ESTUDIO PORMENORIZADO DE ALGUNAS PROTENAS

Hemoprotenas: Hemoglobina y Mioglobina

Hemoprotenas
Son protenas conjugadas cuyo grupo prosttico es una porfirina
coordinada a un ion metlico. Suelen estar relacionadas con todos los aspectos del metabolismo aerbico.

Transportadores
mioglobina.

de

oxgeno

como

la

hemoglobina

la

Clorofilas: porfirinas coordinadas a un ion Mg++.

Transportadores electrnicos como los citocromos.

Enzimas relacionadas con el transporte electrnico como la citocromo oxidasa.

Enzimas

relacionadas

con el stress

oxidativo, como las

peroxidasas.
Coenzimas cobamdicas o corrinoides. (vit. B12).

HEMO A: CITOCROMO OXIDASA

CH2 H3C CH

N HO CH3 N Fe++ N N

CH3

CH2 CH2 COO-

O C H

CH2 CH2 COO-

HEMO C: CITOCROMO C
H 3C CH2 CH2 S Cys 17

Cys 14 S CH2

CH2 N CH3

N Fe++ N N

CH3

CH2 CH2 COO-

H3 C

CH2 CH2 COO-

Citocromo c

Met 80

Fe Cys 14

Cys 17 His 18

Hemo c Entorno del grupo hemo en el citocromo c

Clorofilas

CH2

R:
CH3 en clorofila a CHO en clorofila b

H3C

CH

N Mg++ N O N O CH3 O C O C O Fe++ N

CH2 CH3

CH3

Bacterioclorofila

Transporte en sangre de O2
1 L de sangre arterial desprende 200 mL de O2 STP. Dada su poca solubilidad, es de suponer que la mayora circula en forma de alguna combinacin qumica. En efecto, el oxgeno circula en combinacin con la hemoglobina, presente a la concentracin de 145 g/L en sangre, toda ella en el interior del hemate (eritrocito, gbulo rojo), a su vez en cantidad de unos 5 x 106 por mL. El peso molecular de la hemoglobina es de 64000 (2.2 mmoles.L-1); los 200 mL de O2 suponen 8.8 mmoles.L-1; por tanto, el transporte se hace en razn de 8.8/2.2 = 4 moles de oxgeno por mol de hemoglobina.

Teniendo en cuenta que en la molcula de hemoglobina hay cuatro tomos de hierro, podemos decir que el transporte tiene lugar en una proporcin de un mol de oxgeno por mol de hierro. La sangre arterial est equilibrada con una presin parcial de oxgeno de aproximadamente 95-100 mm Hg. La sangre venosa est equilibrada con una presin parcial de oxgeno de aproximadamente 40 mm Hg.

La sangre arterial est saturada prcticamente a 100 %; la venosa, un 70 %. Por tanto, el paso por los tejidos perifricos desprende un 30 % del oxgeno combinado con la hemoglobina.

Hemoglobina: protena globular, conjugada y oligomrica.

Grupo prosttico: hemo hemo: protoporfirina IX + ion ferroso Fe2+ Cuatro subunidades, iguales dos a dos: Hemoglobina A1 (HbA1): a2b2 Hemoglobina A2 (HbA2): a2d2 Hemoglobina fetal (HbF): a2g2 Hemoglobina Gower 1: z2e2 Hemoglobina Gower 2: a2e2 Hemoglobina Portland: z2g2 Se conoce, adems, un gran nmero de hemoglobinas mutantes.

Grupo Hemo b: Protoporfirina IX + Fe

CH2 H3C CH

H2C CH N CH3

N Fe++ N N

CH3

CH2 CH2 COO-

H3C

CH2 CH2 COO-

Hlice F

Fe++

Entorno del grupo hemo en la mioglobina

His 93

Hlice E

Tanto en la hemoglobina como en la mioglobina, el hierro siempre est en estado ferroso, Fe ++.

Cuando el ion ferroso, Fe++ se oxida a frrico, Fe +++, la hemoglobina se convierte en metahemoglobina, que no es funcional.
Conviene no confundir metahemoglobina con oxihemoglobina, que es la forma oxigenada (pero no oxidada) de la hemoglobina.

Desoxihemoglobina + 4O2

Oxihemoglobina

Homologa de secuencia a - b - Mioglobina

Cadena a Cadena b Mioglobina V-LSPADKTNVKAAWGKVGAHAGEYGAEALERMFLSFPTTKTYFPHF-DLSH-----GSA 53 VHLTPEEKSAVTALWGKV--NVDEVGGEALGRLLVVYPWTQRFFESFGDLSTPDAVMGNP 58 -GLSDGEWQLVLNVWGKVEADIPGHGQEVLIRLFKGHPETLEKFDKFKHLKSEDEMKASE 59 *: : * **** . * *.* *:: .* * * * .*. ..

