1.

GENERALIDADES

ENZIMAS

¿QUE SON?

Las enzimas son proteínas complejas que producen un cambio químico específico en otras
sustancias, sin que exista un cambio en ellas mismas. Por ejemplo, las enzimas pueden convertir los
almidones, las proteínas y los azúcares en sustancias que el cuerpo pueda utilizar. La coagulación
de la sangre es otro ejemplo del trabajo de las enzimas.

CLASIFICACIÓN

OXIDOREDUCTASAS

Catalizan reacciones de oxido reducción, es decir, transferencia de hidrógeno (H) o electrones (e -)

de un sustrato a otro, según la reacción general:

AH2 + B A + BH2

Ared + Box Aox + Bred

Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo c oxidasa.

TRANFERASAS

Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto del hidrógeno) de un sustrato a otro, según
la reacción:
 A-B + C A + C-B

Un ejemplo es la glucoquinasa, que cataliza la reacción representada en la Figura de la derecha:

glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato

HIDROLASAS

Catalizan las reacciones de hidrólisis:

A-B + H2O AH + B-OH

Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reacción:

lactosa + agua glucosa + galactosa

LIASAS

Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos:

A-B A+B

Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa, que cataliza la reacción:

ácido acetacético CO2 + acetona

ISOMERASAS

Catalizan la interconversión de isómeros:

 A B

Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa, que catalizan las reacciones
representadas en la tabla inferior:

FOSFOTRIOSA ISOMERASA FOSFOGLUCOSA ISOMERASA

glucosa-6-
gliceraldehído-3-fosfato dihidroxiacetona-fosfato fructosa-6-fosfato
fosfato

LIGASAS

Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP,
etc.):

A + B + XTP A-B + XDP + Pi

Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que cataliza la reacción:

piruvato + CO2 + ATP oxaloacetato + ADP + Pi

2. COMPETENCIAS

 Conocer la naturaleza, características generales y mecanismos de la regulación de las

enzimas para entender su gran incidencia en los procesos metabólicos que tienen lugar en el
organismo.
 Capacidad para demostrar su conocimiento y comprensión de hechos esenciales, del
concepto, de la actividad y de la clasificación de enzimas para aportar los conocimientos
bioquímicos básicos necesarios en la futura practica de la profesión.
  Destreza para aplicar la información enzimática disponible en el análisis de nuevas
situaciones.
 Razonamiento, argumentación y estudio de aspectos teóricos básico, para entender su
funcionamiento a nivel molecular del ser humano en estado de salud y de enfermedad.
 Capacidad de aplicación de los conocimientos toricos a la resolución de problemas
practicos.
 Habilidades para buscar, analizar y gestionar información bibliográfica de interés científico
a partir de diferentes bibliografías.

3. PRELABORATORIO

SUSTANCIA PRECAUCIONES PROCEDIMEINTO EN

ACIDO CLORHIDRICO Es altamente riesgoso al contacto con
la piel, los ojos y otras mucosas, y no
se debe inhalar ni ingerirse disuelto
en agua. Por lo tanto, a la hora de
emplear este gas reactivo, es
necesario usar guantes, lentes y
mascarillas. En caso de ingestión,
asistir a su médico lo mas pronto
posible.
CLORURO FERRICO El cloruro de hierro (III) es corrosivo
para los metales ferrosos y algunos
metales no ferrosos como el cobre y
sus aleaciones. Evite el contacto con
metales. El material anhidro es un
poderoso agente deshidratante
pudiendo provocar quemaduras en la
piel, en solución mancha la piel y
puede provocar irritación. Use
guantes. Provoca quemaduras por
contacto con los ojos. Use antiparras.
Las sales de hierro son
moderadamente tóxicas por
inhalación. NIOSH REL: TWA 1
mg/m3 como Fe[7] . Cuando trabaja
con sales de hierro en polvo use la
campana del laboratorio o use
mascara con filtro para polvos.
FENOL Precauciones personales: Traje de
protección completa incluyendo
equipo autónomo de respiración.
Precauciones ambientales: NO
verterlo al alcantarillado. La
sustancia es tóxica para los
organismos acuáticos.
CASO DE DERRAME
Recolectar o confinar del material
derramado en la manera mas
conveniente y segura, por ejemplo
mediante el
empleo de cordones de aislamiento
absorbentes.
Si es posible, recuperar del material
derramado.
Dilución y/o neutralización y
disposición en un relleno sanitario
de seguridad
Contenga el derrame y remueva el
material a un contenedor adecuado.
La materia líquida se puede retirar
con un camión de aspirado.
Neutralice con cal o ceniza de soda
y enjuague con agua la zona en la
que se ha producido el derrame.
Evite que el material fluya hacia los
cursos de agua y sistemas de
desagüe.
Ventilar el área de fuga o derrame
Recolectar el material derramado en
la manera más conveniente para su
reciclaje o para su disposición en un
relleno de seguridad. Cuando el
Fenol se encuentra sólido y se
derrama una pequeña cantidad, se
 puede recoger en papel o algún otro
material apropiado, para luego ser
quemado en un lugar seguro. Si se
derrama una cantidad considerable
de Fenol sólido, se puede recoger
para ser reutilizado, o se puede
disolver en Alcohol para luego ser
atomizado en una cámara de
combustión apropiada. Cuando el
Fenol se encuentra como líquido,
las cantidades pequeñas se recogen
con un papel absorbente, y las
cantidades
mayores se recogen y se atomizan
en una cámara de combustión.

