colaboraciones con otros grupos de virologa terica y experimental acerca de aspectos estructurales de la polimerasa de VFA y sobre implicaciones biolgicas de cuasiespecies, incluyendo nuevos diseos vacunales. Las colaboraciones se pueden identificar por los autores de las publicaciones incluidas en este resumen.
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Figura 1. Estrategia antiviral basada en la extincin de virus mediante el aumento de la tasa de error durante su replicacin.
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Home Jefe de Lnea: Esteban Domingo Solans Exit Postdoctorales: Celia Perales Viejo Vernica Martn Garca Armando Arias Esteban Julie Sheldon
Becarios Predoctorales: Rubn Agudo Torres Marta Sanz-Ramos Rojo Samuel Ojosnegros Martos Hctor Moreno Borrego Hctor Tejero Franco Ignacio de la Higuera Ana M Ortega Prieto Tcnicos de Investigacin: Ana Isabel de vila Lucas Eva Garca Cueto Isabel Gallego Jimnez M Eugenia Soria Benito
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Home N. Sevilla, E. Domingo, C. Escarms, S. Ojosnegros, J. Garca-Arriaza, M. Sanz-Rojo, T. Rodrguez (2009) Vacuna atenuada para la fiebre aftosa. PCT1641.49. Entidades titulares: CSIC (70%), Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias (30%). E. Domingo, R. Agudo, H. Tejero, S.C. Manrubia, C. Perales (2009) Tratamiento antiviral. P200930482. Entidades titulares: CSIC (41%), Instituto Nacional de Tcnica Aeroespacial (18%), Universidad Complutense de Madrid (18%), Centro de Investigaciones Biomdicas en Red de Enfermedades Hepticas y Digestivas (CIBERehd) (23%).
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Home Samuel Ojosnegros Martos (2009) Dinmica evolutiva de virus RNA. Universidad Autnoma de Madrid. Director: Esteban Domingo Solans. Exit Rubn Agudo Torres (2009) Caracterizacin de las protenas del virus de la fiebre aftosa implicadas en respuesta a mutagnesis letal por anlogos de nucletido. Universidad Autnoma de Madrid. Director: Esteban Domingo Solans. Marta Sanz-Ramos Rojo (2009) Dinmica de cuasiespecies del virus de la fiebre aftosa in vivo. Universidad Autnoma de Madrid. Director: Esteban Domingo Solans.
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Streptomyces y levaduras son microorganismos productores de un gran nmero de molculas de inters biotecnolgico. El grupo est interesado en conocer el mecanismo de regulacin de la expresin de protenas implicadas en algunos de estos procesos biosintticos y en la obtencin de nuevas molculas de posible utilidad industrial. Durante los ltimos dos aos hemos continuado el estudio del cluster ata de Streptomyces capreolus responsable de la sntesis del antibitico nucleosdico A201A, y de distintas protenas con actividad glicosiltransferasa de levaduras que puedan ser empleadas en la obtencin de distintas molculas con propiedades prebiticas.
Un 44% de la masa de A201A lo constituyen residuos glucdicos que estn implicados en el control de las propiedades biolgicas-farmacolgicas del antibitico. Se han caracterizando y estudiando, en organismos heterlogos, los genes implicados en la incorporacin y posterior modificacin de estos residuos. Nos planteamos obtener nuevas molculas con actividad antibitica basndonos en la flexibilidad de sustrato que muestran las glicosiltransferasas implicadas en procesos similares previamente descritas. Las protenas que pueden sintetizar molculas prebiticas, caracterizadas en nuestro grupo, se han aislado de distintas levaduras incluidas en los gneros Xanthophyllomyces, Schwanniomyces y Rhodotorula; todas son hidrolasas con actividad transferasa y pueden incluirse en la familia 32, 31, 1 y 2 de las glicosilhidrolasas. Conocer la relacin que existe entre su estructura, funcin y especificidad es uno de nuestros objetivos principales. Para ello, estamos realizando estudios estructurales (hemos resuelto ya la estructura 3-D de algunas de ellas), realizando mutaciones puntuales y aplicando tcnicas de evolucin molecular dirigida. Pretendemos aumentar/modificar la actividad transferasa de estas enzimas para favorecer su utilizacin industrial. Hemos patentado ya en distintos pases la aplicabilidad industrial de la mayora de ellas, diseado un mtodo eficaz para su fijacin a soportes slidos y pretendemos escalar hasta un nivel industrial tanto su produccin como la de los productos generados.