Cadena a Cadena b Mioglobina

Cadena a Cadena b Mioglobina

QVKGHGKKVADALTNAVAHVDDMPNALSALSDLHAHKLRVDPVNFKLLSHCLLVTLAAHL 113 KVKAHGKKVLGAFSDGLAHLDNLKGTFATLSELHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLAHHF 118 DLKKHGATVLTALGGILKKKGHHEAEIKPLAQSHATKHKIPVKYLEFISECIIQVLQSKH 119 .:* ** .* *: . : : .. : .*:: *. * :: :.::.. :: .* :

PAEFTPAVHASLDKFLASVSTVLTSKYR------ 141 GKEFTPPVQAAYQKVVAGVANALAHKYH------ 146 PGDFGADAQGAMNKALELFRKDMASNYKELGFQG 153 :* . .:.: :* : . . :: :*:

Hlice C

Hlice D

Hlice B

Subunidad b

Subunidad a

Mioglobina

Situacin del grupo hemo

a1
b2

b1

a2

Hemoglobina A1 (forma T, desoxi-)

a1

b2

b1

a2

Hemoglobina A1 (forma R, oxi-)

Hlice F

Entorno del grupo hemo en la desoxihemoglobina

His 87 (a) His 92 (b)

Hlice E

Entorno del grupo hemo en la oxihemoglobina

O2 Hlice F

His 87 (a) His 92 (b)

Hlice E

Saturacin de O2 en Mioglobina y Hemoglobina

100

80

Mioglobina

Saturacin de O2, %

60

40

Hemoglobina
20

0 0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg

100

Vol., Mb
80

Saturacin de O2, %

60

Vol., Hb

40

20

0 0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg

Concepto de P50
100

80

Saturacin de O2, %

60

40

20

0 0 20 40 60 80 100

P50 Mb

P50 Hb

PO2, mmHg

Efecto del pH sobre la saturacin de la hemoglobina

(Efecto Bohr)
100

80

pH 7.0 pH 7.4

Saturacin de O2, %

60

pH 6.6
40

20

0 0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg

Efecto de la presin parcial de CO2

100

80

Saturacin de O2, %

60 mmHg
60

40 mmHg 80 mmHg

40

20

0 0 20 40 60 80 100

PO2, mm Hg

Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG) sobre la saturacin de la hemoglobina

100

80

Saturacin de O2, %

0
60

0.1 mM 1 mM

40

20

0 0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg

Forma R, oxis L s s

Modelo MWC

s s s

s s s s

i
i Forma T, desoxii i

i i i

i i

Contacto a-a, desoxihemoglobina

a
H2 N Arg 141 C COO+

(CH2)3

C NH2+ NH H3 N

OOC CH2 C Asp 126

(CH2)4 Val 1

Lys 127

H 3N C

Contacto a-a
Arg 141 (C-t)

Asp 126

Arg 141 (C-t)

a2 a1
Asp 126 Lys 127

a2

Lys 127

a1
DesoxiOxi-

Contacto a-b, desoxihemoglobina

a
H2N Arg 92 (CH2)3 C C NH2+ NH
-

OOC CH2

CH2 C Glu 43

Lys 40

(CH2)4 NH3+

OOC CH CH2

HN NH

His 146 (C-t)

Contacto a-b
His 146 (C-t)

His 146 (C-t) Lys 40

b
Glu 43

b a
Arg 92
Desoxi-

Lys 40

Glu 43

a
Arg 92

Oxi-

Contacto a-b

b
Asp 99

b
Asp 99

Tyr 42

a
Forma T, desoxi-

a
Tyr 42
Forma R, oxi-

Contacto b-b, desoxihemoglobina

Asp 94 C CH2 COO

+

HN

NH CH2 C His 146

Contacto b-b
His 2 His 143 His 2 Val 1

Val 1
Lys 82

His 143

Lys 82 Lys 82 Val 1

His 2 2,3-BPG Forma T, desoxiHis 2 Forma R, oxiHis 143 Val 1 Lys 82

His 143

Forma T, desoxiHb

Movimiento del ion Fe++ en la oxigenacin de la hemoglobina

Forma R, oxiHb

Inmunoglobulinas

Todos los organismos vivientes tienen mecanismos para distinguir lo propio de lo extrao. Hongos y plantas, por ejemplo, mediante la produccin de
metabolitos secundarios potencialmente txicos para otros organismos: antibiticos, alcaloides, etc. Bacterias, mediante el sistema de restriccin de DNA: DNAs

extraos son degradados especficamente por las enzimas de restriccin. Vertebrados, mediante el sistema inmune.

