REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO COMPONENTES

ANTIGENO
C. P

ANTICUERPO

L.T

CITOQUINAS
HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA

L-Memoria

SENSIBILIZACION

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
FASES DE LA REACCION 1.- F. Oculta - unin Ag-ac estable pero imperceptible
- forman complejos inmunes circulantes - neutralizacin del antgeno - opsonizacin .

2.- F. Visible. - exteriorizacion de la reaccion

- demostracin del anticuerpo producido mediante pruebas serolgicas Ag-ac - reacciones de hipersensibilidad inmediata o reacciones de hipersensibilidad tarda

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
DETERMINACION DE LA REACCION Ag-ac, EN LABORATORIO Pruebas serolgicas ( Inmunoserologia ) 1.- Directas: Demostracin del ac, mediante un Ag conocido Demostracin del Ag, mediante un ac conocido 2.- Indirectas: Demostracin del choque Ag-ac, mediante un anti-anticuerpo especfico

Pruebas Serolgicas Ag-ac

FACTORES MODULADORES
FENOMENO DE ZONA (PROZONA): Una reaccin Ag-ac , es perceptible si los dos componentes estn en proporcin similar. - exceso de cualquiera de los dos componentes puede inhibir la reaccion CONCENTRACION SALINA Y ph : cantidad minima de electrolitos para exteriorizar la reaccion Ag-Ac - soluc. Fisiolgica(9ml de NaCl) optimo - ph ( 6 - 8.5 ). Optimo < o > concentracion inhibrn reacciones inmunologicas TEMPERATURA Y AGITACIN : - temperatura ptima ( 37- 40C ) > mayor altera anticuerpos - permite una mayor expresin de determinantes antignicos

TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS

PROPIEDADES
Revelan generalmente determinados sistemas de reaccin Antgeno-anticuerpo. El anticuerpo induce cambios en el Antgeno: ( aglutinacin , precipitacin, etc.) Tcnicas simples detectan concentraciones altas de Ag o ac. Tcnicas complejas detectan concentraciones muy bajas de Ag o ac.

Clasificacin
Tcnicas simples: - de precipitacin, Aglutinacin, - Fijacin de Complemento, etc. Tcnicas con conjugados: - Inmunofluorescencia ( I-F ) - Radioinmunoensayo ( R.I.A ) - Inmunoenzimoensayo (ELISA)

TECNICAS INMUNOSEROLOGICAS Tcnicas simples Tcnicas simples

Ventajas
Fcil implementacin, tcnicas sencillas No requieren mayor equipamiento. Bajo costo de operacin Resultados reproducibles Fcilmente cuantificables Reactivos de fcil consecucin y de caducidad manejable. -

Desventajas:
Detectan concentraciones altas de Ag o Ac. Posibilidad de fenmeno de Zona Menos sensibles y menos especficas. Cada tcnica detecta un solo tipo de anticuerpo ( precipitinas, aglutininas)

REACCIONES DE PRECIPITACION
COMPONENTES Antgeno: Reactivo
comercial soluble.

Anticuerpo: Precipitinas (IgG) en el suero del pcte. Reaccin (+): formacin de precipitados ( m.lquidos)
formacin de halos de difusin (m.slidos)

REACCIONES DE PRECIPITACION
TIPOS
En medio lquido:
Halos de turbidez Precipitado granular fino Ej. Reacc . de V.D.R.L

En medios slidos: en soporte de gel difunden los

componentes ( halos de difusin )

Difusin simple

Difusin doble
+

Ej. Reacc. De Oudin, Eleck y Outcherloni (difteria)

REACCIONES DE AGLUTINACION
COMPONENTES

Antgeno: Reactivo comercial adsorvido en soportes

Para glucsidos. Como soporte utilizan Eritrocitos. Ej. Antgeno de Klebsiellas, Salmonellas, Tuberculina, etc.

11.

Para Lpidos..

Como soporte..cristales de colesterol y lecitina. Ej. Antgeno cardiolipnico, Reacc. De V.D.R.L.

17.

Para Protenas

Como soporte..partculas de ltex o eritrocitos Ej. Reacciones de PCR, FR, Tests de embarazo, otros.

( En ciertos casos se puede adsorver el ANTICUERPO en lugar del ANTIGENO ).

Anticuerpo: Generalmente presente en el suero del pcte

REACCIONES DE AGLUTINACION
Tipos de reaccin
1.- Aglutinacin Directa: El antgeno (aglutinogeno) forma parte
de una clula y es aglutinado por un anticuerpo comercial.(aglutinina) ej. Aglutinacin de antgenos de eritrocitos ( sist. ABO, Rh ).

A
O

A-B

A B

RH +

RH A AB B RH + RH -

Reacciones de Aglutinacin
2.- Aglutinacin indirecta:
- Los Antgenos o los anticuerpos comerciales estn fijados en SOPORTES:

a) partculas de LATEX, Ej. Reacciones de FR, PCR, GRAVINDEX, etc b) en ERITROCITOS ( R. de Hemaglutinacin ).
Ej. Reacciones de DNA,Toxoplasma, etc.

- Los anticuerpos o antgenos que se buscan, estn en el suero del paciente.

