FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD E.A.

P DE TECNOLOGIA MDICA Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica VI SEMESTRE AREA: VIROLOGIA

NOMBRES Y APELLIDOS - Masco Jove Leonel Jefferson - Huayta Chuara Yessica DOCENTE Lic TM Zena Lyz Alejandro FECHA DE ENTREGA 06 de Noviembre de 2013

PRACTICA N 4 TECNICAS DE OBTENCION E INOCULACION DE MUESTRAS EN RATONES

A. OBJETIVOS ESPECIFICOS - Desarrollar las habilidades indispensables para el manejo y sujecin de las principales especies de roedores utilizados como mascotas. - Se detallan las caractersticas generales del manejo para cada especie, las tcnicas de administracin de sustancias y drogas y de recoleccin de sangre. Instrumental Guantes descartables Agujas, catteres EV Jeringas Tubos de extraccin.

Peladora y/o bistur Elementos de contencin

o o o o Cajas de contencin Prensa Tubo de PVC Lazos

Tubos de hematocrito Eppendorf, vaso precipitado, etc. Algodn Agua oxigenada Etanol, Xylol Tubo de goma o bandas elsticas Anticoagulantes EDTA Quelante de Calcio Heparina Protrombina Citrato de sodio Ionizacin de Calcio

Tcnica n 01.

Extraccin de sangre de Seno Retro-orbital

Anestesia: Obligatoria Material: Capilares tratados con anticoagulante (EDTA, heparina) Restricciones: Esta tcnica debe ser llevada a cabo nicamente cuando no exista mtodo alternativo y siempre por personal cualificado debido al elevado riesgo de daar estructuras adyacentes al globo ocular, lo que puede originar infecciones severas, ceguera etc Volumen de extraccin:Volumen medio de 0.1-0.5 ml Descripcin de la tcnica: 1. Una vez anestesiado el ratn y comprobado que se ha alcanzado el plano quirrgico, sujetar al ratn estirando la piel del cuello hacia atrs asegurndose de no dificultar la respiracin Insertar el capilar en el ngulo externo del ojo (2 mm aprox) y girar suavemente hasta que la sangre fluya por el mismo. Recoger la muestra y retirar el capilar. Oprimir ligeramente la zona de puncin con una gasa o papel para detener la hemorragia. Aplicar pomada oftlmica (Lubrifilm) al ojo. Comprobar que la recuperacin de la anestesia se produce adecuadamente aportando las medidas que se consideren necesarias para ello (i.e , aporte de calor ) Observar al animal los das posteriores al sangrado para detectar la aparicin de posibles complicaciones: protrusin de tejido adyacente al ojo, infecciones, hemorragias

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3. 4.

5. 6.

7.

Anastesiamos al roedor

Procedemos a la extraccin e la muestra

Tcnica n 02.

Extraccin de sangre de cola

Anestesia: En funcin de la edad y seccin de cola que se quiera obtener. Material: Escalpelo, tijeras o cauterizador elctrico. Longitud mxima de la muestra: 5 mm Requerimientos: 1. La longitud mxima a cortar es de 5 mm. De este fragmento se obtienen Muestras mayores a 5 mm requerirn autorizacin expresa del Comit tico del centro. La edad ptima para la realizacin de este procedimiento es de 15 a 21 das, antes de la calcificacin de las ltimas vrtebras. Requerimientos de anestesia: - Ratones de menos de 28 das: anestesia no requerida. - Ratones de ms de 28 das: anestesia requerida para muestras de ms de 2 mm - Segunda biopsia: anestesia requerida independientemente de la longitud de la muestra a tomar. Este procedimiento no debe ser desarrollado ms de dos veces en el mismo ratn sin permiso del Comit tico de Experimentacin Animal.

2. 3.

4. Descripcin de la tcnica:

1.

Inmovilizar al ratn en una mano o bien introducirlo en los cepos destinados a tal efecto. Con las tijeras (previamente esterilizadas en llama), el escalpelo o cortacolas elctrico, seccionar 2 mm de la cola. Presionar la zona del corte con papel para detener la hemorragia.

2.

3.

4. No devolver al ratn a su jaula hasta comprobar que el sangrado se detiene completamente.

Tcnica n 03.

Extraccin de sangre cardiaca

Anestesia: No requerida Material: Aguja 25G (ratn y rata) Volumen mximo: 2-3 ml (ratn) 5-10 ml (rata) Inoculaciones mximas: 2-3 inoculaciones por da pH inoculacin: Fisiolgico (aprox. 7). Consultar Anexo 2.

Descripcin de la tcnica: 1. 2. Anastesiar al raton Una ez anastesiado el raton colocarlo en una posiscion adecuada para percibir los latidos del corazn Insertar la jeringa y obtener la muestra sangunea

3.

Tcnica n 04.

Inoculacin Subcutnea (SC o SQ)

Anestesia: No requerida Material: Aguja 25G (ratn y rata) Volumen mximo: 2-3 ml (ratn) 5-10 ml (rata) Inoculaciones mximas: 2-3 inoculaciones pH inoculacin: Fisiolgico (aprox. 7). Descripcin de la tcnica: 4. Depositar al ratn sobre la rejilla permitindole agarrarse a ella con las patas delanteras y levantar la piel de la espalda con los dedos ndice y pulgar tal y como se muestra en la figura 2. De igual manera puede hacerse en la regin inter-escapular. 5. Insertar la aguja en la base de la zona de piel que estamos sujetando manteniendo la aguja paralela al cuerpo del ratn para evitar inocular en capas inferiores a la piel. 6. Aspirar ligeramente para asegurarnos de no haber penetrado en algn vaso sanguneo. 7. Inyectar el volumen de muestra a una velocidad moderada. 8. Retirar la aguja y presionar la piel en la zona de inyeccin para evitar que el fluido salga por el punto de piel perforada. 9. Observar que no se produce sangrado. 10. Debido a que la muestra se deposita en la zona subcutnea, y si sta se ha desarrollado correctamente, podremos observar la formacin de un abultamiento en el lugar de inyeccin que ir desapareciendo a medida que el fluido es dispersado.

Tcnica n 05.

Inoculacin Intramuscular (IM)

Anestesia: No requerida. Material: Aguja 27G (ratn) 25G (rata) Lugar de inoculacin de eleccin: Cuadriceps Volumen mximo: Inoculaciones mximas: 2 inoculaciones pH inoculacin: Fisiolgico Descripcin de la tcnica: 1. 2. 3. 4. Pueden ser necesarias dos personas para el correcto procedimiento de esta tcnica, una para sujetar al animal y otra para la inoculacin. Sujetar firmemente la pata trasera del animal y proceder a la insercin de la aguja en el sitio de inoculacin. Aspirar ligeramente para asegurarse de que no se ha perforado ningn vaso sanguneo. El contenido de la jeringuilla debe ser expelido muy lentamente y la zona de inyeccin masajeada cuidadosamente una vez realizada la inoculacin.