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Caracteristicas de Enzimaticas Tipicas
Caracteristicas de Enzimaticas Tipicas
INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
RESUMEN: Las enzimas son biocatalizadores que aceleran reacciones qumicas. Estas reacciones se llevan a cabo en
muy especficas: pH, temperatura, locacin, entre otras. El propsito del experimento realizado es ilustrar la
especificidad de las enzimas y el uso de la especificidad de las enzimas para detectar la presencia de dicha enzima en
un extracto crudo. Se realiz la identificacin de cinco enzimas: ureasa, amilasa, peroxidasa, catalasa y polifenol
oxidasa. Adems de una muestra problema para determinar las enzimas presentes. Para cada una de ellas se utilizaron
cinco diferentes muestras. Frijol y coliflor para la ureasa, saliva humana para la amilasa, coliflor para la peroxidasa,
hgado de res para la catalasa y cscara de manzana para la polifenol oxidasa. Cada una tuvo un tratamiento diferente y
en cada prueba hubo un blanco (agua destilada) para poder comparar un resultado negativo con uno positivo. Se
identific la presencia de todas las enzimas en las muestras conocidas y en la desconocida se determin la existencia de
ureasa y peroxidasa.
PALABRAS CLAVE: Peroxidasa, catalasa, amilasa, polifenol oxidasa, ureasa
ABSTRACT: Enzymes are catalysts that accelerate chemical reactions. These reactions are performed in very specific
pH, temperature, location, among others. The purpose of the experiment performed to illustrate the specificity of
enzymes and the use of the specificity of enzymes to detect the presence of said enzyme in a crude extract. urease,
amylase, peroxidase, catalase and polyphenol oxidase: identifying five enzymes was performed. In addition to a test
sample to determine these enzymes. For each five different samples were used. Beans and cauliflower for urease,
human saliva amylase, peroxidase cauliflower, beef liver for catalase and apple peel for polyphenol oxidase. Each had
a different treatment and in each test was a blank (distilled water) to compare a negative with a positive. the presence
of all known enzymes in samples and in the unknown was determined the existence of urease and peroxidase was
identified.
INTRODUCCIN
Las enzimas son biocatalizadores que aceleran
reacciones qumicas. Las enzimas son protenas
que participan en la regulacin de mecanismos que
permiten la adaptacin a diferentes situaciones.
Estas reacciones se llevan a cabo en condiciones
muy especficas: pH, temperatura, locacin, etc.
La especificidad de una enzima tambin recae en
el tipo de reaccin catalizada, que se denomina
especificidad de accin, y en los sustratos que
modifican, especificidad de sustratos.
La
actividad de una enzima se mide cuantificando el
incremento de la velocidad de la reaccin [1].
Durante esta prctica se trabaj con 5 enzimas:
ureasa, amilasa, peroxidasa, catalasa y polifenol
oxidasa.
La ureasa es una exoenzima que cataliza la
reaccin de hidrolisis de la urea, el principal
producto celular nitrogenado de la degradacin de
las protenas y los cidos nucleicos. La ureasa se
encuentra
principalmente
en
semillas,
microorganismos e invertebrados [2].
La enzima -amilasa, presente en el tubo digestivo
de los animales (en la saliva y jugo pancretico)
hidroliza la cadena lineal del almidn gelatinizado
atacando los enlaces (1-4) al azar a lo largo de la
cadena para producir una mezcla de maltosa y
glucosa [3].
Las peroxidasas son generalmente enzimas de
protena de porfirina de hierro que catalizan la
oxidacin de los sustratos por el perxido de
hidrogeno. En otras palabras, la peroxidasa es un
enzima que descompone el perxido de hidrogeno
en presencia de un compuesto oxidable el que
transfiere un tomo de oxgeno. La oxidacin del
catecol o bencidina por el agua oxigenada a travs
de la peroxidasa ocasiona un cambio de color que
es normalmente empleado como detector de la
actividad peroxidasa [4].
La catalasa forma parte de los sistemas de
destoxificacin de las clulas animales y vegetales,
METODOLOGA
Ensayo enzimtico
1) Preparacin de extractos de enzimas
Se prepararon las siguientes extracciones, los
clculos se encuentran en anexos.
