Manual de Prácticas para Análisis Clínicos

DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN MEDIA SUPERIOR
MANUAL DE PRCTICAS ANLISIS CLNICOS III
Elaborado por: QFB. EMILIA ELIZABETH BOLIO SALAZAR

Aprobado por la Academia Estatal de Anlisis Clnicos III
QFB. ISABEL RUIZ SANCHEZ
QFB. ALBERTO RODRIGUEZ MOYA
QFB. MYRNA FATIMA RAMIREZ GARCIA
QFB. EMILIA ELIZABETH BOLIO SALAZAR
SUPERVISADO POR:
LICDA. LAURA ARACELI JIMNEZ COBIN
LICDA. SILVIA LUZ LPEZ ALCARAZ
FEBRERO DEL 2009
INDICE
Prctica 1
Conocimiento y esterilizacin de los medios de cultivo ..5
Prctica 2
Tcnicas de cultivo..8
Prctica 3
Cultivo farngeo..12
Prctica 4
Tincin de Gram.15
Prctica 5
Identificacin de Staphylococcus aureus.18
Prctica 6
Antiestreptolisinas...22
Prctica 7
Determinacin de Factor Reumatoide.26
Prctica 8
Protena C reactiva 29
Prctica 9
Reacciones febriles.32
Prctica 10.
Coprocultivo.36
Prctica 11.
Identificacin de Enterobacterias a travs de
Pruebas bioqumicas (IMVIC)......39

Prctica 12.
Urocultivo..43
Prctica 13.
Tincin de Ziehl- Neelsen...46
Prctica 14.
Diagnstico de Paludismo..49
Prctica 15
Examen Coproparasitoscpico, tcnica directa..56
Prctica 16.
Examen Coproparasitoscpico, tcnica de concentracin de Faust....63
REGLAMENTO GENERAL DE LABORATORIO

ANTES DE INICIAR SU PRCTICA:
I. La asistencia a la prctica es obligatoria.
II. La tolerancia para entrar al laboratorio ser la que rige el reglamento escolar.
III. Acatar las instrucciones indicadas en el Reglamento General de Laboratorios de los
Planteles del Nivel Medio Superior de la Universidad de Colima.
IV. No dejar abrigos, carpetas u otros objetos sobre las mesas de trabajo. Cuando ms
despejado este el lugar de trabajo mejor se desarrollar el experimento y menos peligro
existir para nosotros y para nuestras cosas.
V. Es obligatorio llevar bata para evitar manchas y quemaduras. Tambin es aconsejable
traer un trapo de algodn para poder agarrar los recipientes calientes o limpiarlos y
secarlos.
VI. Se deben seguir a todo momento las indicaciones del profesor. No se comenzara a
trabajar hasta haber recibido las instrucciones necesarias. Consultar las dudas y
dificultades.
VII. Es imprescindible leer por lo menos una vez la prctica antes de comenzar.
VIII. Comprobar que esta todo el material necesario y en las condiciones adecuadas de
conservacin y limpieza. Comunicar cualquier anomala al profesor. Cada grupo ser
responsable de material asignado.
IX. Por seguridad est terminantemente prohibido fumar dentro del laboratorio, as como
ingerir alimentos y bebidas.
DURANTE EL TRABAJO:
I. No debe probarse ninguna sustancia y debe evitarse el contacto con la piel. En caso de que
algn producto corrosivo caiga en la piel, se eliminar con abundante agua fra.
II. Extremar los cuidados al trabajar con sustancias inflamables, txicas o corrosivas.
III. Comunicar cualquier accidente, quemadura o corte, a tu profesor de laboratorio.
IV. La manipulacin de productos slidos se har con ayuda de una esptula o cucharilla y para
transvasar lquidos se utilizara una varilla de vidrio en los casos que sean necesarios.
V. Nunca viertas el cido sulfrico concentrado al agua, debes hacerlo de manera inversa pero
con cuidado.
VI. Tener cuidado al manejar cidos y bases principalmente concentrados.
VII. Para oler algn producto no debe acercarse la cara al recipiente, si no que se arrastrar el
vaso hacia la nariz pasando la mano por encima de l.
VIII. Con el fin de evitar contaminaciones, nunca se devolver al frasco los restos de productos
no utilizados.
IX. El material de vidrio es muy frgil, por lo que se evitara los golpes y cambios bruscos de
temperatura. Se deber anotar en una hoja o cuaderno el material que se rompa y
comunicarlo al profesor de laboratorio.
X. Cualquier experimento en el que se desprenda gas txico o inflamables en el que se utilicen