El sistema inmune consta de dos tipos de respuesta:

La inmunidad celular, mediante la cual clulas

inmunocompetentes ( linfocitos T) eliminan clulas extraas

introducidas en el organismo (p.e. un injerto, un tumor, una clula transformada por un virus, etc.) La inmunidad humoral,
(linfocitos

en la
B)

que

otras clulas
protenas

Inmunocompetentes

producen

especficas dirigidas contra lo extrao, llamadas anticuerpos.

Todos los anticuerpos pertenecen a una superfamilia de protenas conocidas como inmunoglobulinas.

Llamamos antgeno a la molcula que, introducida en un organismo, produce una respuesta inmune, sea humoral o celular. En la inmunidad humoral, el antgeno se une especficamente a un linfocito B que produce un anticuerpo complementario. Este linfocito se multiplica (clon celular) y se transforma en clula plasmtica o plasmocito, que es la clula encargada de la produccin de anticuerpos.

Cada linfocito B produce un slo y nico tipo de anticuerpo. Por esa razn, los anticuerpos obtenidos de un nico clon de linfocitos B reciben el nombre de anticuerpos monoclonales.

El estudio de las inmunoglobulinas se vio facilitado por la naturaleza de los mielomas, tumores malignos de clulas
plasmticas, que producen un solo tipo de anticuerpo (anticuerpo monoclonal). En algunos mielomas humanos se produce la llamada protena

de Bence-Jones, que es excretada en la orina, a partir de la que se puede purificar.

Es fcil inducir mielomas en ratn. A partir de todas estas circunstancias se pueden obtener anticuerpos qumicamente puros (monoclonales) lo cual facilita

el estudio qumico de las inmunoglobulinas.

Porter, 1959:

El tratamiento con papana escinde la molcula de inmunoglobulina (Ig) en tres fragmentos, dos de ellos idnticos: dos Fab y un Fc Fab: Antigen Binding (fijador de antgeno) Fc: Crystallizable (cristalizable)
Edelman, 1959: El tratamiento con mercaptoetanol y guanidina 8M, seguido de cromatografa, disocia la Ig en dos componentes de pesos moleculares 50 kDa (H, de heavy, pesado) y 25 kDa (L, de light, ligero). Como el peso molecular de la Ig nativa es de 150 kDa, se deduce que su estructura es H2L2.

Por estudios inmunolgicos, se detectan los siguientes isotipos: - Cadena ligera: k, l - Cadena pesada: g, a, m, d, e
En los dominios constantes puede haber una ligera variabilidad en cada cadena (afecta a uno o dos aminocidos) dando lugar a las variantes conocidas como alotipos. En los dominios variables hay muy poca homologa de secuencia; cada anticuerpo es nico hacia su antgeno: los idiotipos. En cualquier caso, en cada anticuerpo las dos cadenas ligeras y las dos pesadas son iguales entre s.

Cadena pesada o H: g, a, m, d, e Cadena ligera o L: k, l

H
H

C
C

CH3
CH3

CH2
CH2

Puente disulfuro

Inmunoglobulinas

Cadenas ligeras 212 aminocidos 2 dominios: VL, N-t (108aa) CL, C-t (104 aa) Cadenas pesadas Variable; 450 aminocidos en IgG Cuatro o cinco dominios: VH, N-t (108 aa) CH1, CH2, CH3 (y CH4)

En los dominios constantes hay posibilidad de variaciones alotpicas (uno o dos aminocidos solamente).

Regiones hipervariables (CDR) en el dominio variable de las cadenas H y L en las Ig

30

50

93

N 35 60 87 105

Dominio de Inmunoglobulina

Cadena ligera, L

C N CL

VL

VH

Cadena pesada, H

C CH1

CH3

Oligosacrido CH2

L Cys H128

Cys L 214 (C-t)

Puente disulfuro entre cadenas pesada y ligera

Fab
Inmunoglobulina G H1 Oligosacrido Fab L2 Fc H2

L1

Inmunoglobulina G

g2k2 , g2l2

Constituye el 70-80 % de las Ig sricas. Contingente mayoritario de la respuesta inmune secundaria. Cuatro tipos distintos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4. Monomrica. Bajo contenido en carbohidrato (2-3 %).

Inmunoglobulina A

(a2k2)2 , (a2l2)2

Constituye el 10-20 % de las Ig sricas.