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Figura 1. (A) Vista del centro activo de la Ffasa de Schwanniomyces occidentalis acomplejado con fructosa, 1-kestosa (verde; izquierda) y 6-kestosa (amarillo; derecha). El centro activo de la Ffasa (azul) est delimitado por la subunidad adyacente (naranja). (B) Fructan 1-exohidrolasa IIa de Cichorium intybus (CiFEH) acomplejada con 1-kestosa y (C) invertase de Thermotoga maritima acomplejada con rafinosa.
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Home Jefe de Lnea: Antonio Jimnez / Mara Fernndez Lobato Exit Becarios Predoctorales: Miguel de Abreu Felipe Miguel lvaro Benito Dolores Linde Lpez Patricia Gutirrez Alonso Brian Molloy Galiana Estudiantes: David Gonzlez Prez Marta Estvez Canales Hugo Muoz Tcnico de Investigacin: Asuncin Martn Redondo Cientficos Visitantes: Vctor Cifuentes (Chile) Marcelo Baeza (Chile)
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Linde, D., Macias, I., Fernndez-Arrojo, L., Plou, F.J., Jimnez, A. and Fernndez-Lobato, M. (2009) Molecular and biochemical characterization of an fructofuranosidase from Xanthophyllomyces dendrorhous. App Env Microbiol. 75(4), 1065-1073.
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Gutirrez-Alonso, P., Fernndez-Arrojo, L., Plou, F.J. and Fernndez-Lobato, M. (2009) Biochemical characterization of a b-fructofuranosidase from Rhodotorula gracilis with transfructosylating activity. FEMS Yeast Research. 9, 768-773. Polo, A., lvaro-Benito, M., Fernndez-Lobato, M. and Sanz-Aparicio, J. (2009) Crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of thefructofuranosidase from Schwanniomyces occidentalis. Acta Cryst. 65, 1162-1165.
Baeza, M., Retamales, P., Sepulveda D., Lobato P., Jimenez A. and Cifuentes V. (2009) Isolation, characterization and long term preservation of mutant strains of Xanthophyllomyces dendrorhous. J. Basic Microbiol. 49, 135-141. Alvaro-Benito, M., Polo, A., Gonzlez, B., Fernndez-Lobato, M. and Sanz-Aparicio, J. (2010) Structural and kinetic analysis of Schwanniomyces occidentalis invertase reveals a new oligomerization pattern and the role of its supplementary domain in substrate binding. J. Biol. Chem. 285 (18), 13930-14941. Polo, A., Linde, D., Estvez, M., Fernndez-Lobato, M. Julia Sanz-Aparicio, J.. (2010). Crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of the fructofuranosidase from Xanthophyllomyces dendrorhous. Acta Cryst. 66, 1441-1444. lvaro-Benito, M., de Abreu, M., Portillo, F., Snz-Aparicio, J. and Fernndez-Lobato, M. (2010). New insights into the fructosyltransferase activity of Schwanniomyces occidentalis -fructofuranosidase emerges from a non-conventional codon usage and directed mutation. App. Env. Microbiol. 76 (22), 7491-7499.
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Home L. Fernndez Arrojo, F. Plou, A. Ballesteros, M. Alcalde, P. Gutierrez Alonso, M. Fernndez-Lobato (2009). Biocatalizador inmovilizado basado en alginato para la biotransformacin de carbohidratos. N P200930001. PCT-ES2010/070104 (24 -2- 2010). Titular: CSIC-UAM. M. Fernndez-Lobato, M. Alvaro Benito (2009). Fructofuranosidasa mejorada genticamente para la obtencin del prebitico 6-kestosa. N P0200930929 (29-12-2009). Titular: UAM.
