PRCTICA DE LABORATORIO: CLCULO DE LA VELOCIDAD DE REACCIN ENZIMTICA DE LA ENZIMA CATALASA

INTEGRANTES:

Cruz Carrillo Anglica Delgado Lpez Michelle Odette Espinoza Martnez Juan Fernando Mndez Arellano Beatriz Ivonne Nicols Callejas Ricardo Alejandro Ulloa Bulnes Diana Karen

GRUPO: 608

FECHA DE ENTREGA: 30 de noviembre 2011

CLCULO DE LA VELOCIDAD DE REACCIN ENZIMTICA DE LA ENZIMA CATALASA

Introduccin El en presente trabajo nosotros, como equipo, hemos hecho una investigacin basada en los ltimos temas vistos en clase referentes al metabolismo, que recordemos es un conjunto integrado de reacciones qumicas que tienen lugar en el organismo y que nos capacitan para extraer energa del medio (Roach, Benyon, 2003, p. 3) centrndonos en la accin catalizadora de las enzimas que a su vez conlleva un incremento de velocidad de las reacciones qumicas realizadas por los organismos generando a su vez una menor energa de activacin. Comenzaremos definiendo una enzima como catalizadores orgnicos por excelencia; que actan en muy pequeas cantidades sobre las molculas reaccionantes y se recuperan ntegras al final de la reaccin. (Cervantes, 2009). Estas enzimas tienen 3 caractersticas principales como lo menciona Bohinski (1981): Son los catalizadores ms eficientes que se conocen En segundo lugar, la mayora de las enzimas se distinguen por una especificidad de accin La tercera caracterstica, y quiz la ms notable, es que la accin de muchas enzimas son reguladoras (p. 174). Como vemos, las enzimas son protenas funcionales formadas por aminocidos que tienen un papel importante en el proceso del metabolismo. Son las responsables de todas las reacciones qumicas de la clula en las cuales se forman o rompen enlaces covalentes. En nuestro trabajo experimental nos centraremos en las velocidades de reaccin enzimtica, especficamente de la enzima catalasa. La catalasa (perxido de hidrgeno: perxido de hidrgeno oxidorreductasa, EC 11.11.1.6). Ilustracin 1. Es una de las enzimas ms abundantes en la naturaleza y se encuentra ampliamente

Se conoce como nmero EC al esquema de clasificacin numrica de las enzimas que se basa en las reacciones qumicas que catalizan. <http://definicion.de/enzima/>

distribuida en el organismo humano, aunque su actividad vara en dependencia del tejido; sta resulta ms elevada en el hgado y los riones, ms baja en el tejido conectivo y los epitelios, y prcticamente nula en el tejido nervioso. A nivel celular se localiza en las mitocondrias y los peroxisomas, excepto en los eritrocitos. (Ela. Miranda, Cspedes Miranda, Enzimas que participan como barreras fisiolgicas para eliminar los radicales libres: II. Catalasa, el 27 en de <http://bvs.sld.cu/revistas/ibi/vol15_2_96/ibi01296.htm>, noviembre de 2011) consultada

Figura 1. Ejemplo de la estructura de los nmeros de clasificacin enzimtica.

Es importante aclarar qu son los peroxisomas y su relacin con la catalasa. Qu son los peroxisomas? Son unos cuerpos esfricos que se asemejan a los lisosomas y su misin es liberar a la clula de sustancias txicas como el perxido de oxgeno (H2O2) y otras de tipo oxidante, y para ello contienen enzimas relacionadas con el metabolismo de la molcula de oxgeno (Tobella, Sales, 2010, p. 17). Complementando esta definicin con algo que nos concierna ms respecto a la catalasa, Horton (1981) menciona que los perixosomas contienen la enzima catalasa, la cual cataliza la descomposicin del H2O2 en H2O y O2, destruyendo de este modo el H2O2 txico a medida que se forma. El secuestro del metabolismo

