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LABORATORIO DE ENZIMAS

LABORATORIO DE ENZIMAS

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1.

GENERALIDADES

ENZIMAS

¿QUE SON? Las enzimas son proteínas complejas que producen un cambio químico específico en otras sustancias, sin que exista un cambio en ellas mismas. Por ejemplo, las enzimas pueden convertir los almidones, las proteínas y los azúcares en sustancias que el cuerpo pueda utilizar. La coagulación de la sangre es otro ejemplo del trabajo de las enzimas.

CLASIFICACIÓN

OXIDOREDUCTASAS Catalizan reacciones de oxido reducción, es decir, transferencia de hidrógeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, según la reacción general: AH2 + B Ared + Box A + BH2 Aox + Bred

Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo c oxidasa.

TRANFERASAS Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto del hidrógeno) de un sustrato a otro, según la reacción: A-B + C A + C-B

Un ejemplo es la glucoquinasa, que cataliza la reacción representada en la Figura de la derecha: glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato

HIDROLASAS Catalizan las reacciones de hidrólisis: A-B + H2O AH + B-OH

Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reacción: lactosa + agua glucosa + galactosa

LIASAS Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos: A-B A+B

Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa, que cataliza la reacción:

ácido acetacético

CO2 + acetona

ISOMERASAS Catalizan la interconversión de isómeros: A B

Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa, que catalizan las reacciones representadas en la tabla inferior: FOSFOTRIOSA ISOMERASA
gliceraldehído-3-fosfato dihidroxiacetona-fosfato

FOSFOGLUCOSA ISOMERASA
glucosa-6fosfato fructosa-6-fosfato

LIGASAS Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP, etc.): A + B + XTP A-B + XDP + Pi

Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que cataliza la reacción: piruvato + CO2 + ATP oxaloacetato + ADP + Pi

2. COMPETENCIAS  Conocer la naturaleza, características generales y mecanismos de la regulación de las enzimas para entender su gran incidencia en los procesos metabólicos que tienen lugar en el organismo.  Capacidad para demostrar su conocimiento y comprensión de hechos esenciales, del concepto, de la actividad y de la clasificación de enzimas para aportar los conocimientos bioquímicos básicos necesarios en la futura practica de la profesión.  Destreza para aplicar la información enzimática disponible en el análisis de nuevas situaciones.  Razonamiento, argumentación y estudio de aspectos teóricos básico, para entender su funcionamiento a nivel molecular del ser humano en estado de salud y de enfermedad.  Capacidad de aplicación de los conocimientos toricos a la resolución de problemas practicos.  Habilidades para buscar, analizar y gestionar información bibliográfica de interés científico a partir de diferentes bibliografías.

3. PRELABORATORIO SUSTANCIA ACIDO CLORHIDRICO PRECAUCIONES
Es altamente riesgoso al contacto con la piel, los ojos y otras mucosas, y no se debe inhalar ni ingerirse disuelto en agua. Por lo tanto, a la hora de emplear este gas reactivo, es necesario usar guantes, lentes y mascarillas. En caso de ingestión, asistir a su médico lo mas pronto posible.

PROCEDIMEINTO EN CASO DE DERRAME
Recolectar o confinar del material derramado en la manera mas conveniente y segura, por ejemplo mediante el empleo de cordones de aislamiento absorbentes. Si es posible, recuperar del material derramado. Dilución y/o neutralización y disposición en un relleno sanitario de seguridad Contenga el derrame y remueva el material a un contenedor adecuado. La materia líquida se puede retirar con un camión de aspirado. Neutralice con cal o ceniza de soda y enjuague con agua la zona en la que

CLORURO FERRICO

El cloruro de hierro (III) es corrosivo para los metales ferrosos y algunos metales no ferrosos como el cobre y sus aleaciones. Evite el contacto con metales. El material anhidro es un poderoso agente deshidratante

FENOL

pudiendo provocar quemaduras en la piel, en solución mancha la piel y puede provocar irritación. Use guantes. Provoca quemaduras por contacto con los ojos. Use antiparras. Las sales de hierro son moderadamente tóxicas por inhalación. NIOSH REL: TWA 1 mg/m3 como Fe7 . Cuando trabaja con sales de hierro en polvo use la campana del laboratorio o use mascara con filtro para polvos. Precauciones personales: Traje de protección completa incluyendo equipo autónomo de respiración. Precauciones ambientales: NO verterlo al alcantarillado. La sustancia es tóxica para los organismos acuáticos.

se ha producido el derrame. Evite que el material fluya hacia los cursos de agua y sistemas de desagüe.