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Home Brian Molloy Galiana (2010). Expresin heterloga del cluster biosinttico del antibitico A201A y estudio de las posibles glicosiltransferasas implicadas en su biosntesis. Universidad Autnoma de Madrid. Director: Mara Fernndez-Lobato. Mara Dolores Linde Lpez (2010). Caracterizacin bioqumica, molecular y estructural de una b-fructofuranosidasa con capacidad trasferasa de la levadura Phaffia rhodozyma aplicable a la produccin de oligosacridos prebiticos. Universidad Autnoma de Madrid. Director: Mara Fernndez-Lobato.
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Ingeniera de Virus
Resumen de Investigacin
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Utilizamos tcnicas de ingeniera de protenas para el estudio de relaciones entre estructura y funcin en virus y sus cpsidas, y para el diseo y anlisis de partculas vricas modificadas con posibles aplicaciones en nanobiotecnologa (Mateu (2011). Prot.Eng. Des.Sel. 24, 53-63). Relevancia cientfica e implicaciones tecnolgicas: Conocimiento en profundidad de ciertas etapas del ciclo vrico, incluyendo ensamblaje, dinmica conformacional y desensamblaje de virus; diseo de vacunas, antivirales y nanopartculas para la liberacin dirigida de frmacos. Algunos resultados recientes: i) Mediante ingeniera de protenas hemos aumentado la estabilidad trmica del virus de la fiebre aftosa (FMDV) frente a su disociacin en subunidades. Estamos investigando las bases moleculares de esta termoestabilizacin y las posibilidades vacunales de estos virus modificados. ii) Hemos realizado un estudio extensivo de mutaciones compensatorias en la cpsida de FMDV, y estamos investigando los mecanismos moleculares por los que ocurre la compensacin. iii) En colaboracin con P.J. de Pablo y J. Gmez (Depto. Fsica Materia Condensada, UAM), hemos investigado en el virus diminuto del ratn (MVM) el papel de la estructura de poros y cavidades en las propiedades mecnicas de la partcula vrica, mediante microscopa de fuerzas atmicas (tcnica que utilizamos en nuestro laboratorio). Hemos encontrado evidencia de que las propiedades mecnicas encontradas pueden haber sido evolutivamente seleccionadas para optimizar la resistencia del virus a agentes fsicos, pero permitiendo los cambios conformacionales necesarios para su infectividad. iv) En colaboracin con J.L.Neira (CBMC) y M.A.Martnez (IRSI-Caixa) estamos investigando la capacidad de diferentes pptidos sintticos y otras molculas para inhibir el ensamblaje de la cpsida del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y la infectividad del virin, con vistas al diseo de agentes anti-HIV. v) En colaboracin con G.Rivas (CIB) hemos demostrado en dos sistemas vricos modelo que, en condiciones fisiolgicas de aglomeracin molecular, antivirales de pequeo tamao reducen su actividad.
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Ingeniera de Virus
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Figura 2. Localizacin en la estructura de la cpsida de FMDV (A) de un conjunto de mutaciones letales en las interfases entre subunidades pentamricas (B, en color blanco), y del conjunto de las diferentes mutaciones compensatorias que restauraron la infectividad (C, en verde o naranja).