¿QUE ES Y PARA QUE SIRVE LA PRUEVA DE FEHLING? ¿QUE COMPUESTOS

IDENTIFICA?

El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:

 Sulfato de cobre cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml.

 Sal de Seignette(Tartrato mixto de Potasio y Sodio), 150 g; solución de hidróxido de sodio
al 40%, 3; agua, hasta 1.000 ml.

Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitación del hidróxido
de cobre (II).

El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un
aldehído. Éste se oxida a ácido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a óxido de cobre(I),
que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reacción es que la forma
aldehído puede detectarse fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad. Si un azúcar reduce
el licor de Fehling a óxido de cobre (I) rojo, se dice que es un azúcar reductor.

Esta reacción se produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no reductores
como la fructosa que contiene un grupo cetona puede enolizarse a la forma aldehido dando lugar a
un falso positivo.

Al reaccionar con monosacáridos, se torna verdoso; si lo hace con disacáridos, toma el color del
ladrillo.

Sirve para demostrar la presencia de glucosa, así como para detectar derivados de esta tales como la
sacarosa o la fructosa.

4. RESULTADOS LABORATORIO:
PEROXIDASA:

TUBO A: LECHE ENTERA 2ml = ROJIZO ( + )

TUBO B: LECHE DESCREMADA 2ml = ROJIZO ( + )

TUBO C: LECHE DESCREMADA 1ml + ENTERA 1ml = ROJIZO ( + )

OBSERVACIONES: Las tres muestras fueron (+) positivas para peroxidasa, pero el tubo A
presento mayor concentración de peroxidasa.

PRESENCIA DEL LACTATO FERRICO Y DEL ION FERRICO:

TUBO 1: LECHE

(AMARILLO) LACTATO FERRICO: ( + )

(VIOLETA) ION FERRICO: ( - )

TUBO 2: YOGURT

(AMARILLO) LACTATO FERRICO: ( + )

(VIOLETA) ION FERRICO: ( + )

OBSERVACIONES: Al agregar 1ml de cloruro férrico y 1ml de acido clorhídrico se observo la

presencia de lactato férrico, de color amarillo en ambas muestras (+) positivas.

Luego al agregar fenol a ambos tubos se presencio el ion férrico de color violeta en el tubo 2 con
muestra de yogurt (+) positivo, y para el tubo 1 leche fue (-) negativo.

PEPSINA:

TUBO A: PEPSINA + HCL + CASEINA = ( + )

TUBO B: PEPSINA + H2O + CASEINA = ( - )

OBSERVACIONES: El tubo A presento un resultado (+) positivo ya que la pepsina actúa en un

pH acido, mientras que el tubo B presento un resultado (-) negativo.

AMILASA SALIVAL:
TUBO A: SALIVA 1ml + LUGOL 10 GOTAS: NARANJA

TUBO B: SALIVA 1ml + HCL 1ml + SOLUCION DE ALMIDON 1ml + LA PRUEVA DE

FEHLING = AZUL CLARO

TUBO C: SALIVA 1ml + ALMIDON 1ml + PRUEBA DE FEHLING = AZUL

TRANSPARENTE

Las muestras de calientan al baño de maria durante 3 minutos.

