VIRUS RESPIRATORIO SINCICIAL BOVINO (BRSV)

ETIOLOGA
El Virus Respiratorio Sincicial Bovino (VRSB) es la causa de una neumona viral
primariamente en ganado bajo los 6 meses de edad, en terneros de 1 ao y
ganado adulto (Radostits et al., 2007). Este virus fue por primera vez detectado el
ao 1970, y luego fue identificado en 1974 (Paccaud y Jacquier, 1970; Wellemans
et al., 1970).
Es un virus envuelto, posee una molcula de ARN de hebra simple, no
segmentada y de sentido negativo (Murphy et al., 1999; Sharma y Adklakha,
2009). Pertenece al orden Mononegavirales, familia Paramyxoviridae, subfamilia
Paramyxovirinae y al gnero Pneumovirus (Maclachlan y Dubovi, 2011).
Los virus de la familia Paramyxoviridae son usualmente esfricos con un dimetro
de 100-150 nm., poseen filamentos de varios micrmetros de largo. Tiene una
bicapa lipdica que contiene protenas de la matriz y puntas de glicoprotenas
(Sharma y Adklakha, 2009). Estas glicoprotenas son la protena G de 84 kDa
responsable de la unin del virus a la clula blanco y la protena F de 20-48 kDa
que tiene que ver con la entrada del virus a la clulas y su posterior diseminacin
entre clulas por fusin celular, ambas son fundamentales en la patognesis de la
infeccin. Contienen una nucleocpside con forma de espinas de pescado
helicoidalmente simtrica, esta tiene 600-800 nm. de largo y 13 nm. de dimetro
en el caso de los Pneumovirus (Murphy et al., 1999; Berrios-Etchegaray, 2011).
Su genoma tiene un tamao de 15-16 kb y presenta 6 a 10 genes separados por
secuencias conservadas no codificantes de trmino, poliadenilaciones y seales
de inicio. El orden de genes es generalmente conservado dentro de la familia, los
virus pertenecientes al gnero Pneumovirus contiene 10 genes los cuales

codifican 10 protenas, de las cuales la mayora son estructurales (Murphy et al.,

1999).
Antignicamente est relacionado con el virus respiratorio sincicial humano
(VRSH) aunque no son serolgicamente idnticos. Tambin puede afectar a los
bovinos los que pueden ser reservorios para este virus (Berrios-Etchegaray, 2011).
Poseen un estrecho rango de hospedadores y han sido identificados solo en
vertebrados, principalmente en mamferos y aves. Son lbiles al calor o a la
desecacin y son destruidos fcilmente por desinfectantes y solventes lipdicos
(Murphy et al., 1999).

EPIDEMIOLOGA
El VRSB es el principal componente del Complejo Respiratorio Bovino (BerriosEtchegaray, 2011). Estudios en vacas lecheras, indican que el 90 % de las
infecciones primarias ocurren en terneros y vaquillas; poco en ganado por sobre 2
aos, y todo el ganado en el rebao son seropositivos cuando tienen sobre 3 aos
de edad (Radostits et al., 2007). Tambin la enfermedad ha sido reportada en
distintas reas y bajo diferentes sistemas de manejo en sistemas lecheros y de
carne (Paccaud y Jacquier, 1970).
En las vacas lecheras, introducciones recientes de ganado joven pueden introducir
la infeccin en el ganado local que no han tenido exposiciones previas al virus, o
en los cuales su inmunidad, por infecciones previas, ha disminuido (Radostits et
al., 2007).
Los teneros lactantes de carne con anticuerpos VRSB calostrales no estn
protegidos contra la infeccin, pero la incidencia y severidad de la enfermedad
clnica est asociado inversamente a los niveles de anticuerpos maternos en
teneros bajo los 3 meses. El alto porcentaje de reinfeccin ocurre mayormente en
vacas durante su primera lactancia. Animales viejos pueden tener inmunidad ms
efectiva debido a exposiciones previas (Radostits et al., 2007).