reactivos potencialmente nocivos deber llevarse a cabo en las campanas extractoras del
laboratorio.
XI. Los restos slidos no metlicos deben tirarse en cestos de basura, nunca en las fregaderas.
Los residuos metlicos se almacenarn en un recipiente especial. Los residuos acuosos se
vertern en los fregaderos grandes, con abundante agua antes, durante y despus del
vertido. En cuanto a los lquidos y disolventes orgnicos, se echaran en un recipiente de
plstico, para su posterior eliminacin.
AL TERMINAR:
I. El lugar y el material de trabajo debe quedar limpio y ordenado, tambin se deben apagar y
desenchufar los aparatos.
II. Lavarse las manos perfectamente para evitar intoxicaciones con algunos reactivos.
III. Entregar para su revisin el reporte de la prctica elaborada.
IV. Hasta que el profesor no de su autorizacin no se considerara finalizada la prctica y por lo
tanto, no podrs salir de laboratorio. Recomendaciones generales.
Universidad de Colima
Laboratorio de Anlisis clnicos III
Prctica no.1
NOMBRE DE LA PRCTICA: Conocimiento y esterilizacin de los medios de
cultivo.
COMPETENCIA: Conoce el uso y aplicacin de algunos medios de cultivo tiles
para el cultivo de microorganismos, as como la tcnica para su esterilizacin.
MATERIAL:
Diversos medios de cultivo.
Esptulas
Vidrio de reloj
Cinta testigo
Agua destilada
Mechero fisher
Aro metlico
Guantes con asbesto
Matraces erlenmeyer de 500 ml.

Balanza granataria o analtica
Algodn
Papel aluminio o de estraza
Olla de presin para esterilizar
Tripie o soporte universal
Tela de alambre con asbesto
INTRODUCCIN
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones nutritivas necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. La diversidad metablica de los microorganismos es
enorme; por ello, la variedad de medios de cultivo es tambin grande, no
existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. En la
actualidad, la mayora de los medios de cultivo se encuentran comercializados,
normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso rehidratar. En general, la
preparacin de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad
deseada del mismo y redisolverla en agua destilada siguiendo las instrucciones
del fabricante para posteriormente esterilizarlos. Antes de su esterilizacin, los
medios de cultivo ya hidratados se distribuyen en los recipientes adecuados (tubos
o matraces; segn se trate de caldos o agares).
Existen diferentes medios de cultivo.
De acuerdo a su consistencia tenemos:
1.- Medios lquidos: habitualmente nombrados caldos, y que estn contenidos en
tubos de cultivo.
2.- Medios slidos o generalmente llamados agares; precisamente por contener
este componente que se utiliza como agente gelificante (alrededor del 5%), para
dar la solidez a ese tipo de medios de cultivo. Generalmente contenidos en cajas
de petri.
3.- Medios semislidos: que contienen tambin agar (alrededor del 1%), y este
les da una consistencia como natilla. Generalmente contenidos en tubos de
cultivo.
De acuerdo a su utilidad tenemos:

1.- Medios generales: permiten el desarrollo de una gran variedad de
microorganismos.
2.- Medios de enriquecimiento: favorecen el crecimiento de un determinado tipo
de microorganismo, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto.
3.- Medios selectivos: permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos
determinado, inhibiendo el desarrollo de los dems.
4.- Medios diferenciales: son aquellos en los que se ponen de relieve
propiedades que un determinado tipo de microorganismos posee.
DESARROLLO
1.- Proporcionarle a los alumnos diversos medios de cultivo para que primero
anoten los siguientes datos:
Nombre del medio de cultivo, tipo de medio de cultivo de acuerdo a su
consistencia y utilidad, para qu tipo de microorganismos se utiliza o qu pruebas
se pueden realizar en el etc.
2.- Posteriormente que procedan a preparar algunos de los medios de cultivo que
necesitaran para las siguientes prcticas de laboratorio:
a.- Pesar la cantidad necesaria del medio de cultivo y disolverlo en el volumen
adecuado de agua destilada, en un matraz erlenmeyer (en el frasco del medio de
cultivo viene la relacin de polvo a pesar segn la cantidad de medio que se
quiera preparar).
b.- Calentar cuidadosamente el medio de cultivo hasta su disolucin completa,
tener cuidado de agitar constantemente para evitar que se forme demasiadas
burbujas que provoquen derrames y puedan producir quemaduras.
c.- Si el medio de cultivo es un caldo, se distribuye en tubos de cultivo con tapn
de rosca (baquelita) o tubos de ensaye grandes a los que les fabriques tapones de
algodn (deben quedar bien fijos) para estilizarlos luego.
Una vez esterilizados y fros se guardan a temperatura ambiente en un lugar
fresco y seco o en el refrigerador; segn sea lo adecuado al medio preparado.
d.- Si el medio de cultivo es un agar, se puede dejar en el matraz erlenmeyer, se
le fabrica un tapn con algodn bien apretado en la boca del matraz y se cubre
con un pedazo de papel aluminio o de papel de estraza. (Tu maestro te indicar la
manera de hacerlo) y est listo para ser esterilizado. Si requieren medios para
tcnicas de tubo inclinado o para picadura, el agar se distribuye en tubos. Se
esterilizan con calor hmedo (15lb de presin/121C/15-20 minutos).
e.- Una vez esterilizados y no muy calientes, los medios de agar se vacan (en
condiciones estriles) a cajas de petri estriles y una vez que solidifiquen y enfren
se guardan en refrigeracin (en posicin invertida de preferencia) para su posterior
uso. Si el agar es para tubo inclinado se coloca en esa posicin hasta que
solidifique y una vez fros se almacenan en un lugar fresco y seco o en el
refrigerador.
NOTAS:
+ No olvides rotular los medios de cultivo con su nombre o siglas para poder
identificarlos y de preferencia tambin la fecha de elaboracin.
+ Colocar un tira pequea de cinta testigo a los tubos y matraces de los medios,
antes de meter a esterilizar.
CUESTIONARIO
1.- Por qu se deben almacenar los medios de cultivo en posicin invertida?
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2.- Para qu sirve la cinta testigo?
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3.- Por qu se tapan los tubos y matraces que contienen los medios para
esterilizar?
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4.- Cmo creas rea estril para vaciar los medios de cultivo ya esterilizados a
las cajas de petri? Y por qu es necesario?
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Conclusiones.
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Nombre del alumno:___________________________________6to sem.gpo.____

Fecha de realizacin:__________________________________
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Vo.Bo. del maestro
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Laboratorio de Anlisis Clnicos III
Prctica no.2
NOMBRE DE LA PRCTICA:
Tcnicas de cultivo.
COMPETENCIA: Realiza algunas de las tcnicas de cultivo utilizadas en el