1. Amilasa: Se tomaron aproximadamente 4
ml de saliva humana y se diluyeron con 4
ml de una solucin de NaCl 0.1 M.
2. Ureasa: 20 g de frijol y cebada se
remojaron desde un da antes y se
trituraron con 100 ml de amortiguador de
fosfatos 0.1 M pH 7 conteniendo 0.2 M de
NaCl. El extracto es separado mediante una
gasa.
3. Peroxidasa 20 g de coliflor se macharon
con 100 ml de amortiguador de fosfato de
potasio 0.2 M pH 7.5 conteniendo 0.3 M de
NaCl, el extracto es separado mediante una
gasa.
4. Catalasa: 20 g de hgado de res se
homogenizaron con una licuadora en 100
RESULTADOS
Ensayo enzimtico
Amilasa
En la figura 1 se puede observar la prueba de
amilasa. Se encuentran dos tubos de ensayo, a la
derecha el blanco (agua destilada) y en la
izquierda el que contiene la saliva humana. En el
tubo conteniendo la saliva humana hay ms
lquido que en el blanco. Se puede decir que el
almidn absorbi el agua destilada, y, por el
contrario, la saliva humana produjo ms lquido.
Polifenol oxidasa
La figura 2 representa la prueba de polifenol
oxidasa. El tubo de ensayo a la derecha es el
blanco y el que se encuentra a la izquierda es el
catecol. Se puede observar una diferencia de color
en el lquido. El que contiene catecol tiene un
color caf claro, estilo sepia y el blanco conserva
su transparencia.
y blanco
Peroxidasa
En la figura 4 se encuentran dos tubos de ensayo,
el que est a la izquierda es el blanco y el que est
a la derecha es el que contiene la muestra de
coliflor. Se puede observar un cambio de color en
la muestra positiva, pues de ser incoloro se torn
caf-verdoso.
con coliflor
Catalasa
En la figura 3 se hallan dos tubos de ensayo con la
prueba de la enzima catalasa. El de la izquierda es
el que contiene el hgado de res y el de la derecha
es el blanco. El color no tiene importancia en esta
prueba ya que proviene del hgado. La evidencia
de la presencia de la enzima es la espuma formada
Ureasa
En la figura 5 se muestra la prueba de ureasa el
tubo del lado derecho es el blanco, el tubo del
centro contiene la enzima conocida tratada con
fenolftalena y el de la izquierda la enzima
DISCUSIN
Ensayo enzimtico
Amilasa
Como se puede observar en la figura 1, el blanco
(el tubo de la derecha), no tiene lquido debido a
que el almidn absorbi el agua agregada, por otro
lado, en el tubo de muestra (el tubo a la izquierda)
CONCLUSIN
En las cinco pruebas realizadas se obtuvieron
resultados positivos para la identificacin de la
presencia de las enzimas. Se esperaban los
resultados positivos porque se conoca la fuente de
la muestra y el contenido de sta. Adems, se
puede concluir que la metodologa fue realizada
correctamente. Esto incluye la preparacin de las
soluciones utilizadas. El buffer se hizo de manera
adecuada pues ninguna de las enzimas perdi su
actividad al ser extrada, lo que nos indica que los
clculos que se presentan en el anexo se realizaron
de manera adecuada.
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a la academia de Biotecnologa de la
Universidad Autnoma de Quertaro por brindar
las instalaciones de laboratorio requeridas para
llevar a cabo esta prctica. Agradecemos tambin
al Dr. Aldo Amaro Reyes por el reactivo catecol,
utilizado para la determinacin de la enzima
polifenol oxidasa.
BIBLIOGRAFIA
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identificacin de bacterias de importancia
WKH2PO4=(136.086g/mol)
=0.8342g
(0.1L)
(0.0613M)
=(174.17g/mol)
(0.1L)
(0.0357M)
ANEXOS
[Base]=0.2-0.0667=0.1332M
Clculos
Peso molecular
Amilasa
Catalasa
pka = 7.2
Ureasa
[cido] = 0.0334 M
[Base]=0.0666 M