generador de perxido dentro de organelos especializados protege al resto de la clula de subproductos txicos de la oxidacin. (p. 1.17). La catalasa se encuentra en casi todas las clulas aerbicas, donde acelera el rompimiento de perxido de hidrgeno (producto txico de las clulas). A veces, la reduccin de oxigeno al agua es incompleta y se produce superxido, una sustancia sumamente txica. Una enzima rompe el superxido y forma agua y perxido de hidrgeno, que es menos txico. La catalasa entonces rompe el perxido de hidrgeno para producir agua y oxgeno. El mecanismo de la catlisis2 de la catalasa no se ha aclarado completamente, pero la reaccin general es la siguiente: 2H2O2-2H2O2+0 (Elizabeth M. Boon, Catalase: H2O2. H2O2 Oxidoreductase)

Figura 2. Modelo molecular de la catalasa, donde el sustrato de H2O2 est representado por las partculas grises, y el sitio activo donde se realizan las reacciones enzimticas est de un color ms oscuro.

Transformacin qumica motivada por sustancias que no se alteran en el curso de la reaccin. <http://buscon.rae.es/draeI/SrvltConsulta?TIPO_BUS=3&LEMA=catalisis>

Objetivo Con este trabajo pretendemos medir la velocidad de reaccin3 enzimtica de la enzima catalasa por medio de un dispositivo creado con materiales reciclados aprovechando esa caracterstica fsica de la materia llamada impenetrabilidad que dice que dos objetos no pueden ocupar simultneamente el mismo lugar. De igual modo probaremos que existe una liberacin de oxgeno por parte del hgado provocada por la enzima catalasa al momento de agregar el perxido de hidrgeno en el frasco que contiene a ste.

Metodologa: Como material necesitaremos 1 manguera transparente pequea, 1 manguera transparente grande, 1 frasco pequeo, 1 frasco grande, 1 pistola de silicn, 1 tabla de madera, 1 cinta mtrica, 1 cronmetro, 1 jeringa e Hgado de pollo. Y nuestras sustancias sern agua oxigenada y agua natural

Procedimiento para armar el dispositivo: 1. Primero para comenzar a armar el dispositivo pegamos con ayuda de la pistola de silicn el frasco grande a la tabla de madera y lo llenamos de agua. 2. Realizamos dos pequeos agujeros en la tapa por donde entraran las dos mangueras, tanto la grande como la pequea. 3. Introducimos la manguera grande en el frasco con agua y con ayuda de un alambre que enredamos en la tapa se sostuvo la manguera hacia arriba y ah detrs se le coloco la cinta mtrica de aproximadamente 25 cm.

La velocidad de una reaccin puede medirse como la velocidad de formacin de uno o ms de su productos o bien la velocidad de utilizacin de sus reactivos. Ambas variables (velocidad de reaccin y concentracin de los reactivos) son directamente proporcionales, as que matemticamente debe existir un valor constante. <http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/cinetica%20enzimatica.html>

4. Posteriormente colocamos a un lado el frasco pequeo en donde introduciramos el hgado de pollo y tambin le hicimos dos agujeros pequeos en la tapa. 5. Despus unimos los frascos mediante la manguera pequea que introducimos en los dos agujeros que tenan en la tapa cada uno de los frascos y sellamos muy bien con silicn para que no hubiera fuga.

Funcionamiento del dispositivo: 1. Colocar un trozo de hgado en el frasco pequeo. 2. Despus con ayuda de nuestra jeringa tomamos alrededor de 5 ml de agua oxigenada. 3. Con ayuda de la jeringa vaciamos el agua oxigenada poco a poco dentro del frasco pequeo que contena el hgado por medio del agujero y tapamos el orificio inmediatamente evitando cualquier escape de oxgeno como se puede observar en la Ilustracin 3
Figura 3. Imagen del dispositivo, siendo probado en el laboratorio.