TUBO A: AMARILLO CLARO

TUBO B: AZUL OSCURO

TUBO C: AZUL OSCURO, PERO EN EL CENTRO SE TORNO CLARO.

5. PREGUNTAS PARA DISCUSIÓN PRELIMINAR

1. ¿Qué factores cree usted que afectaron la actividad de las enzimas en los diferentes
experimentos? ¿Por qué los afectaron? analice cuales son las variaciones entre los
procedimientos que pueden explicar las diferencias entre cada reacción.
2. Investigue y describa cual es la reacción química que cataliza cada una de las enzimas
estudiadas en el laboratorio y describa brevemente cual es su acción biológica ¿en cuál de
las 6 clases principales de enzimas las ubicaría?
3. ¿En qué lugar del cuerpo humano se puede encontrar pepsina? ¿Cuál es su función? Con
base en esta información, discuta el por qué de los resultados del experimento entre la
pepsina y la caseína. ¿Cuál es la enzima y cuál es el sustrato? ¿Cree usted que los resultados
serian los mismos si se utilizara otra proteína diferente como sustrato?
4. ¿Qué papel juega la amilasa salival en el metabolismo de carbohidratos?

1. Los factores que afectan la actividad enzimática son:

- Las temperaturas no adecuadas para que una enzima (que son proteínas) realice sus
funciones tienden a desnaturalizarla y esto causa, deficiencia en las funciones que realiza la
enzima y a temperaturas extremas a dañar la enzima completamente.

- Presión: Las presiones también pueden llegar a dañar las enzimas, sobre todo las presiones
que maneja el organismo internamente. Si no se mantiene estable el organismo, tu presión
interna puede variar y dañar algunas enzimas.

- Humedad: Las diferentes enzimas del cuerpo trabajan en diferentes sectores del mismo
por las funciones, y además por los factores que se presentan en cada parte. En partes
húmedas funcionan ciertas enzimas y en partes "secas" otras.
 - PH: Las condiciones de acidez y basicidad de las diferentes regiones de cuerpo pueden
ayudar o afectar el trabajo de las enzimas.

2. ENZIMAS.

PEROXIDASA = OXIDORREDUCTASA

Es una enzima que cataliza la oxidación de un amplio número de sustratos orgánicos e inorgánicos,
utilizando el poder oxidante del peróxido de hidrógeno.

Donante + H2O2 Donante oxidado + H2O

Es utilizada ampliamente en bioquímica clínica. Así, los ensayos para la determinación y

cuantificación de metabolitos como glucosa, ácido úrico, colesterol o triglicéridos en fluidos
biológicos usan peroxidasa como enzima acoplada. También se utiliza en inmunoensayos para la
detección de virus tan conocidos como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) causante del
sida o el herpesvirus. La peroxidasa también se utiliza como biocatalizador para la generación de
productos de interés biotecnológico e industrial como resinas fenólicas, adhesivos, antioxidantes,
antiestáticos y protectores de radiación magnética, colorantes alimentarios y componentes
bioactivos de detergentes.

PEPSINA =

La pepsina es una peptidasa, una enzima digestiva que degrada las proteínas en el estómago, se
produce en el estómago, actúa sobre las proteínas degradándolas, y proporciona péptidos y
aminoácidos en un ambiente muy ácido. También podemos decir que es una sustancia que degrada
las proteínas hasta péptidos. Es secretada en estado inactivo para que no degrade las proteínas de las
células que las secretan.

AMILASA SALIVAL = HIDROLASA

E + S ↔ ES

En biología es una enzima presente en la saliva, que hidroliza el almidón de todo alimento. tiene la
función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce
principalmente en las glándulas salivares (sobre todo en las glándulas parótidas) y en el páncreas
LABORATORIO DE ENZIMAS

DIANA PAOLA GONZALEZ

CLAUDIA LILIANA PUENTES

JHON JAIRO URRIAGO

PROFESORA:
 OBRADITH CAICEDO

GRUPO:

206 (z)

FUNDACION UNIVERSITARIA DEL AREA ANDINA

FACULTAD DE ENFERMERIA MOLECULAS DE LA VIDA II

BOGOTÁ, 06 DE OCTUBRE DE 2010