Tambin la enfermedad ocurren en terneros de carne lactantes de 1-8 meses de

edad en pradera, con madres sin ninguna historia de estrs previo. Una ocurrencia
comn es en teneros de carne destetados de 6-8 meses de edad despus de 2-3
semanas del destete y en confinamiento. Ganado de 1 ao en engorde a corral
tambin son susceptibles (Radostits et al., 2007). La infeccin inaparente del
ganado tambin es muy comn (Maclachlan y Dubovi, 2011).
Encuestas seroepidemiolgicas en ganado de engorda resulto que la
seroconversin del virus puede ocurrir por sobre el 70% de los animales 1 mes
despus de su llegada. Animales con bajos ttulos para el virus presentan mayor
riesgo, en cambio los que presentan altos niveles de anticuerpos sricos contra
VRSB estn asociados a menor riesgo de una enfermedad respiratoria (Radostits
et al., 2007).
Hay evidencia de que el virus circula durante el verano y primavera a muy bajos
niveles o simplemente no circula (Radostits et al., 2007). La infeccin se produce a
menudo durante los meses de invierno cuando el ganado son mantenidos en
condiciones de confinamiento, sin embargo, han habido importantes brotes en
rebaos de vacas y teneros en verano (Maclachlan y Dubovi, 2011). La infeccin
persistente en algunas vacas en el rebao puede ser un medio por el cual el virus
sobrevive durante el verano, pero un estado estacionario de reinfeccin en vacas
seropositivas a travs del ao a niveles bajos, puede mantener un reservorio de
infeccin (Radostits et al., 2007).
El virus se disemina rpidamente, probablemente a travs de aerosoles o gotas de
excreciones del tracto respiratorio. Los anticuerpos prexistentes, que pueden
derivar de manera pasiva desde la transferencia materna o de manera activa a
travs de una infeccin previa o vacunacin, no previenen la replicacin y
excrecin del virus, aunque los signos clnicos puede que sean menores
(Maclachlan y Dubovi, 2011).

La tasa de morbilidad en el rebao de la enfermedad clnica puede variar desde

30-50% o mas alta, En el caso de la letalidad, la tasa es usualmente baja, 3-5 %
pero puede ser ms alta (Radostits et al., 2007).

PATOGENIA
El VRSB causa rinitis, traquetis, bronquitis, bronquiolitis y una neumona
intersticial leve. En infecciones naturales, las lesiones principales son la bronquitis
y la bronquiolitis en porciones craneoventrales del pulmn adems de enfisema y
edema extendido por los pulmones. Estas zonas del pulmn estn pobremente
ventiladas y se produce una hipoxemia arterial asociada a la alteracin de la
ventilacin y perfusin (Radostits et al., 2007).
La patognesis de la neumona aguda fatal por VRSB no es muy clara. Se
producen lesiones exudativas o necrotizantes, bronquiolitis, atelectasia, edema
intersticial y enfisema. La enfermedad es precedida de una enfermedad
respiratoria leve, varios das antes, lo que sugiere que la hipersensibilidad puede
jugar un rol en las lesiones pulmonares (Radostits et al., 2007). Presenta un
perodo de incubacin entre 5 y 7 das (Berrios-Etchegaray, 2011). La etapa
siguiente puede producirse una leve mejora de la enfermedad respiratoria leve y
es asociada al comienzo de la enfermedad respiratoria ms severa. El anticuerpo
IgE especifico del virus puede jugar un rol en la patognesis de la enfermedad
severa, como parte de la reaccin de hipersensibilidad (Radostits et al., 2007).
La enfermedad severa altamente letal est asociada a la degranulacin de
mastocitos (por la unin de alrgeno-IgE-mastocito), los cuales producen cambios
significativos en el tono muscular y la permeabilidad vascular del tracto
respiratorio. Las sustancias liberadas son al menos, parcialmente responsables
por el edema pulmonar, a travs de la vasoconstriccin y el aumento de la
permeabilidad dada por la histamina. El efecto de la histamina en terneros y
ganado joven, produce una alteracin de la funcin respiratoria, a travs de
contraccin de la trquea y venas lo que produce hipertensin (Radostits et al.,
2007).