Observamos que al hacer contacto el agua oxigenada con el hgado de produce una reaccin, esto hace que se libere oxgeno el cual pasar por la manguera hacia el otro frasco y con la presin que hace el agua observaremos como sube el agua por la manguera y as podremos medir que tanto subi cada dos segundos con ayuda de la cinta mtrica.

Resultados
Realizamos cuatro repeticiones del experimento para calcular la velocidad de reaccin de la enzima catalasa en el hgado con el agua oxigenada, y los resultados obtenidos se presentan a continuacin mediante las tablas 1,2,3,4 y sus grficas correspondientes (Figura 4,5,6,7) que comparan el tiempo de reaccin con el volumen de agua que se eleva en la manguera graduada.

Tabla 1. Primer resultado del experimento.

Tabla 2. Segundo resultado del experimento.

Tiempo (s) 2 4 6 8

Volumen (ml) 2 5 8 10

Tiempo (s) 2 4 6 8

Volumen (ml) 2 5 7 9

Tabla 3. Tercer resultado del experimento.

Tabla 4. Cuarto resultado del experimento.

Tiempo (s) 2 4 6 8

Volumen (ml) 1 3 5 7

Tiempo (s) 2 4 6 8

Volumen (ml) 3 8 14 20

En cada una de las tablas se representan el volumen del agua que subi por la manguera graduada de 2-8 ml en un rango de tiempo de aproximadamente cada 2 segundos en los cuatros intentos realizados. (Tablas 1, 2, 3). En el caso de la Tabla 4 notamos que en promedio aumentaba de 5 a 6 ml por cada dos segundos, esto es debido a que se coloc una mayor cantidad de agua oxigenada a una mayor velocidad, que provoc que la reaccin enzimtica se efectuara ms rpidamente sin perder su incremento contante.

Para tener una idea ms clara del comportamiento de las reacciones, las graficamos. Pondremos los valores del tiempo en el eje de las X y el volumen en el eje de las Y. La lnea recta que se encuentra en las grficas es la pendiente, cuyo valor calcularemos ms adelante.

Figura 4: Velocidad de reaccin enzimtica de la enzima catalasa en el primer experimento.

Experimento 1
14 12 10
Volumen (ml)

8 6 Pendiente 4 2 0 0 2 4 6
Tiempo (s)

10

12

Figura 5: Velocidad de reaccin enzimtica de la enzima catalasa en el primer experimento.

Experimento 2
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4
Tiempo (s)

Volumen (ml)

Pendiente

10

Figura 6: Velocidad de reaccin enzimtica de la enzima catalasa en el primer experimento.

Experimento 3
8 7 6 5 4 Linear (Volumen) 3 2 1 0 0 2 4 6 8 10

Figura 7: Velocidad de reaccin enzimtica de la enzima catalasa en el primer experimento.

Experimento 4
25

20

Volumen (ml)

15

10

Pendiente

0 0 2 4 Tiempo (s) 6 8 10

A continuacin se presentan los clculos que utilizamos para encontrar la pendiente de cada una de las mediciones de las reacciones:

Discusin El experimento se llev a cabo con el dispositivo 4 veces para verificar el correcto funcionamiento. Tanto las tablas como las grficas muestran diferentes resultados, es lgico que sea as porque tienen un marco de error que se pudo haber cometido al medir el hgado o el H2O2, pero estn prximos entre s, son semejantes y por lo tanto tomando en cuenta lo anterior, el dispositivo funciona adecuadamente en la medicin del oxgeno liberado. Sin embargo debido a errores que surgen en la realizacin del prototipo y los experimentos observamos sobretodo en la tabla 4 que hay un incremento en la velocidad en la que aumentan los mililitros en la manguera. Como se explic con anterioridad el hecho de que el H2O2 haya sido colocado a mayor velocidad provoc que la reaccin enzimtica realizara la ruptura de Hidrgeno Y oxgeno ms velozmente que en los casos anteriores, aunando que la cantidad de agua oxigenada fue mayor que en el caso de los experimentos 1, 2 y 3. Los resultados de graficas muestran una aceleracin, despus la grfica llega a una constante, lo que se conoce como Equilibrio Qumico, la manera en que mide la velocidad es calculando la pendiente, as podemos ver la eficiencia de la enzima catalasa para romper los iones del H2O2.