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Ingeniera de Virus
Home Jefe de Lnea: Mauricio Garca Mateu Exit Postdoctoral: Rebeca Prez Fernndez Becarios Predoctorales: Rebeca Bocanegra Rojo Milagros Castellanos Molina Inmaculada Lpez Prez Pablo Jos Prez Carrillo Vernica Rincn Forero Tcnicos de Investigacin: Miguel ngel Fuertes Villadangos Alicia Rodriguez Huete
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Ingeniera de Virus
Publicaciones
Carrasco, C., Douas, M., Miranda, R., Castellanos, M., Carrascosa, J.L., Mateu, M.G., Marqus, M. and de Pablo, P.J. (2009). Action of capillary forces of water confined at the nanoscale during dessication of viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106, 5475-5480. (A) Serena, P.A., Douas, M., Marqus, M.I., Carrasco, C., de Pablo, P.J., Miranda, R., Carrascosa, J.L., Castellanos, M. and Mateu, M.G. (2009). MC simulations of water meniscus in nanocontainers: explaining the collapse of viral particles due to capillary forces. Phys. Status Solidi C 6, 2128-2132. Mateu, M.G. (2009). Capsid protein interactions in human immunodeficiency virus type 1 assembly. FEBS J. 276, 6098-6109. Luna, E., Rodriguez-Huete, A., Rincn, V., Mateo, R. and Mateu, M.G. (2009). A systematic study of the genetic response of a variable virus to the introduction of deleterious mutations in a functional capsid region. J.Virol. 83, 10140-10151. Martn-Acebes, M., Rincn, V, Mateu, M.G. and Sobrino, F. (2010). A single amino acid substitution in the structural protein VP3 of foot-and-mouth disease virus can increase acid-lability and confer resistance to acid-dependent uncoating inhibition. J.Virol. 84, 2902-2912. Domenech, R., Abin, O., Bocanegra, R., Correa, J., Sousa-Herves, A., Riguera, R., Mateu, M.G., Fernndez-Mega, E., Velzquez-Campoy, A. and Neira, J.L. (2010) Dendrimers bind the homodimerization interface of the capsid protein of HIV-1. Biomacromolecules 11, 2069-2078.
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Otras Actividades
Mauricio G. Mateu, miembro del Editorial Board de Virus Research
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Ingeniera de Virus
Patentes
Patente OEPM n 2 323 929 (Vacuna frente a la fiebre aftosa). Concedida junio 2010.
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Ingeniera de Virus
Tesis Doctorales
Eva Luna Garca (2010). Aproximaciones a la obtencin de cpsidas ms estables del virus de la fiebre aftosa y estudio de la generacin de mutaciones compensatorias. Universidad Autnoma de Madrid. Director: Mauricio G. Mateu.
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Figura 1. Microscopa de contraste de fase de la esporulacin de clulas de B. subtilis portadoras del plsmido pLS20.
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Home Jefe de Lnea: Wilfried J.J. Meijer Exit Becarios Predoctorales: Praveen K. Singh Gayetri Ramachandran
Estudiantes: Esther Serrano Sandra Ballestero Beltrn Tcnico de Investigacin: Adriana Marulanda Aguirre
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Singh, P. K., Ballestero-Beltrn, S., Ramachandran, G. and Meijer, W.J.J. (2010) Complete nucleotide sequence and determination of the replication region of the sporulation inhibiting plasmid p576 of Bacillus pumilus NRS576. Res. Microbiol. 161, 772-782.
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Muoz-Espn, D., Daniel, R., Kawai, Y., Carballido-Lpez, R., Castilla-Llorente, V., Errington, J.*, Meijer, W.J.J.*, and Salas, M.* *: contributed equally. (2009) The actin-like MreB cytoskeleton organizes viral DNA replication in bacteria. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. July 27 Epub ahead of print. Castilla-Llorente, V., Meijer, W.J.J., and Salas, M. Differential Spo0A-mediated effects on transcription and replication of the related Bacillus subtilis phages Nf and f29 explain their different behaviours in vivo. (2009) Nucleic Acids Res. 37: 4955-4964. Castilla-Llorente, V., Salas, M., and Meijer, W.J.J. (2009) Different responses to Spo0A-mediated suppression of the related Bacillus subtilis phages Nf and f29. Environ. Microbiol. 11: 1137-49.