laboratorio de bacteriologa: estras, picadura y agitacin.
MATERIAL:
Cultivos bacterianos en agares y caldos (pueden ser cultivos mixtos o de alguna
especie bacteriana en particular, que hayan aislado previamente).
Medios de cultivo estriles (en placa, tubo inclinado, caldo y tubo vertical).
Asa bacteriana y aguja de inoculacin.
Mechero Fisher.
INTRODUCCIN
La utilizacin de cultivos es fundamental para determinar las caractersticas
fsicas, qumicas y bioqumicas de los microorganismos; en este caso,
principalmente de las bacterias. Para ellos contamos con un gran nmero y tipo de
ellos, as como diversas tcnicas de cultivo que nos facilitan el trabajo. El mdico,
con base en un examen cuidadoso del paciente, puede sospechar que hay una
enfermedad infecciosa. Entonces se recolectan muestras de los tejidos o de los
lquidos infectados para anlisis microbiolgico entre otros estudios.
Hay un gran inters en la importancia de identificar con precisin el patgeno, para
el tratamiento apropiado de la enfermedad infecciosa. Generalmente los
laboratorios clnicos son capaces de aislar, identificar y determinar la sensibilidad
a antibiticos de la mayor parte de las bacterias patgenas encontradas
rutinariamente dentro de las 48 horas de haber tomado la muestra.
DESARROLLO
1.- Prende el mechero fisher para crear un rea estril y as evitar que te
contamines o se contaminen los medios de cultivo. Coloca las placas en posicin
invertida sobre la mesa de trabajo para que se facilite manipularlas mejor.
TECNICA POR ESTRAS EN PLACA
2.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri que
contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero espera que se enfre el
asa y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera.
3.- Ahora, toma una placa con agar estril (donde vayas a sembrar) y con cuidado
de no romper el agar, inocula la muestra en un extremo de la placa y con el asa en
posicin ligeramente horizontal realiza las estras (muy juntas), oscilando el asa de
siembra sobre la superficie de una porcin pequea del agar; mediante un
balanceo sucesivo y rpido de la mueca.
4.- Esteriliza el asa de nuevo y djala enfriar. Rozar una vez con el asa de siembra
las estras sembradas la primera vez y realiza sobre una porcin virgen del agar
una segunda tanda de estras que no toque la primera.
5.- Repetir exactamente la operacin descrita en el punto anterior, pero rozando al
empezar la segunda tanda de estras, hasta completar 3 o 4.
No hagas ms presin sobre el agar que la debida al propio peso del asa y su
mango. Es importante emplear un asa de siembra en buen estado, pues una rota
o deteriorada rasgar el agar.
6.- Lleva a la incubadora y deja en posicin invertida 24 horas al trmino de las
cuales se puede observar ya el desarrollo de colonias aisladas.
SEMBRADO POR ESTRAS EN TUBO INCLINADO
1.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri
que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero espera que se
enfre el asa y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera.
2.- Ahora toma el tubo de agar en pico de flauta (agar inclinado) y cerca del
mechero retira el tapn de algodn ayudndote con los dedos meique y anular y
flamea la boca del tubo.
3.- Introduce el asa con la muestra (cuidando de no tocar las paredes del tubo) y
empezando en el rea del fondo del agar realiza una estra hacia fuera hasta
terminar en la punta del agar. Retira el asa.
4.- Flamea la boca del tubo de nuevo y coloca el tapn de algodn bien firme.
Esteriliza el asa y djala enfriar.
5.- Lleva a incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas despus de la
siembra.
SEMBRADO POR AGITACIN EN CALDO
1.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri
que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero espera que se
enfre el asa y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera.
2.- Ahora toma el tubo con el caldo estril y cerca del mechero retira el tapn de
algodn ayudndote con los dedos meique y anular, flamea la boca del tubo.
3.- Introduce el asa con la muestra (cuidando de no tocar las paredes del tubo) y
por agitacin dentro del caldo, siembra el inculo. Retira el asa y flamea de nuevo
la boca del tubo y coloca el tapn de algodn firmemente. Esteriliza el asa y djala
enfriar.
4.- Lleva a incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas despus de la
siembra.
SEMBRADO EN PICADURA EN TUBO VERTICAL
1.- Esteriliza el filamento de la aguja de inoculacin y toma la parte de la caja de
petri que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero espera que
se enfre la aguja de inoculacin y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a
su tapadera.
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2.- Ahora toma el tubo con el medio de cultivo y cerca del mechero retira el tapn
de algodn ayudndote con los dedos meique y anular, flamea la boca del tubo.
3.- Introduce la aguja con el inculo y sin tocar las paredes del tubo, inocula en el
centro del medio de cultivo sin llegar hasta el fondo del tubo. Retira la aguja de
inoculacin en la misma direccin de la siembra. Retira el asa y flamea de nuevo
la boca del tubo y coloca el tapn de algodn firmemente. Esteriliza el asa y djala
enfriar.
4.- Lleva a incubar y observa las caractersticas del desarrollo a las 24 o 48 horas
despus de la siembra.
CUESTIONARIO
1.- Menciona en qu casos se utilizan cada una de las tcnicas que desarrollaste e
indica las ventajas y desventajas de cada uno de los cultivos.
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2.- Cules son las medidas de seguridad que debes manejar durante el proceso
de ste tipo de tcnicas?
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Conclusiones:
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Vo.Bo. del maestro
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Prctica no.3
NOMBRE DE LA PRCTICA: Cultivo farngeo
COMPETENCIA: Identifica algunas especies que conforman la flora patgena que
se pueden desarrollar en la regin farngea.
MATERIAL:
Placa de agar sangre
Placas de agar salado manitol
Asa bacteriolgica
Abate lenguas estriles
Placa de agar eosina azul de metileno

