INFORME: PURIFICACIÓN DEL PRODUCTO DE LA PCR

I. INTRODUCCIÓN:
• Los Sistemas de Purificación de PCR están diseñados para limpiar de
componentes de reacción de PCR (primers, nucleótidos, enzimas, sales,
colorantes y otras impurezas) del ADN amplificado. La cadena doble o
simple de ADN purificado está listo para usar en una variedad de
aplicaciones tales como secuencias automáticas de ADN fluorescentes,
secuencias manuales, mapas de restricción, clonados y etiquetados. El
sistema es útil también para la purificación de cadenas dobles o simples
de ADN a partir de reacciones de endonucleasas de restricción,
etiquetado y otras reacciones de modificación del ADN. Ambos, la
columna simple como los formatos de placa de 96 pocillos están
disponibles y son también compatibles con los protocolos de vacío y/o
centrifugación.

Fig. 1: Esquema de los pasos para la purificación de la PCR.

 II. MATERIALES Y REACTIVOS:
 MATERIALES:
 Micropipetas
 Tips
 Tubos eppendorff
 Gel de agarosa al 2%
 Gillet
 Gradilla para tubos eppendoff
 SOLUCIONES:
• Agua destilada
• Binding buffer
• Isopropanol
• Filtro (spin clean up, gel extraction, mini prep)
• Washing buffer
• TE (Triss EDTA, elution buffer)

III. RESULTADOS:
PURIFICACIÓN DEL PRODUCTO DE LA PCR:
• El kit utilizado fue el de Gel cleanup y se realizó todo su procedimiento
para la purificación de la PCR y para comprobar los resultados se realizó
la electroforesis en el gel de agarosa y cuando se leyeron los resultados
ningún grupo obtuvo banda.
• Se realizó otra electroforesis donde un grupo puso su muestra y se
obtuvo banda, es decir salio positivo, por ello se volverá a correr la
muestra en el gel de agarosa.

Fig, 2: Purificación del producto de la PCR. A) Primera electroforesis, ningun resultado

fue positivo B) Segunda electroforesis, se observan dos resultados positivos.
IV. DISCUCIÓN:
• El resultado en la purificación de la PCR fue negativo inicialmente para
todos los grupos.
• En la segunda electroforesis solo un grupo puso su muestra y el
resultado que se obtuvo fue positivo, esto es un indicador para deducir
que la primera electroforesis se realizó incorrectamente o tubo algún
error.
• Por los resultados obtenidos en la segunda electroforesis deducimos
que la primera presento resultados erróneos y por ello volveremos a
realizar una electroforesis con nuestra muestra y de esta obtendremos
resultados finales
V. CONCLUSIONES:
• La purificación del producto de la PCR es un método fácil y práctico en el
que se emplean filtros de distintos tipos, muchos laboratorios han creado
productos para esta purificación en los que varia la técnica y la
composición del filtro, en algunos de ellos se acortan los pasos y se
reducen al mínimo los reactivos, por otro lado el resultado que se obtiene
será el mismo con algunas variantes en cuanto a definición y visibilidad
de la banda.
• Es necesario realizar una segunda electroforesis si es que el resultado
obtenido fue negativo puesto que pudo haber habido alguna falla en la

electroforesis inicial.