Esto trae como consecuencia una predominancia de la respuesta de Th2, con

liberacin preferencial de citoquinas inflamatorias en ausencia de una respuesta
de las clulas T CD8. Esta respuesta anormal de las clulas Th2 con eosinofilia
pueden ser reproducidas por inmunizacin con vacunas recombinantes que
expresan solo la protena G del virus. Esta protena es una de las ms singulares
entre las protenas virales como resultado de su alto grado de glicolizacin, una
propiedad que puede ayudar a evadir la vigilancia inmunitaria y comprometer
esfuerzo para desarrollar una vacuna efectiva (Maclachlan y Dubovi, 2011).
Esta reaccin inflamatoria produce que los septos interalveolares e interlobulares
a menudo queden fibrticos, hiperplasia de los neumocitos tipo II y del epitelio
bronquiolar. Tambin se observan clulas gigantes multinucleadas o sincicios
(Radostits et al., 2007; Ellis et al., 1996; Berrios-Etchegaray, 2011).

SIGNOLOGA
Signos clnicos de infeccin en ganado ms viejo, particularmente aquellos que
fueron expuestos previamente al virus, presentan signos menos severos. En casos
ms de enfermedad leve, presentan fiebre, anorexia y descenso en la produccin
de leche por 3-5 das. En vacas lactantes produce un considerable descenso de la
produccin diaria de leche (Radostits et al., 2007).
En brotes de enfermedad aguda, la enfermedad es ms severa. Se produce tos no
productiva, disnea y descarga nasal bilateral. Fiebre entre 40-42 C, anorexia y
descenso en la produccin de leche. En la auscultacin de los pulmones se
escucha una respiracin ruidosa sobre la zona ventral lo que indica
consolidaciones y sibilancias indicando bronquiolitis (Radostits et al., 2007).

DIAGNSTICO
Es difcil obtener un diagnostico etiolgico definitivo, porque el virus es muy lbil
en muestras de tejido y la deteccin del virus en especmenes es pobre, debido a
tcnicas de laboratorio inadecuadas (Radostits et al., 2007).

Es importante no confundir con el Virus Sincicial Bovino que pertenece a la

subfamilia Spumaviriane de la familia Retroviridae y que es un virus apatgeno
para el bovino (Berrios-Etchegaray, 2011).
La alta prevalencia de ttulos de anticuerpos y la necesidad de personal
capacitado para procesar e interpretar las pruebas diagnosticas, ha obstaculizado
el desarrollo de una rutina diagnostica. Un aislado exitoso del virus, de un caso
tpico de la enfermedad es poco frecuente y puede tomar 11-21 das debido a la
tarda aparicin de efecto citoptico (Radostits et al., 2007). El aislamiento del
virus se confirma con la utilizacin de suero hiperinmune (Smith et al., 1975).
Debido a todo estas dificultades, el aislamiento del virus no es comnmente
recomendado como un acercamiento diagnostico (Radostits et al., 2007).
La muestra ideal del virus es el aspirado transtraqueal en etapas tempranas de la
enfermedad. La muestra tambin provee clulas para la tcnica de tincin de
anticuerpos con inmunofluorescencia (IFA). El anticuerpo fluorescente es una de
las pruebas ms rpidas, seguros y sensitivas para diagnosticar la infeccin
(Radostits et al., 2007). La fluorescencia positiva est limitada a 2-4 das en
corderos infectados experimentalmente con VRSB, tambin se pueden producir
inmunofluorescencias no especficas cuando se examina material nasofarngeo
(Thomas y Stott, 1981).
El ensayo PCR es rpido, sensitivo y puede ser recomendado como mtodo de
eleccin para el anlisis clnico. La presencia del virus puede ser determinada por
el uso de PCR en muestras nasales tomadas en la fase aguda de un brote
sospechoso y tambin en homogeneizados de rganos (Radostits et al., 2007;
Quinting et al., 2007). El virus puede ser detectado y cuantificado en cultivos
celulares con el RT-PCR y ensayos cuantitativos y competitivos de RT-PCR
(Radostits et al., 2007).
Una comparacin entre ELISA, inmunoensayo de captura de antgenos (EIA) e
inmunofluorescencia indirecta (IIF) con RT-PCR. ELISA mostr tener una
sensibilidad de 60% y especificidad de 100% comparado con RT-PCR. En el caso