Es la Ig propia de las secreciones (jugo gstrico, saliva, leche). Dos tipos: IgA1, IgA2.
Normalmente dimrica: unin covalente por el pptido J. Alto contenido en carbohidrato (7-12 %).

Inmunoglobulina M

(m2k2)5 , (m2l2)5

Constituye el 5-10 % de las Ig sricas.

Es la respuesta inmune primaria. Cinco dominios en la cadena pesada. Elevada proporcin de carbohidrato (12 %).
Pentmero unido por disulfuros y un pptido J.

Inmunoglobulina D

d2k2 , d2l2

Muy baja concentracin en suero (1 %). Posiblemente relacionada con el receptor de antgeno.

Alto contenido en carbohidrato (9-14 %).

Inmunoglobulina E
La ms minoritaria. Cinco dominios en la cadena H.

e2k2 , e2l2

Membrana de mastocitos y basfilos. Relacionada con inmunidad a parsitos helmnticos. Relacionada con fenmenos de hipersensibilidad (alergia)
inmediata: fiebre del heno, asma. Alto contenido en carbohidrato.

Colgeno

Protena fibrosa, constituda por empaquetamiento de molculas de tropocolgeno o monmero de colgeno.

Tropocolgeno: tres helicoides entrecruzados, cada uno de peso molecular en torno a los 300 kDa, alrededor de 1000 aminocidos, con una gran cantidad de residuos de Gly, as como de Pro, normal o hidroxilada. Los residuos de Lys pueden aparecer asimismo modificados, bien como 5-hidroxilisina, o como lisina aldehdica (Al-lisina). Es muy abundante en todos los tejidos de origen mesodrmico, particularmente en tendones, dermis, fascias y hueso.

Tropocolgeno

Disposicin de los monmeros de colgeno en la microfibrilla, que da lugar a un patrn estriado al microscopio electrnico

Las cadenas de tropocolgeno aparecen unidas unas a otras en la microfibrilla mediante:

Cadena lateral de al-lisina unida a cadena lateral de lisina

no modificada a travs de base de Schiff y posterior reduccin. Cadena lateral de al-lisina unida a otra al-lisina a travs de condensacin aldlica.

Enlaces de hidrgeno entre el grupo -C=O de la prolina y el N-H de la glicina, siempre intercatenarios.

MFSFVDLRLLLLLAATALLTHGQEEGQVEGQDEDIPPITCVQNGLRYHDR DVWKPEPCRICVCDNGKVLCDDVICDETKNCPGAEVPEGECCPVCPDGSE SPTDQETTGVEGPKGDTGPRGPRGPAGPPGRDGIPGQPGLPGPPGPPGPP GPPGLGGNFAPQLSYGYDEKSTGGISVPGPMGPSGPRGLPGPPGAPGPQG FQGPPGEPGEPGASGPMGPRGPPGPPGKNGDDGEAGKPGRPGERGPPGPQ GARGLPGTAGLPGMKGHRGFSGLDGAKGDAGPAGPKGEPGSPGENGAPGQ MGPRGLPGERGRPGAPGPAGARGNDGATGAAGPPGPTGPAGPPGFPGAVG AKGEAGPQGPRGSEGPQGVRGEPGPPGPAGAAGPAGNPGADGQPGAKGAN GAPGIAGAPGFPGARGPSGPQGPGGPPGPKGNSGEPGAPGSKGDTGAKGE PGPVGVQGPPGPAGEEGKRGARGEPGPTGLPGPPGERGGPGSRGFPGADG VAGPKGPAGERGSPGPAGPKGSPGEAGRPGEAGLPGAKGLTGSPGSPGPD GKTGPPGPAGQDGRPGPPGPPGARGQAGVMGFPGPKGAAGEPGKAGERGV PGPPGAVGPAGKDGEAGAQGPPGPAGPAGERGEQGPAGSPGFQGLPGPAG PPGEAGKPGEQGVPGDLGAPGPSGARGERGFPGERGVQGPPGPAGPRGAN GAPGNDGAKGDAGAPGAPGSQGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGDRGDAGP KGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAPGDKGESGPSGPAGPTGARGAPG DRGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGDAGPPGPAGPAGPP GPIGNVGAPGAKGARGSAGPPGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPGPPGP AGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAPGTPG PQGIAGQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPM GPPGLAGPPGESGREGAPGAEGSPGRDGSPGAKGDRGETGPAGPPGAPGA PGAPGPVGPAGKSGDRGETGPAGPAGPVGPAGARGPAGPQGPRGDKGETG EQGDRGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPSGASGPAGPRGPPGSAGAP GKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGPPSAGFDFSF LPQPPQEKAHDGGRYYRADDANVVRDRDLEVDTTLKSLSQQIENIRSPEG SRKNPARTCRDLKMCHSDWKSGEYWIDPNQGCNLDAIKVFCNMETGETCV YPTQPSVAQKNWYISKNPKDKRHVWFGESMTDGFQFEYGGQGSDPADVAI QLTFLRLMSTEASQNITYHCKNSVAYMDQQTGNLKKALLLKGSNEIEIRA EGNSRFTYSVTVDGCTSHTGAWGKTVIEYKTTKTSRLPIIDVAPLDVGAP DQEFGFDVGPVCFL