Ventilar el área de fuga o derrame Recolectar el material derramado en la manera más conveniente para su reciclaje o para su disposición en un relleno de seguridad. Cuando el Fenol se encuentra sólido y se derrama una pequeña cantidad, se puede recoger en papel o algún otro material apropiado, para luego ser quemado en un lugar seguro. Si se derrama una cantidad considerable de Fenol sólido, se puede recoger para ser reutilizado, o se puede disolver en Alcohol para luego ser atomizado en una cámara de combustión apropiada. Cuando el Fenol se encuentra como líquido, las cantidades pequeñas se recogen con un papel absorbente, y las cantidades mayores se recogen y se atomizan en una cámara de combustión.

¿QUE ES Y PARA QUE SIRVE LA PRUEVA DE FEHLING? ¿QUE COMPUESTOS IDENTIFICA? El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:

y y

Sulfato de cobre cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml. Sal de Seignette(Tartrato mixto de Potasio y Sodio), 150 g; solución de hidróxido de sodio al 40%, 3; agua, hasta 1.000 ml.

Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitación del hidróxido de cobre (II). El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído. Éste se oxida a ácido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a óxido de cobre(I), que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reacción es que la forma aldehído puede detectarse fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad. Si un azúcar reduce el licor de Fehling a óxido de cobre (I) rojo, se dice que es un azúcar reductor. Esta reacción se produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no reductores como la fructosa que contiene un grupo cetona puede enolizarse a la forma aldehido dando lugar a un falso positivo. Al reaccionar con monosacáridos, se torna verdoso; si lo hace con disacáridos, toma el color del ladrillo. Sirve para demostrar la presencia de glucosa, así como para detectar derivados de esta tales como la sacarosa o la fructosa.

4. RESULTADOS LABORATORIO:

PEROXIDASA: TUBO A: LECHE ENTERA 2ml = ROJIZO ( + ) TUBO B: LECHE DESCREMADA 2ml = ROJIZO ( + ) TUBO C: LECHE DESCREMADA 1ml + ENTERA 1ml = ROJIZO ( + ) OBSERVACIONES: Las tres muestras fueron (+) positivas para peroxidasa, pero el tubo A presento mayor concentración de peroxidasa.

PRESENCIA DEL LACTATO FERRICO Y DEL ION FERRICO: TUBO 1: LECHE

(AMARILLO) LACTATO FERRICO: ( + ) (VIOLETA) ION FERRICO: ( - ) TUBO 2: YOGURT (AMARILLO) LACTATO FERRICO: ( + ) (VIOLETA) ION FERRICO: ( + ) OBSERVACIONES: Al agregar 1ml de cloruro férrico y 1ml de acido clorhídrico se observo la presencia de lactato férrico, de color amarillo en ambas muestras (+) positivas. Luego al agregar fenol a ambos tubos se presencio el ion férrico de color violeta en el tubo 2 con muestra de yogurt (+) positivo, y para el tubo 1 leche fue (-) negativo.

PEPSINA: TUBO A: PEPSINA + HCL + CASEINA = ( + ) TUBO B: PEPSINA + H2O + CASEINA = ( - ) OBSERVACIONES: El tubo A presento un resultado (+) positivo ya que la pepsina actúa en un pH acido, mientras que el tubo B presento un resultado (-) negativo.

AMILASA SALIVAL: TUBO A: SALIVA 1ml + LUGOL 10 GOTAS: NARANJA TUBO B: SALIVA 1ml + HCL 1ml + SOLUCION DE ALMIDON 1ml + LA PRUEVA DE FEHLING = AZUL CLARO TUBO C: SALIVA 1ml + ALMIDON 1ml + PRUEBA DE FEHLING = AZUL TRANSPARENTE Las muestras de calientan al baño de maria durante 3 minutos. TUBO A: AMARILLO CLARO TUBO B: AZUL OSCURO TUBO C: AZUL OSCURO, PERO EN EL CENTRO SE TORNO CLARO.