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Home El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es un retrovirus que infecta preferentemente a clulas del sistema inmune y provoca el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Actualmente, el tratamiento de la infeccin por el VIH se basa en la utilizacin de inhibidores de enzimas del virus como la retrotranscriptasa (RT), la proteasa y la integrasa, adems de frmacos que actan bloqueando la entrada del VIH en la clula hospedadora. Las terapias combinadas que incluyen dos o tres inhibidores de la RT han demostrado una gran eficacia clnica. Sin embargo, la aparicin de virus resistentes, la existencia de reacciones cruzadas entre distintos frmacos, adems de sus efectos secundarios son factores que hipotecan su utilidad a largo plazo. Nosotros estamos interesados en el estudio de dianas teraputicas en el VIH, con un enfsis particular en la RT. Esta enzima es la responsable de la replicacin del ARN que constituye el material gentico del virus. Recientemente nuestros esfuerzos se han dirigido hacia la consecucin de dos objetivos importantes: (1) entender el papel que juegan distintos aminocidos en la especificidad de nucletido y en la fidelidad de copia de la enzima; y (2) determinar cules son los mecanismos moleculares implicados en resistencia a inhibidores de la RT y cul es la contribucin de los distintos cambios de aminocido en la adquisicin de resistencia. Adems, los estudios de la especificidad de nucletido de la RT pueden servirnos para desarrollar nuevas herramientas de utilidad en biologa molecular. Por ejemplo, RTs ms fieles y estables a temperaturas elevadas, con aplicaciones importantes en estudios de expresin gnica. Finalmente, la extensin de estos anlisis a otras actividades catalticas de la RT (por ejemplo, ribonucleasa H), o al proceso de iniciacin de la retrotranscripcin puede abrir nuevas posibilidades en el diseo de estrategias teraputicas para el tratamiento de la infeccin por el VIH.
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Figura 2. Cinticas de reacciones de escisin de iniciadores bloqueados con AZT-monofosfato, llevadas a cabo con complejos ADN/ADN y variantes de la retrotranscriptasa del VIH-1.
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Jefe de Lnea: Luis Menndez Arias Postdoctoral: Mar lvarez Garca Tania Matamoros Grande Becarios Predoctorales: Vernica Barrioluengo Fernndez Gilberto J. Betancor Quintana Mnica Kisic Aguirre Estudiantes: Raquel N. Afonso Lehmann Daniela Barbieri Yasemin Ezgi Ertrk Luis Goslbez Cisneros-Miret Cristina Jimnez Snchez
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lvarez, M., Matamoros, T. and Menndez-Arias, L. (2009) Increased thermostability and fidelity of DNA synthesis of wild-type and mutant HIV-1 group O reverse transcriptases. J. Mol. Biol. 392, 872-884. De Mendoza, C., Anta, L., Garca, F., Prez-Elas, M.J., Gutirrez, F., Llibre, J.M., Menndez-Arias, L., Dalmau, D., Soriano, V., on behalf of Platform for Drug Resistance of the Spanish AIDS Research Network (2009) HIV-1 genotypic drug resistance interpretation rules 2009 Spanish guidelines. AIDS Rev., 11, 39-51. Garriga, C., Prez-Elas, M.J., Delgado, R., Ruiz, L., Prez-lvarez, L., Pumarola, T., Lpez-Lirola, A., Gonzlez-Garca, J. and Menndez-Arias, L., on behalf of the Spanish Group for the Study of Antiretroviral Drug Resistance (2009) HIV-1 reverse transcriptase thumb subdomain polymorphisms associated with virological failure to nucleoside drug combinations. J. Antimicrob. Chemother. 64, 251-258.