de EIA e IIF tienen una sensibilidad de 47% y una especificidad de 99% y 97%
respectivamente, comparados con RT-PCR (Brodersen, 2010).
La inmunohistoqumica (IHC) tiene una ventaja por sobre la IIF y es que la tincin
permanente muestra el antgeno a travs del microscopio en asociacin con las
lesiones. La tincin usada es formalina la cual aborda el problema de labilidad de
los tejidos y perdidas del antgeno (Haines et al., 1989).
La prueba estndar para los anticuerpos VRSB es la prueba neutralizacin del
virus. Lo ideal es usar muestras de enfermedad aguda y de animales
convalecientes (Radostits et al., 2007).

TRATAMIENTO
Antimicrobianos de amplio espectro por 3-5 das para neumona secundaria
bacteriana. Recuperacin ocurre gradualmente en un periodo de 3-5 das.
Tambin se pueden usar AINES pero no hay evidencia de que sea efectivo
(Radostits et al., 2007).

PREVENCIN Y CONTROL
Un acercamiento racional al control seria un buen manejo del rebao para
minimizar los estresores como la inadecuada ventilacin. Los ingresos de nuevos
animales al rebao deben ir primero a cuarentena por 2-3 semanas antes de
mezclarlos con el rebao (Radostits et al., 2007).
Calostro
El calostro es importante para combatir las infecciones por su composicin posee
inmunoglobulinas maternas, se ha evaluado el efecto del VRSB en terneros no
alimentados con calostro y otro grupo alimentado con calostro, el resultado fue
que los privados de calostro desarrollaron una enfermedad mas severa que los
alimentados con calostro (Belknap et al., 1993). Sin embargo la presencia de

anticuerpos pasivos ha mostrado efectos negativos cuando son los terneros son
vacunados (Radostits et al., 2007).
Vacunas e inmunizacin
Varias vacunas vivas modificadas e inactivadas estn disponibles para el control,
pero hay algunas pruebas clnicas que estn evaluando la eficacia de la vacuna
bajo condiciones naturales. Porque los terneros bajo 6 meses de edad son
infectados ms frecuentemente por el virus a pesar de la presencia de anticuerpos
calostrales, por lo tanto, existe necesidad de una vacuna que sea efectiva para los
terneros (Radostits et al., 2007).
Los intentos de vacunacin contra los virus respiratorios sinciciales comenzaron
con el uso de una vacuna inactivada con formalina, esta no solo fall en prevenir
la enfermedad si no que indujo una respuesta clnica exagerada a la infeccin
natural en jvenes vacunados (Kapikjan et al., 1969).
Se realiz un estudio para determinar si las vacunas inactivadas inducan la
misma respuesta de anticuerpos que una vacuna viva modificada. Los terneros
que recibieron la vacuna viva modificada produjeron un titulo ms alto de
anticuerpos neutralizantes que los terneros que recibieron la vacuna inactivada.
Sin embargo se han utilizado diferentes adyuvantes a las vacunas inactivadas con
el objetivo de generar altos niveles de anticuerpos neutralizantes, proteger contra
la infeccin natural e inducir la respuesta de linfocitos Th1 en vez de la Th2
(Brodersen, 2010).
Existen vacunas combinadas como la CattleMaster 4 que contiene el VRSB como
virus vivo modificado, el que induce una respuesta local por IgA y sistmica
mediada por anticuerpos antiprotenas F y G, adems de la inmunidad celular.
Esta vacuna no cruza la placenta, no elimina virus despus de su administracin,
no es inmunosupresora ni abortiva. Se administran dos dosis separadas por 2 y 4
semanas. Se pueden vacunar a vacas gestantes (Berrios-Etchegaray, 2011).

