SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA, TURISMO Y ALIMENTOS LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS RECUENTO DE Clostridium SULFITO REDUCTORES

JUAN GUILLERMO CUBILLOS HINOJOSA

Microbilogo Agroindustrial

1. INTRODUCCION Algunas de las especies del gnero Clostridium tienen la propiedad de reducir el ion sulfito a sulfuro que en presencia de citrato frrico o cualquier otra sal (metales pesados) forman colonias de color negro. El recuento de esporas es considerado como el indicador ms importante de las bacterias anaerobias capaces de formar esporas. Estas estructuras de supervivencia suelen presentarse en alimentos enlatados que no han sido producidos bajo condiciones de calidad en cada proceso y malas condiciones de almacenamiento. 2. OBJETIVOS Adquirir destreza en el recuento de esporas de Clostridium sulfito reductor. Analizar los resultados obtenidos por la muestra analizada conforme a la normatividad.

3. MATERIALES Tubos con 9mL de agua peptonada. Erlenmeyer con 90mL de agua peptonada. Pipetas Micropipeta Puntas azules Tubos de 10mL estriles Gradillas Jarra de anaerobiosis Bao de Mara Agar Sulfito Polimixina Sulfadiazina (SPS) Incubadora Cuchillos, tenedores y cuchara Balanza Papeles de pesado

4. METODOLOGIA Preparacin de la muestra Realizar diluciones seriadas hasta 10-3 bajo cabina de flujo laminar. Procedimiento 1. 2. 3. 4. 5. 6. Pipetear 1mL de cada una de las diluciones en tubos estriles. Colocar los tubos en bao de Mara a 80C durante 10min. Dejar enfriar rpidamente en agua corriente. Verter 9 mL del Agar SPS en los tubos mediante siembra en profundidad. Agitar y dejar solidificar. Colocar las cajas en camara de anaerobiosis e incubar a 35C+/-2 durante 72 horas.

1mL de dilucin

la

Bao de Mara a 80C durante 10min

Adicionar 9mL del Agar SPS agitar y dejar solidificar e Incubar 35C+/-2 durante 72 horas

Realizar el recuento entre 550 colonias negras

5. LECTURA DE RESULTADOS Se recomienda observar los tubos a las 24, 48 y 72 horas debido a que los microorganismos pueden producir a las 24 horas H2S tornndo el medio de cultivo de color negro, impidiendo su lectura. Se deben seleccionar las cajas que presenten recuentos entre 15-150 colonias.

6. EXPRESION DE LOS RESULTADOS Se calcula el nmero N de Clostridium sulfito reductores presentes en 1 ml 1 g del producto, usando la siguiente ecuacin:

Donde: a es la suma de las colonias de Clostridium sulfito reductores contadas en todas las cajas de dos diluciones sucesivas, una de las cuales contiene al menos 15 colonias. n1 es el nmero de cajas guardadas en la primera dilucin. n2 es el nmero de cajas retenidas en la segunda dilucin. d es el factor de dilucin correspondiente a la primera dilucin retenida.

Los resultados se redondean a dos cifras significativas. Se toma como resultado el nmero de Clostridium sulfito reductores por mililitro o por gramo de producto, expresado como un nmero entre 1,0 y 9,9, multiplicado por la potencia de 10 apropiada. 7. BIBILOGRAFIA ICONTEC. 2000. Norma Tcnica Colombiana NTC 4834. Microbiologa de alimentos y alimentos para animales. Mtodo horizontal para el recuento de Clostridium sulfito reductores e identificacin de Clostridium perfringens. tcnica de recuento de colonias. ICONTEC. 2009. Norma Tcnica Colombiana NTC 4092. Microbiologa de alimentos y productos para alimentacin animal. Requisitos generales y directrices para anlisis microbiolgicos. INVIMA. 1998. Manual de tcnicas de anlisis para control de calidad microbiolgico de alimentos para consumo humano.