5. PREGUNTAS PARA DISCUSIÓN PRELIMINAR 1. ¿Qué factores cree usted que afectaron la actividad de las enzimas en los diferentes experimentos? ¿Por qué los afectaron? analice cuales son las variaciones entre los procedimientos que pueden explicar las diferencias entre cada reacción. 2. Investigue y describa cual es la reacción química que cataliza cada una de las enzimas estudiadas en el laboratorio y describa brevemente cual es su acción biológica ¿en cuál de las 6 clases principales de enzimas las ubicaría? 3. ¿En qué lugar del cuerpo humano se puede encontrar pepsina? ¿Cuál es su función? Con base en esta información, discuta el por qué de los resultados del experimento entre la pepsina y la caseína. ¿Cuál es la enzima y cuál es el sustrato? ¿Cree usted que los resultados serian los mismos si se utilizara otra proteína diferente como sustrato? 4. ¿Qué papel juega la amilasa salival en el metabolismo de carbohidratos?

1. Los factores que afectan la actividad enzimática son: - Las temperaturas no adecuadas para que una enzima (que son proteínas) realice sus funciones tienden a desnaturalizarla y esto causa, deficiencia en las funciones que realiza la enzima y a temperaturas extremas a dañar la enzima completamente. - Presión: Las presiones también pueden llegar a dañar las enzimas, sobre todo las presiones que maneja el organismo internamente. Si no se mantiene estable el organismo, tu presión interna puede variar y dañar algunas enzimas. - Humedad: Las diferentes enzimas del cuerpo trabajan en diferentes sectores del mismo por las funciones, y además por los factores que se presentan en cada parte. En partes húmedas funcionan ciertas enzimas y en partes "secas" otras. - PH: Las condiciones de acidez y basicidad de las diferentes regiones de cuerpo pueden ayudar o afectar el trabajo de las enzimas.

2. ENZIMAS. PEROXIDASA = OXIDORREDUCTASA Es una enzima que cataliza la oxidación de un amplio número de sustratos orgánicos e inorgánicos, utilizando el poder oxidante del peróxido de hidrógeno. Donante + H2O2 Donante oxidado + H2O

Es utilizada ampliamente en bioquímica clínica. Así, los ensayos para la determinación y cuantificación de metabolitos como glucosa, ácido úrico, colesterol o triglicéridos en fluidos biológicos usan peroxidasa como enzima acoplada. También se utiliza en inmunoensayos para la detección de virus tan conocidos como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) causante del sida o el herpesvirus. La peroxidasa también se utiliza como biocatalizador para la generación de productos de interés biotecnológico e industrial como resinas fenólicas, adhesivos, antioxidantes, antiestáticos y protectores de radiación magnética, colorantes alimentarios y componentes bioactivos de detergentes.

PEPSINA = La pepsina es una peptidasa, una enzima digestiva que degrada las proteínas en el estómago, se produce en el estómago, actúa sobre las proteínas degradándolas, y proporciona péptidos y aminoácidos en un ambiente muy ácido. También podemos decir que es una sustancia que degrada las proteínas hasta péptidos. Es secretada en estado inactivo para que no degrade las proteínas de las células que las secretan.

AMILASA SALIVAL = HIDROLASA E+S ES

En biología es una enzima presente en la saliva, que hidroliza el almidón de todo alimento. tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares (sobre todo en las glándulas parótidas) y en el páncreas

LABORATORIO DE ENZIMAS

DIANA PAOLA GONZALEZ CLAUDIA LILIANA PUENTES JHON JAIRO URRIAGO

PROFESORA: OBRADITH CAICEDO

GRUPO: 206 (z)

FUNDACION UNIVERSITARIA DEL AREA ANDINA FACULTAD DE ENFERMERIA MOLECULAS DE LA VIDA II BOGOTÁ, 06 DE OCTUBRE DE 2010

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