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Matamoros, T., Nevot, M., Martnez, M.A. and Menndez-Arias, L. (2009) Thymidine analogue resistance suppression by V75I of HIV-1 reverse transcriptase: Effects of substituting Valine 75 on stavudine excision and discrimination. J. Biol. Chem. 284, 32792-32802. Menndez-Arias, L. (2009) Mutation rates and intrinsic fidelity of retroviral reverse transcriptases. Viruses 1, 1137-1165; doi:10.3390/v1031137 Puertas, M.C., Buzn, M.J., Artese, A., Alcaro, S., Menndez-Arias, L., Perno, C.F., Clotet, B., CeccheriniSilberstein, F. and Martinez-Picado, J. (2009) Effect of the human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase polymorphism Leu-214 on replication capacity and drug susceptibility. J. Virol. 83, 7434-7439. Betancor, G., Puertas, M.C., Nevot, M., Garriga, C., Martnez, M.A., Martinez-Picado, J. and MenndezArias, L. (2010) Mechanisms involved in the selection of HIV-1 reverse transcriptase thumb subdomain polymorphisms associated with nucleoside analogue therapy failure. Antimicrob. Agents Chemother. 54, 4799-4811. Clotet, B., Menndez-Arias, L., Schapiro, J. M., Kuritzkes, D., Burger, D., Telenti, A., Brun-Vezinet, F., Geretti, A. M., Boucher, C. A. and Richman, D. D. (eds.) (2010) Guide to management of HIV drug resistance, antiretrovirals pharmacokinetics and viral hepatitis in HIV infected subjects, 10th Edition, Fundaci de Lluita contra la SIDA, Barcelona, Spain, 422 pp. Menndez-Arias, L. (2010) Special issue: Retroviral enzymes. Viruses 2, 1181-1184 (editorial). Menndez-Arias, L. (2010) Molecular basis of human immunodeficiency virus drug resistance: An update. Antiviral Res. 85, 210-231.
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Editor de un nmero especial de la revista Viruses dedicado a Retroviral enzymes (2009/2010) Miembro del comit de formacin de la Red de Investigacin en SIDA (RIS) y co-organizador de la Tercera Reunin Docente de la Red (San Lorenzo de El Escorial, 7-9 de octubre de 2009)
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L. Menndez Arias, T. Matamoros, M. lvarez (2010). Retrotranscriptasa del VIH-1 de grupo O modificada. Ref.: PCT/ES2010/070320.
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Reparacin del DNA del virus de la peste porcina africana (VPPA). Actualmente, nuestro objetivo es estudiar la funcin biolgica de la DNA polimerasa reparativa, pol X, del VPPA, que participa, junto con la endonucleasa AP y la DNA ligasa viral, en un sistema de reparacin por escisin de bases (BER). Nuestros estudios muestran que la pol X se requiere para la replicacin del virus en su clula blanco, el macrfago porcino, y protege a la clula infectada frente a agentes genotxicos oxidantes. Ms an, la pol X del VPPA es necesaria para mantener la estabilidad del genoma, reparando mutaciones introducidas en el DNA del virus durante la infeccin, lo que subraya la importancia de su funcin in vivo. Morfognesis del VPPA. La biognesis de las membranas del VPPA es uno de los temas de mayor inters y ms controvertidos en el estudio de la morfognesis del virus. Con el fin de abordar estos estudios estamos utilizando recombinantes del VPPA que expresan induciblemente protenas estructurales de membrana que se localizan en la envuelta interna del virus. Recientemente, hemos identificado un nuevo intermedio morfogentico, constituido por estructuras helicoidales de membrana que son precursoras de las partculas virales icosadricas. Para conocer mejor la estructura de estos intermedios helicoidales, estamos utilizando actualmente tcnicas de tomografa electrnica y otras tcnicas avanzadas de microscopa electrnica para la resolucin de estructuras tridimensionales. Otro objetivo de nuestros estudios sobre morfognesis es conocer mejor la regulacin del procesamiento de las poliprotenas pp220 y pp62 del VPPA, que son componentes mayoritarios del core viral y cuyo procesamiento proteoltico es esencial para la maduracin del virus. Nuestros resultados indican la existencia de mecanismos redox que podran operar durante el ciclo infectivo regulando la actividad de la proteasa viral que lleva a cabo dicho procesamiento.
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Home Jefe de Lnea: Maria Luisa Salas Falgueras Exit Postdoctorales: Modesto Redrejo Rodrguez Cristina Surez Garca Becarios Predoctorales: Cristina Surez Garca Marina del Rosal Macas Tcnico de Investigacin: Mara Luisa Nogal Pars Mara Jos Bustos Snchez Esther Martn Forero CientficosVisitantes: Mara Ballester Devis
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Redrejo-Rodrguez, M., Ishchenko, A. A., Saparbaev, M. K., Salas, M. L. and Salas, J. (2009) African swine fever virus AP endonuclease is a redox-sensitive enzyme that repairs alkylating and oxidative damage to DNA. Virology 390, 102-109.