IgM Anti-PCR IgG

P.C.R

LATEX

F.R
Suero pcte.PCR

LATEX

Suero PcteAnti IgG ( F.R)

Reacciones de aglutinacin
Ventajas
2. 3. 4. 5. 7. 8. Mas sensible y especfica que la anterior. Sujeta con menos frecuencia a fenmeno de zona. Reactivos ms variados Evaluacin cualitativa y cuantitativa a simple vista

Desventajas
Falsas negativas en exceso de anticuerpo Problemas tcnicos dependientes de los soportes

Otras Reacciones de Aglutinacin

1. Reacciones de Hemaglutinacin: - Utilizan Eritrocitos como soportes del antgeno o del anticuerpo
- La reaccin positiva se expresa mediante aglutinacin visible de los eritrocitos

2.

Reacciones de Hemlisis: - Utilizan al Eritrocito como soporte del antgeno o anticuerpo.

- La reaccin positiva induce + permeabilidad de la membrana del eritrocito con liberacin de hemoglobina al medio externo.

Otras Reacciones de Aglutinacin

1. Reacciones de Inhibicin de la Hemlisis:
Fundamento: Utilizan al eritrocito para demostrar en
pctes, infeccin por bacterias productoras de HEMOLISINAS ( estreptolisinas O ). La reaccin positiva ( HEMOLISIS ) detecta ausencia de anti-estreptolisinas O (ASTO NEGATIVO). La reaccin negativa ( NO HEMOLISIS ) detecta presencia de antiestreptolisinas(ASTO POSITIVO).

Reaccin de inhibicin de la hemlisis A.S.T.O

Suero A.S.T.O (+)
Paciente enfermo

Suero A.S.T.O (-)

Suero control

Eritrocitos O Estreptolisina

Eritrocitos O

Estreptolisina O Suero con antiestreptolisina Suero sin Antiestreptolisina O NO HEMOLISIS HEMOLISIS

REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO

COMPONENTES 1.- Anticuerpo (IgG o IgM). (FIJADOR DE COMPLEMENTO) 2.- Antgeno: comercial 3.- U. de Complemento: 4.- Sistema Hemoltico: (Suero fresco de un animal)cobayo
( eritrocitos de conejo,sensibilizados) complejo ERITROCITO-anticuerpo

F de C +++ Lisis (----- )

F de C ------ Lisis (++++)

REACCION DE FIJACION DEL COMPLEMENTO Propiedades

1.-Alta sensibilidad y especificidad ( + de 80%) 2.-Detecta pequeas concent. de anticuerpo ( 1 mcgr. ). IgG-IgM 3.- Utiliza Antgenos solubles o particulados. 4.- Utilizado para titular anticuerpos o control de calidad de la tcnicas anteriores. 5.- Tcnica laboriosa., No utilizada de rutina
ej. Reacc. De Wasermandx de sfilis Tcnica para dosificar Complemento total o sus unidades

TECNICAS COMPLEJAS CON ANTICUERPOS o ANTIGENOS MARCADOS (Conjugados)

TECNICAS CON CONJUGADOS

.- VENTAJAS:
Altamente especficas y sensibles ( 90-96% ). Detectan concentraciones muy bajas de Ag o ac. Pueden establecer cualquier tipo de Igs. ( IgD-IgE ). Reacciones tanto cualitativas como cuantitativas.

.- DESVENTAJAS:
Requieren implementacin costosa. Reactivos de corta caducidad, costosos y en kits de multiples tests. Algunas pruebas son de manejo cuidadoso ( recduos en el RIA ).

TIPOS DE REACCIONES
1.- Inmunofluorescencia ( I.F)..
fluoresceina(permite la visualizacion con luz ultravioleta)

marcador mas comun el Isotiocianato de

2.- Radioinmunoensayo ( R.I.A)..

anticuerpo esta marcado con sust radioactivas como el Yodo radiactivo ( Y125 - Y131 ).

3.- Enzimoinmunoensayo (E.L.I.S.A)..

Cutiliza como marcador substractos enzimaticos como fosfatasa alcalina o peroxidasas

METODOS PRINCIPALES
1.- Mtodo Directo
En una sola etapa Tcnica ms simple. Mas costosa.menos utilizada ..poca disponibilidad de conjugados

a.- Conjugado: Anticuerpo especfico + Marcador de la reaccin. b.- Antgeno: Muestra clnica del paciente cortes de tejido a estudiar obtenidos con cristato y fijados a una placa de vidrio b b Positivo

METODOS PRINCIPALES
2.- Mtodo Indirecto
1.- Etapa: Fase oculta.el antgeno comercial fijo en las paredes de un tubo se une al anticuerpo que est en la muestra del paciente.

2.- Etapa: Fase demostrativa.el conjugado: un segundo anticuerpo dirigido contra el Anticuerpo especfico del paciente, se une al idiotipo de este. 3.- La muestra positiva se detecta mediante captacin de la substancia utilizada como marcador del conjugado, mediante aparatos adecuados que valoran la concentracion del Ac.

METODOS PRINCIPALES
2.- Mtodo Indirecto
1.- Etapa: Fase oculta.-

2.- Etapa: Fase demostrativa.Fluormetro

Contador gamma

Espectofotmetro