La presencia de anticuerpos pasivos interfieren con la inmunizacin a travs de la

vacunacin de terneros con vacunas inactivadas, por lo que las vacunas tienen
que ser efectivas y sobrepasar el efecto inmunosupresivo de los anticuerpos
calostrales (Radostits et al., 2007). Para solucionar esto, las investigaciones de los
ltimos aos se han centrado en utilizar vacunas intranasales contra el VRSB, las
cuales han probado ser eficaces en terneros sin anticuerpos maternos, los cuales
desarrollaron signos leves de la enfermedad en comparacin con el grupo control
(no vacunado) (Xue et al., 2010). En otro estudio, donde se vacunaron grupos
seronegativos y seropositivos intranasalmente con una vacuna viva modificada de
administracin subcutnea, tuvo como resultados que en ambos grupo se produjo
una enfermedad respiratoria severa, pero en el grupo seropositivo se produjeron
mayores cambios en la temperatura rectal y mayor nmero de das diseminando el
virus (Ellis et al., 2010).

SITUACIN EN CHILE
La infeccin por el VRSB se detect mediante inmunofluorescencia al constatarse
la presencia de antgenos del VRSB en aspirado nasofarngeo de 13 teneros
provenientes de la provincia de Valdivia, sugirindose que el VRSB jugara un
papel de importancia en los problemas respiratorios de terneros (Riedemann et al.,
1993). Posteriormente se detect una seroprevalencia predial de 100% y una
seroprevalencia individual de 51,8% (Riedemann et al., 1996).

BIBLIOGRAFA

BAKER, J.C.; AMES, T.R.; MARKHAM, R.J. 1986. Seroepizootiologic study of

bovine respiratory syncytial virus in a dairy herd. Am J Vet Res, 47(2): 240245
(citado por Brodersen, B. 2010. Bovine Respiratory Syncytial Virus. [en lnea].
Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice. 26(323-333).
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162>
[consulta:26-12-2011 ]).
BERROS-ETCHEGARAY, P. 2011. Enfermedades virales de animales
domsticos. Situacin en Chile. Salesianos impresores S.A. Santiago, Chile. 304p.
BRODERSEN, B. 2010. Bovine Respiratory Syncytial Virus. [en lnea]. Veterinary
Clinics of North America: Food Animal Practice. 26(323-333).
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162>
[consulta:26-12-2011 ].
ELLIS, J.A.; PHILIBERT, H.; WEST, K.; CLARK, E.; MARTIN, K.; HAINES, D.
1996. Fatal pneumonia in adult dairy cattle associated with active infection with
bovine respiratory syncytial virus. [en lnea]. Can Vet J. 37(103-104).
<http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1576628/pdf/canvetj000990041.pdf> [consulta: 26-12-2011].
ELLIS, J.; GROW, S.; GOJI, N. 2010. Response to experimentally induced
infection with bovine respiratory syncytial virus following intranasal vaccination of
seropositive and seronegative calves. [en lnea]. J Am Vet Med Assoc. 236(9): 991999. <http://avmajournals.avma.org/doi/full/10.2460/javma.236.9.991>. [consulta:
07-01-2012].
KAPIKJAN, A.Z.; MITCHEL, R.H.; CHANOCK, R.M.; SHVEDOFF, R.A.;
STEWART, C.E. 1969. An epidemiologic study of altered clinical reactivity to
respiratory syncytial (RS) virus infection in children previously vaccinated with an
inactivated RS virus vaccine. Am J Epidemiol. 89(4):405421 (citado por
Brodersen, B. 2010. Bovine Respiratory Syncytial Virus. [en lnea]. Veterinary

Clinics of North America: Food Animal Practice. 26(323-333).