Conclusin El equipo llego a la conclusin de que el hgado contiene altos niveles de la enzima catalasa que al reaccionar con el perxido de hidrogeno (agua oxigenada) produce H2O y O2. En las 4 pruebas del experimento, la velocidad de reaccin tuvo valores aproximados en los 3 primeros intentos, con variaciones de 1 a 3 mL, y en el cuarto intento la velocidad incremento considerablemente, pues en los valores se disparan hasta el doble de lo que se vena midiendo, esto es debido a que se increment la cantidad de perxido de hidrogeno, con esto pudimos comprobar que la velocidad de reaccin depende de las concentraciones de los reactivos que se manejan. Esta prueba no es totalmente efectiva pues no podemos asegurar que existe un alto porcentaje de efectividad, adems de que el margen de error no es tan bajo. El experimento nos da valores aproximados mas no los correctos, sin embargo nos podemos dar una idea aproximada de la velocidad de las reacciones enzimticas con respecto a la cantidad de hgado y al volumen de agua oxigenada que se ponen a reaccionar, tomando en cuenta tambin que la velocidad con que se agrega el H2O2 influye en la velocidad de reaccin Esto nos sirve para entender cmo se mide la velocidad de reaccin de una enzima en forma experimental; adems de que as podemos observar y entender ms ampliamente cmo funciona el perxido de hidrogeno con los tejidos, y qu efectos tiene cuando entra en contacto con nuestra piel, adems de la propiedad como antibacterial, las bacterias anaerobias, mueren al estar en contacto con oxgeno, es por esta razn que el oxgeno producido por esta enzima tiene efecto bactericida sobre estos microorganismos. Esto nos ha servido para corroborar lo visto en clase respecto al tema de metabolismo y la accin de las enzimas en este proceso.

Bibliografa  Bohinski, R. (1978). Bioqumica. Mxico: Fondo educativo Interamericano S.A.  Cervantes. M. (2009). Biologa general. Mxico: Publicaciones Cultural.  Horton. H y Moran. L. (1995). Bioqumica. Mxico: Prentice Hall Hispanoamericana, S.A.  Roach. J y Benyon, S. (2003). Lo esencial en metabolismo y nutricin. (2 Ed), Espaa: Elsevier Espaa, S.A.  Tobella, J y Sabater, G. (2010). Medicina personalizada posgenmica: Conceptos prcticos para clnicos. Espaa: Elsevier Masson.  Volk. W. (1996). Microbiologa Bsica. Mxico: Harla.

 (Ela. Miranda, Cspedes Miranda, Enzimas que participan como barreras fisiolgicas para eliminar los radicales libres: II. Catalasa, en <http://bvs.sld.cu/revistas/ibi/vol15_2_96/ibi01296.htm>, consultada el 27 de noviembre de 2011)  (Elizabeth M. Boon, Catalase: H2O2. H2O2 Oxidoreductase, en <http://www.callutheran.edu/Academic_Programs/Departments/BioDev/om m/catalase/frames/cattx.htm, consultada el 20 de noviembre 2011>, consultada el 28 de noviembre de 2011)

 <http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sites/ciencia/volumen2/ciencia3/059/htm/ sec_7.htm>  <http://buscon.rae.es/draeI/SrvltConsulta?TIPO_BUS=3&LEMA=catalisis>  <http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/cinetica%20enzimatica.htm l>  http://academic.uprm.edu/~jvelezg/lab7-2.pdf

Autoevaluacin

NOMBRE Cruz Carrillo Anglica Delgado Lpez Michelle Odette Espinoza Martnez Juan Fernando Mndez Arellano Beatriz Ivonne Nicols Callejas Ricardo Alejandro Ulloa Bulnes Diana Karen