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Rodrguez, I., Nogal, M. L.,Redrejo-Rodrguez, M., Bustos, M. J.and Salas, M. L. (2009) The African swine fever virus virion membrane protein pE248R is required for virus infectivity and an early postentry event. J. Virol. 83, 12290-12300. Surez, C., Salas, M. L. and Rodrguez, J. M. (2010) African swine fever virus polyprotein pp62 is essential for viral core development. J. Virol. 84, 176-187. Surez, C., Gutirrez-Berzal, J., Andrs, G., Salas, M. L. and Rodrguez, J. M. (2010) The African swine fever virus protein p17 is essential for the progression of the viral membrane precursors towards icosahedral intermediates. J. Virol. 84, 7484-7499. Ballester, M., Galindo-Cardiel, I., Gallardo, C., Argilaguet, J. M., Segals, J., Rodrguez, J. M. and Rodrguez, F. (2010) Intranuclear detection of African swine fever virus DNA in several cell types from formalin-fixed and paraffin-embedded tissues using a new in situ hybridization protocol. J. Virol. Methods 168, 38-43.
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M. L. Salas y J. M. Rodrguez (CSIC), L. K. Dixon (IAH). (2010). Vacuna contra el virus de la peste porcina Africana basada en virus recombinantes deficientes en replicacin. N Solicitud: ES1641.748.
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Desarrollo de nuevas estrategias para el control y prevencin de enfermedades virales: el virus de la fiebre aftosa como modelo
Resumen de Investigacin
El virus de la fiebre aftosa (VFA) constituye un interesante modelo, de gran importancia econmica, para entender como las interacciones entre un virus con gran capacidad de variacin y sus diferentes hospedadores naturales condicionan el control de la enfermedad que produce. Se est trabajando en el desarrollo de nuevas vacunas marcadoras frente al VFA (pptidos y vacunas DNA) que induzcan respuestas humorales y celulares protectoras - empleando como principal modelo animal un importante hospedador natural de ste virus: el cerdo - y en el anlisis de su inmunogenicidad. Algunas de las estrategias desarrolladas estn siendo empleadas para el desarrollo de nuevas vacunas frente a otra importante enfermedad viral animal, la peste porcina clsica (PPC). Se trabaja, tambin, en el anlisis funcional de distintas protenas virales en la internalizacin, el ciclo de multiplicacin y los mecanismos que median la patogenicidad del VFA y de otros virus que causan enfermedades vesiculares similares, como el virus de la enfermedad vesicular del cerdo (VEVC) y el virus de la estomatitis vesicular (VSV), en cultivos celulares y modelos animales. Se presta especial atencin a las implicaciones funcionales de las protenas no estructurales en la virulencia y el rango de hospedador virales, mediante el estudio de sus interacciones con diferentes componentes celulares. A su vez, se est llevando a cabo un estudio paralelo de las implicaciones funcionales de regiones no codificantes del ARN viral. Adems de informacin bsica sobre el ciclo de multiplicacin de estos virus, los resultados obtenidos estn siendo empleados para la identificacin de dianas antivirales y determinantes de atenuacin viral, as como para el desarrollo de nuevas estrategias vacunales. Como parte de estos estudios se est caracterizando la capacidad del cido valproico para inhibir la multiplicacin de diferentes virus con envoltura, recientemente identificada. Parte de este trabajo ha sido desarrollado en las instalaciones BSL3 del CISA-INIA.