Hisopos estriles
Mechero fisher
INTRODUCCIN
Los cultivos de garganta se obtienen principalmente para detectar estreptococos
beta-hemolticos del grupo A.
Clnicamente puede sospecharse una faringitis estreptoccica si se observa una
mucosa difusamente enrojecida en un paciente que experimenta dolor y dificultad
para deglutir. La flora comensal est compuesta por una variedad de bacterias
facultativas y ciertas levaduras. Normalmente, en la orofaringe se hallan
combinaciones y concentraciones variables de estreptococos alfa-hemolticos,
especies de Neisserias (no N. gonorrhoeae), estafilococos coagulasa negativos,
ciertas enterobacterias etc.
DESARROLLO
1.- Prende el mechero fisher para crear un rea estril y as evitar que se
contaminen los medios de cultivo. Coloca las placas de agares estriles en
posicin invertida sobre la mesa de trabajo para que se te facilite manipularlas.
2.- Es muy importante el mtodo apropiado para obtener
garganta:
una muestra de la
3.- Con una luz brillante desde por encima del hombro de la persona que obtiene
la muestra debe enfocarse en la cavidad oral abierta para guiar el hisopo hacia la
parte posterior de la faringe. Se instruye al paciente para que respire
profundamente y se deprime la lengua con suavidad con un abate lenguas.
4.- Luego se extiende el hisopo entre los pilares amigdalinos y detrs de la vula.
Debe tenerse la precaucin de no tocar las paredes laterales de la cavidad oral.
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5.- Hacer que el paciente diga ah sirve para levantar la vula y ayudar a reducir
el reflejo de arcadas (asco). El hisopo debe moverse hacia atrs y hacia delante a
travs de la parte posterior de la faringe para obtener una muestra adecuada.
6.- Tomar un segundo hisopo siguiendo las mismas instrucciones y toma la parte
de la caja de petri que contiene el medio de cultivo.
7.- Inocula en un extremo de cada uno de los medios de cultivo (AS, EMB y ASM)
con los hisopos impregnados con la muestra farngea (recuerda hacer todo el
proceso cercas de la llama del mechero) y coloca los hisopos en un medio de
transporte como caldo estreptocel o Stuart, y resrvalo.
8.- Esteriliza el filamento del asa de siembra en la llama del mechero y djala
enfriar. Con el asa en posicin ligeramente horizontal realiza las estras (muy
juntas), oscilando el asa de siembra sobre la superficie de una porcin pequea
del agar; mediante un balanceo sucesivo y rpido de la mueca.
9.- Esteriliza el asa de nuevo y djala enfriar. Rozar una vez con el asa de siembra
las estras sembradas la primera vez y realiza sobre una porcin virgen del agar
una segunda tanda de estras que no toque la primera.
10.- Repetir exactamente la operacin descrita en el punto anterior, pero rozando
al empezar la segunda tanda de estras, hasta completar 3 o 4.
No hagas ms presin sobre el agar que la debida al propio peso del asa y su
mango. Es importante emplear un asa de siembra en buen estado, pues una rota
o deteriorada rasgar el agar.
11.- Lleva a la incubadora y deja en posicin invertida 24 horas al trmino de las
cuales se puede observar ya el desarrollo de colonias aisladas. Con ayuda de tu
profesor trata de identificar las colonias bacterianas desarrolladas en cada uno de
los medios de cultivo.
CUESTIONARIO
1.- Por qu es tan importante la deteccin de estreptococos beta-hemolticos en
cultivos farngeos?
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2.- Escribe los nombres de las bacterias de la flora normal de la garganta, as
como de la flora patgena, indicando en este ltimo caso el tipo de enfermedad o
complicacin para el paciente infectado.
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Conclusiones.
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Vo.Bo. del maestro
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Prctica no.4
NOMBRE DE LA PRCTICA: Tincin de Gram
COMPETENCIA: Realiza la tcnica de tincin de Gram para clasificar las
bacterias.
MATERIAL:
Cultivo bacteriano de 24 horas
Asa bacteriana
Colorante cristal violeta o violeta de genciana
Solucin de yodo-lugol o yodo gram
Alcohol-acetona (1:1)
Colorante de safranina
INTRODUCCIN
Esta coloracin, ideada por Hans Chistian Gram a fines del siglo XIX, permite
dividir a las especies bacterianas en dos grandes grupos: aquellas que toman el
colorante bsico, cristal violeta (gram positivas) y aquellas que son decoloradas
por el alcohol-acetona (gramnegativas). El procedimiento clsico de la coloracin
de Gram incluye la fijacin del material, ya sea por calor en la llama del mechero
o por accin del alcohol. Luego de la fijacin, el primer paso de la coloracin de
Gram es la aplicacin del cristal violeta; a continuacin se agrega como mordiente
la solucin de yodo de Gram que fija qumicamente el colorante alcalino a la pared
bacteriana. La etapa de decoloracin permite distinguir los grmenes Gram