CALIFICACIN 10 10 10 10 10 10

Titulo: Velocidad de reaccin enzimtica de la enzima catalasa Introduccin: Las enzimas son catalizadores orgnicos por excelencia; que actan en muy pequeas cantidades sobre las molculas reaccionantes y se recuperan ntegras al final de la reaccin. La catalasa es una de las enzimas ms abundantes en la naturaleza y se encuentra ampliamente distribuida en el organismo humano, aunque su actividad vara en dependencia del tejido; sta resulta ms elevada en el hgado y los riones, ms baja en el tejido conectivo y los epitelios, y prcticamente nula en el tejido nervioso. A nivel celular se localiza en las mitocondrias y los peroxisomas, excepto en los eritrocitos. La catalasa se encuentra en casi todas las clulas aerbicas, donde acelera el rompimiento de perxido de hidrgeno (producto txico de las clulas). Materiales: * 3 vasos que servirn como frascos * 1 hgado de pollo * 1 botella de agua oxigenada (H2O2) Hiptesis: Vaso 1. El hgado, junto con el H2O2 van a reaccionar soltando oxgeno, lo que provocar una presin que

empujar nuestra mano y calentar el fondo del vaso. Vaso 2. Al poner a reaccionar hgado molido con agua oxigenada, la enzima catalasa actuar ms rpido. Vaso 3. La reaccin ser mucho menor pues se le habrn restado propiedades al hgado. Metodologa: 1. En el vaso 1, colocar una parte del hgado, vaciarle un poco de agua oxigenada y tapar inmediatamente con una mano la boca del vaso. (Figura 1) 2. Cortar otro trozo de hgado casi del mismo tamao que el anterior, licuarlo, colocarlo en el vaso, verterle agua oxigenada y observar lo que sucede. (Figura 2) 3. Hervir agua y colocar un pedazo de hgado nuevo, dejarlo all de 2 a 3 minutos. Sacar el trozo de hgado del agua, depositarlo en el vaso y agregar agua oxigenada. Observa la reaccin. (Figura 3) Figura 1. Hgado sin macerar en Figura 2. Reaccin del hgado Figura 3. Hgado hervido en presencia de H2O2. macerado al aplicarse el H2O2. presencia del agua oxigenada.

Descripcin. Discusin. Con el hgado en este estado s notamos la reaccin producida por la enzima catalasa. Al agregar agua oxigenada se observa de inmediato que ocurre una reaccin al aparecer burbujas que demuestran la presencia y liberacin de O2. Esto es el resultado de la ruptura de los agentes oxidantes como lo es la catalasa presentes en la capa externa del hgado.

Descripcin. Discusin. Debido a la accin de la enzima catalasa, el agua oxigenada (H2O2) rompe sus enlaces y se transforma en H2O + O2. La liberacin de oxgeno es lo que produce el burbujeo intenso. La presencia de burbujas es mucho mayor que en el vaso 1 debido a que al estar triturado el pedazo de hgado los enlaces estn ms susceptibles a romperse pues las enzimas se encuentran en la capa posterior del hago y al macerarse, estas enzimas abarcan todo el trozo de hgado.

Descripcin. Discusin. En el caso del trozo de hgado que ha sido cocido no se observa aparicin de burbujas de H2O. Esto es debido al tratamiento trmico realizado, el cual desnaturaliza la enzima catalasa que, en consecuencia, no degrada el agua oxigenada. Se llama desnaturalizacin a la prdida de protenas, quedando la cadena polipeptdica reducida a un polmero e inclusive hay vambis en sus propiedades fsicas y/o qumicas.

Bibliografa: Horton, H. (1995). Bioqumica, Ed. Omega, Mxico. Infografa: www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_54_act.asp www.menorcaweb.net/cnaturals/aula/guions/bioqumica/text5.pdf