<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162>
[consulta:26-12-2011 ]).
HAINES, D.M.; CLARK, E.G.; CHELACK, B.J. 1989. The detection of bovine
respiratory syncytial virus in formalin fixed bovine lung with commercially available
monoclonal antibodies and avidin biotin complex immunohistochemistry. Can J Vet
Res. 53(3):366368 (citado por Brodersen, B. 2010. Bovine Respiratory Syncytial
Virus. [en lnea]. Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice.
26(323-333).
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162>
[consulta:26-12-2011 ]).
MACLACHLAN, J.; DUBOVI, E. 2011. Fenners Veterinary Virology. 4th ed.
Elsevier. Oxford, UK. 507p.
MURPHY, F.; GIBBS, E.; HORZINEK, M.; STUDDERT, M. 1999. Veterinary
Virology. Academic Press. California, EE.UU. 615p.
PACCAUD, M.F.; JACQUIER, C.L. 1970. A respiratory syncytial virus of bovine
origin. Arch Gesamte Virusforsch. 30(4):327342 (citado por Brodersen, B. 2010.
Bovine Respiratory Syncytial Virus. [en lnea]. Veterinary Clinics of North America:
Food Animal Practice. 26(323-333).
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162 >
[consulta:26-12-2011 ]).
QUINTING, B.R.; LETELLIER, C.; ROBERT, B.; BOXUS, M, KERKHOFS, P.;
SCHYNTS, F.; COLLARD, A. 2007. Development of a 1-step enzyme-linked
immunosorbent assay for the rapid diagnosis of bovine respiratory syncytial virus in
postmortem specimens. J Vet Diagn Invest. 19 (3):238243 (citado por Brodersen,
B. 2010. Bovine Respiratory Syncytial Virus. [en lnea]. Veterinary Clinics of North
America: Food Animal Practice. 26(323-333).
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162>
[consulta:26-12-2011 ]).

RADOSTITS, O.; GAY, C.; HINCHCLIFF, K.; CONSTABLE, P. 2007. Veterinary

Medicine. 10th ed. Elsevier. Oxford, Uk. 2065p.
RIEDEMANN, S.; REINHARDT, G.; TADICH, N.; AGUILAR, M.; AGUILAR, R.;
MONTECINOS, M.I.; MIRANDA, J.C. 1996. Seroprevalencia de VDVB, VHB-1, PI3 y VRSB en 2 predios lecheros de la provincia de Valdivia, Chile. Arch. Med Vet.
28(1):121-124 (citado por Berros-Etchegaray, P. 2011. Enfermedades virales de
animales domsticos. Situacin en Chile. Salesianos impresores S.A. Santiago,
Chile. 304p.
RIEDEMANN, S.; REINHARD, G.; TADICH, N.; MUOZ, X.; MONTECINOS, M.I.
1993. Diagnstico de infecciones respiratorias virales en bovinos mediante
inmunofluorescencia. [en lnea]. Avances en Ciencias Veterinarias. 8(2). <
http://www.revistas.uchile.cl/index.php/ACV/article/viewArticle/6126/5984>
[consulta: 03-01-2012].
SHARMA, N.; ADKLAKHA, C. 2009. Textbook of Veterinary Virology. International
Book Distributing Co. Delhi, India. 364p.
SMITH, M.H.; FREY, M.L.; DIERKS, R.E. 1975. Characterization, and
pathogenicity studies of a bovine respiratory syncytial virus. Arch Virol. 47(3):237
247 (citado por Brodersen, B. 2010. Bovine Respiratory Syncytial Virus. [en lnea].
Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice. 26(323-333).
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162 >
[consulta:26-12-2011 ]).
THOMAS, L.H.; STOTT, E.J. 1981. Diagnosis of respiratory syncytial virus
infection in the bovine respiratory tract by immunofluorescence. Vet
Rec.108 (20):432435 (citado por Brodersen, B. 2010. Bovine Respiratory
Syncytial Virus. [en lnea]. Veterinary Clinics of North America: Food Animal
Practice. 26(323-333).
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162 >
[consulta:26-12-2011 ]).

WELLEMANS, G.; LEUNEN, J.; LUCHSINGER, E. 1970. Respiratory ailments of

cattle: isolation of a virus (220/69) with serologic resemblance to the human
respiratory syncytial virus. Ann Med Vet. 114:8993 (citado por Brodersen, B.
2010. Bovine Respiratory Syncytial Virus. [en lnea]. Veterinary Clinics of North
America: Food Animal Practice. 26(323-333).
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0749072010000162 >
[consulta:26-12-2011 ]).
XUE, W.; ELLIS, J.; MATTICK, D.; SMITH, L.; BRADY, R.; TRIGO, E. 2010.
Immunogenicity of a modified-live virus vaccine against bovine viral diarrhea virus
types 1 and 2, infectious bovine rhinotracheitis virus, bovine parainfluenza-3 virus,
and bovine respiratory syncytial virus when administered intranasally in young
calves. [en lnea]. Vaccine. 28(22): 3784-3792.
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0264410X10004433>. [consulta:
07-01-2012].