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Desarrollo de nuevas estrategias para el control y prevencin de enfermedades virales: el virus de la fiebre aftosa como modelo
Resumen de Investigacin
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Desarrollo de nuevas estrategias para el control y prevencin de enfermedades virales: el virus de la fiebre aftosa como modelo
Home Jefe de Lnea: Francisco Sobrino Exit Personal Cientfico: Margarita Siz Postdoctoral: Maria Flora Rosas Becarios Predoctorales: Ral Postigo Miguel ngel Martn Mara Teresa Snchez Miguel Rodrguez Yuri A. Vieira ngela Vzquez Flavia Caridi Estudiantes: Susan Realgen Abraham Arrizon Maria Rodolis Jackob Zimmermann Tcnicos de Investigacin: Mnica Gonzlez Cientfico Visitante: Beln Borrego (CISA-INIA)
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Desarrollo de nuevas estrategias para el control y prevencin de enfermedades virales: el virus de la fiebre aftosa como modelo
Publicaciones
Rodrguez-Pulido, M., Sobrino, F., Borrego, B., Siz, M. (2009) RNA. Attenuated foot-and-mouth disease virus RNA carrying a deletion in the 3 non-coding region can elicit immunity in swine J. Virol.. 83, 3475-3485.
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Martn-Acebes, M.A., Gonzlez-Magaldi, M., Vzquez-Calvo, A., Armas-Portela, R. and Sobrino, F. (2009) Internalization of swine vesicular disease virus into cultured cells: a comparative study with foot-and-mouth disease virus. J. Virol. 83, 4216-4266 Sanchez-Aparicio, M.T., Rosas,M-F., Ferraz, R.M., Delgui, L., Veloso, J.J., Blanco, E, Villaverde, A. and Sobrino, F. (2009) Discriminating foot-and-mouth disease virus-infected and vaccinated animals by use of -galactosidase allosteric biosensors. Clin. Vaccine Immunol.16, 1228-1235 Martn-Acebes, MA., Rincn, V., Armas-Portela, R., Mateu, M.G. and Sobrino, F. (2010). A single amino acid substitution in the capsid of foot-and-mouth disease virus can increase acid-lability and confer resistance to acid-dependent uncoating inhibition. J. Virol. 84, 2902-2912 Rodrguez-Pulido, M., Sobrino, F., Borrego, B. and Siz, M. (2010). RNA immunization can protect mice against foot-and-mouth disease virus. Antiviral Res. 85, 556558. Martn-Acebes, M.A., Herrera, M., Domingo, E. and Sobrino, F. (2010). Cell density-dependent expression of viral antigens during persistence of foot-and-mouth disease virus in cell culture. Virology 403, 4755.
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Desarrollo de nuevas estrategias para el control y prevencin de enfermedades virales: el virus de la fiebre aftosa como modelo
Patentes
Construccin peptdica dendrimrica para la prevencin de la fiebre aftosa en animales Inventores: C. Cubillo, E. Blanco, J. Brcena, F. Sobrino y D. Andreu. N de solicitud: P 200602142. Fecha de prioridad: 2-08-2006. Solicitud PCT (08/2007) N PCT ES 2007/070146. Uso del cido valproico como antiviral contra virus con envoltura. A. Vazquez, F. Sobrino, M.A. Martn y J.C. Siz. No Solicitud: P 200602142 (29 marzo 2010).
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Desarrollo de nuevas estrategias para el control y prevencin de enfermedades virales: el virus de la fiebre aftosa como modelo
Tesis Doctorales
Miguel ngel Martn Acebes (2009). Mecanismos de entrada y de organizacin del complejo de replicacin del virus de la fiebre aftosa: estudio comparativo con el virus de la enfermedad vesicular del cerdo y el virus de la estomatitis vesicular. Universidad Autnoma de Madrid. Co-dirigida por F. Sobrino y R. Armas. Miguel Ramn Rodrguez Pulido. Julio 2009. Estructura y funcin de la regin 3 no codificante del virus de la fiebre aftosa. Aplicacin a nuevas estrategias vacunales basadas en RNA. Universidad Autnoma de Madrid. Director: M. Siz. Ral Postigo Fernndez. Octubre 2009. Anlisis funcional de la protena 3A del virus de la fiebre aftosa. Universidad Autnoma de Madrid. Co-dirigida por F. Sobrino y M.F. Rosas. Mara Teresa Snchez Aparicio. Abril 2010. Estudio de protenas no estructurales del virus de la fiebre aftosa: anlisis funcionales y aplicacin al diagnstico viral. Co-dirigida por F. Sobrino y M.F. Rosas. Universidad Autnoma de Madrid.
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