positivos de los Gram negativos.
Es probable que por el mayor contenido en lpidos de las paredes celulares de las
bacterias gram negativas, el alcohol o la acetona aumenten la permeabilidad de la
pared y el colorante sea eliminado. Adems, la presencia de un mayor nmero de
residuos de cido teicoco con uniones cruzadas en las bacterias Gram positivas
es posible que aumente la fijacin del cristal violeta. Los microorganismos gram
positivos que han perdido la integridad de su pared celular debido a un tratamiento
con antibiticos, envejecimiento o accin de enzimas auto lticas tambin permiten
el escape del cristal violeta en la etapa de la decoloracin. A esta altura de la
coloracin, los organismos gram positivos retienen el cristal violeta mientras que
las gram negativas permanecen sin teir. El agregado de un colorante de
contraste como safranina teir a estos microorganismos y clulas (leucocitos y
eritrocitos) de un color rosado o rojo. Las levaduras tambin son gram positivas,
aunque el micelio de los hongos toma la coloracin de Gram en forma variable.
DESARROLLO
1.- Sobre un portaobjetos limpio y seco, se coloca una gota de solucin salina
fisiolgica o una gota de agua.
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2.- Se esteriliza el filamento del asa de siembra a la llama del mechero y se deja
enfriar. Se toma una pequea cantidad de un cultivo bacteriano y se resuspende
en la gota de agua o solucin salina del portaobjetos. Tambin puede ser utilizada
una aguja de inoculacin estril para tomar la muestra bacteriana.
3.- Se deja secar al aire y luego se fija a la llama del mechero, pasndolo de 4 a 5
veces sobre esta; teniendo cuidado de no calentar demasiado pues el portaobjetos
puede romperse (no es vidrio pyrex).
Tener cuidado al fijar el frotis para evitar quemaduras.
4.- Tambin se pueden realizar frotis del material directo de las muestras clnicas
(exudados farngeos, heridas). Se hace rodar el hisopo con que se tom la
muestra sobre el portaobjetos limpio y se fija con calor para proceder a la tincin.
a.- Cubrir el frotis bacteriano con cristal violeta durante 1 minuto. Enjuagar con
agua.
b.- Aplicar el yodo gram y dejarlo reaccionar durante 1 minuto. Escurrir.
c.- Ahora, decolorar con la solucin de alcohol-acetona, agregando gota a gota en
el portaobjetos inclinado sobre el fregador (o tarja), hasta que deje de salir
colorante. Enjuague.
d.- Finalmente cubrir el frotis con la solucin de safranina y dejarla actuar durante
1 minuto. Lavar el exceso de colorante y dejar secar al aire.
e.- Coloca aceite de inmersin al frotis seco y teido para observarlo al
microscopio, con el objetivo de 100X.
f.- Realiza esquemas de lo observado e indica la forma, agrupacin y
caracterstica tintorial de los microorganismos observados.
CUESTIONARIO
1.- Por qu es necesario fijar el frotis antes de teirlo?
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2.- Puede una bacteria Gram positiva teirse de Gram negativa? Por qu?
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3.- Qu otras tcnicas de tincin son utilizadas comnmente en el laboratorio de
bacteriologa? En qu casos se utilizan?
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Conclusiones.
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Vo.Bo. del maestro
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Prctica no. 5
NOMBRE DE LA PRCTICA: Identificacin de Staphylococcus aureus
COMPETENCIA: Aplica las pruebas bioqumicas de la Coagulasa y Catalasa
como medios para la identificacin de S. aureus.
MATERIAL:
Portaobjetos
Aplicadores de madera
Tubos de ensaye de 13x100
Pipetas graduadas
Pipetas pasteur
Bao mara a 37C
Mechero Fisher o Bunsen
Cultivo de S. aureus en placa o en tubo reciente.
SUSTANCIAS:
perxido de hidrgeno al 30%
Agua destilada
Solucin salina estril
plasma de conejo o humano
Asa bacteriolgica
INTRODUCCIN
Catalasa: la catalasa es una enzima que descompone el perxido de hidrgeno
(H2O2) en oxgeno y agua. Qumicamente la catalasa es una hemoprotena de
estructura similar a la de la hemoglobina, excepto que los 4 tomos de hierro de la
molcula estn en estado oxidado (Fe+++) en lugar de reducido (Fe++). Excluyendo
los estreptococos, la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas
poseen actividad de catalasa. La mayora de las bacterias anaerobias
descomponen el H2O2 con peroxidasas semejantes a la catalasa, salvo que cada
molcula contiene un solo in frrico.
El perxido de hidrgeno se forma como uno de los productos finales del
metabolismo oxidativo o aerbico de los hidratos de carbono. Si se deja acumular,
el perxido de hidrgeno es letal para las clulas bacterianas. La catalasa
transforma al perxido de hidrgeno en agua y oxgeno, como lo demuestra la
siguiente reaccin:
H2O2
H2O
O2 (burbujas de gas)
La prueba de la catalasa, llevada a cabo en portaobjetos o en tubos, es muy