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 950 1000 1050 1100 1150 1200 1250 1300 1350 1400 1450 1464

Seal Propptido N-terminal

Helicoide

Propptido C-terminal

GKTGPPGPAGQDGRPGPPGPPGARGQAGVM GFPGPKGAAGEPGKAGERGVPGPPGAVGPA GKDGEAGAQGPPGPAGPAGERGEQGPAGSP GFQGLPGPAGPPGEAGKPGEQGVPGDLGAP GPSGARGERGFPGERGVQGPPGPAGPRGAN

Fragmento de secuencia del colgeno aI(1) (Muchos residuos de Pro aparecen hidroxilados)

Helicoide de poliprolina

Cada helicoide es levgiro, pero se entrelazan en forma dextrgira

Helicoide triple del tropocolgeno (fragmento, 14 aa/helicoide)

Tropocolgeno (fragmento)

Vista lateral

Vista frontal

Glicina cada tres residuos

Enlaces H a otras cadenas (grupo -C=O peptdico)

Helicoide aislado del tropocolgeno

Residuos de Gly en tropocolgeno

Hidroxilacin de prolina
HO O N C O C N C O 3-Hidroxiprolina (minoritario) C OH O

4-Hidroxiprolina (mayoritario)

Enzima: procolgeno:prolina monooxigenasa (prolil hidroxilasa), requiere cido ascrbico. La hidroxilacin de prolina favorece la formacin de enlaces H entre las cadenas.

NH3+ CH2 HC OH CH2 CH2 CH N C H O

Hidroxilacin de lisina

Enzima: Procolgeno:lisina monooxigenasa (lisil hidroxilasa), requiere cido ascrbico.

La lisina hidroxilada es el punto de unin de oligosacridos al colgeno.

5-Hidroxilisina

CHO CH2 CH2 CH2 CH N C H O

Al-Lisina
Enzima: lisil aminooxidasa

Forma enlaces cruzados (entrecruzamientos) covalentes entre los helicoides del colgeno

Al-Lisina (Lisina aldehdica)

Lisina

H N

O C (CH2)4 NH3+ CHO (CH2)3 C

H N

O C (CH2)4 N C (CH2)3 C

H N

O C (CH2)4 NH CH2 (CH2)3 C

Al-lisina

N H

C O

N H

C O

N H

C O

Base de Schiff

Entrecruzamiento (lisil norleucina)

Formacin de entrecruzamiento covalente entre cadenas de colgeno a travs de lisina y al-lisina, (va base de Schiff)

Al-lisina H N

O C (CH2)3 CHO CHO (CH2)3 C O H

H N

O C (CH2)3 CH

C C (CH2)2 N H C C O

Al-lisina

N H

C O

Entrecruzamiento aldlico

Formacin de entrecruzamiento covalente entre cadenas de colgeno a travs de dos al-lisinas, (va condensacin aldlica)

Tipos de colgeno
Tipo I [a1(I)]2a2(I) Mayoritario (huesos, piel, tendones) Cartlago, vtreo Vasos sanguneos, cicatrices Membrana basal, cristalino Superficies celulares

Tipo II [a1(II)]3 Tipo III [a1(III)]3 Tipo IV [a1(IV)]3 [a2(IV)]3 Tipo V [a1(V)]2a2(V) [a1(V)]3 [a1(V)][a2(V)][a3(V)] Tipo VI

ntima de la aorta

Elastina:
Tramos sin estructura definida entrecruzados por desmosina.

H H N Lys O C (CH2)4 NH3

+

O C (CH2)4

H N Lys

O C (CH2)4 NH3
+

N C O (CH2)2

O C
+

Lys N H

NH3

NH3

(CH2)2 H N N (CH2)3 C O

(CH2)4 C O

Lys (CH ) 2 4 N H C O

N H

Desmosina

Formacin de entrecruzamiento covalente entre cadenas de elastina a travs de cuatro lisinas, (va formacin de desmosina).