comnmente utilizada para diferenciar estreptococos (negativos) de estafilococos
(positivos).
Coagulasa: la coagulasa es una enzima proteca de composicin qumica
desconocida, con actividad semejante a la protrombina, capaz de transformar el
fibringeno en fibrina, provocando la formacin de un coagulo visible en un
sistema analtico adecuado. Se cree que la coagulasa funciona in vivo
produciendo una barrera en el sitio de la infeccin estafiloccica. Esto puede servir
para localizar los organismos in vivo, en abscesos. En el laboratorio, la prueba de
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la coagulasa se utiliza ms comnmente para diferenciar al S. aureus (coagulasa

positivo) de otros estafilococos y micrococos.
La coagulasa se halla en 2 formas, libre y fija, cada una de las cuales posee
diferentes propiedades que requieren el uso de tcnicas separadas:
1.- Coagulasa fija (prueba en portaobjetos): la coagulasa fija, conocida como
factor de aglutinacin, est unida a la pared celular bacteriana y no est
presenten los filtrados de cultivos. Los hilos de fibrina formados entre las clulas
bacterianas suspendidas en plasma (fibringeno) provocan su aglutinacin,
indicada por la presencia de agregados visibles en el portaobjetos. La actividad de
la coagulasa fija no es inhibida por los anticuerpos formados contra la coagulasa
libre.
2.- Coagulasa libre (prueba en tubos): la coagulasa libre es una sustancia
semejante a la trombina, que se haya presente en los filtrados de cultivos. Cuando
una suspensin de bacterias productoras de coagulasa se mezclan en partes
iguales con una pequea cantidad de plasma en un tubo de ensayo, se forma un
coagulo visible como consecuencia de la utilizacin de los factores de la
coagulacin del plasma de manera similar a cuando se aade trombina.
DESARROLLO
a).- CATALASA:
Prueba en portaobjetos:
1.- Con una aguja de puncin o un aplicador de madera con la punta aguzada
transferir clulas del centro de una colonia bien aislada a la superficie de un
portaobjetos.
2.- Aadir 1 o 2 gotas de perxido de hidrgeno al 3% (diluir la solucin al 30%
con agua destilada). Se recomienda no aadir el organismo al reactivo (invirtiendo
el orden), especialmente si se utilizan agujas o asas que contienen hiero, ya que
se pueden producir resultados falsos positivos.
Prueba en tubos o placas de agar:

1.- Diluir 1:10 el perxido de hidrgeno al 30% en agua destilada para obtener una
solucin al 3%
2.- Aadir unas gotas (aproximadamente 1 ml) del perxido de hidrgeno al 3%
directamente sobre la superficie del desarrollo de una placa o pico de agar.
INTERPRETACIN: La rpida aparicin y produccin sostenida de burbujas de
gas o efervescencia indica una reaccin positiva. Dado que algunas bacterias
pueden poseer enzimas distintas de la catalasa, capaces de descomponer el
perxido de hidrgeno, unas pocas burbujas diminutas formadas a los 20 a 30
segundos no se consideran una prueba positiva.
19
Nota: es recomendable que el perxido de hidrgeno se pruebe con organismos

de control positivo y negativo, para garantizar su eficacia.
b).-COAGULASA:
Prueba en portaobjetos (coagulasa fija):
1.- Coloca una gota de agua destilada o solucin salina fisiolgica estril sobre un
portaobjetos.
2.- Emulsionar suavemente una suspensin del organismo en estudio en la gota
de agua utilizando un asa o una varilla.
3.- Coloca una gota del plasma junto a la gota de la suspensin bacteriana.
Mezclarlas bien.
4.- Inclinar el portaobjetos hacia uno y otro lado, observando la formacin
inmediata de un precipitado granular o de grumos blancos.
INTERPRETACIN: Una reaccin positiva se detecta usualmente en 15 a 20
segundos por la aparicin de un precipitado granular o la formacin de grumos
blancos. La prueba se considera negativa si no se observa aglutinacin en 2 o 3
minutos. Esta prueba solo se considera presuntiva y todos los cultivos que den
resultados negativos o positivos tardos deben verificarse mediante la prueba en
tubos debido a que algunas cepas de S. aureus producen coagulasa libre que no
reacciona en la prueba en portaobjetos.
Prueba en tubos (coagulasa libre):
1.- Colocar aspticamente 0.5 ml de plasma de conejo reconstituido en el fondo de
un tubo estril.
2.- Aadir 0.5 ml de un cultivo puro de 18 a 24 horas en caldo del organismo por
investigar (caldo BHI).
3.- Mezclar por rotacin suave del tubo, evitando remover o agitar el contenido.
4.- Colocar el tubo en un bao de agua a 37C. Observar la formacin de un
coagulo visible.
INTERPRETACIN: La reaccin se considera positiva ante cualquier grado de
coagulacin visible dentro del tubo. La reaccin se observa mejor inclinando el
tubo. Si es positiva, el coagulo o gel permanece en el fondo del tubo.
Las bacterias fuertemente coagulasa positivas pueden producir un coagulo en 1 a
4 horas; por lo tanto, se recomienda observar el tubo a intervalos de 30 minutos
durante las primeras 4 horas de la prueba. Algunas cepas de S. aureus pueden
formar fuertes fibrinolisinas que disuelven el coagulo recin formado. Por
consiguiente, pruebas positivas pueden pasar inadvertidas si no se observa el
tubo a intervalos frecuentes. Otras cepas de S. aureus pueden producir slo
suficiente coagulasa como para dar una reaccin positiva tarda luego de 18 a 24
horas de incubacin; por lo tanto, todas las pruebas negativas a las 4 horas,
deben observarse despus de las 18 a 24 horas de incubacin.
20
Nota: la coagubilidad del plasma utilizado puede comprobarse aadiendo 1 gota

de cloruro de calcio al 5% a 0.5 ml de plasma de conejo reconstituido. Se debe
formar un coagulo en 10 o 15 seg.
Cada ampolleta de plasma reconstituida debe ensayarse con organismos de
control positivo (S. aureus coagulasa positiva) y una cepa coagulasa negativo (S.
epidermidis).
CUESTIONARIO
1.- Por qu en la prueba de la catalasa es recomendable manipular la muestra
con un aplicador de madera y no con un asa metlica?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- Por qu en la prueba de la coagulasa no se recomienda utilizar plasma
citratado?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- Indica 3 pruebas ms que nos permitan la identificacin plena de

Staphylococcus aureus
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones:______________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
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__________________________________________________________________
Nombre del alumno:________________________________6to sem. gpo______

Fecha de realizacin:_______________________________
___________________________
Vo.Bo. del maestro
21
Prctica no. 6
NOMBRE DE LA PRCTICA: Antiestreptolisinas
COMPETENCIA: Determina los ttulos de Antiestreptolisinas en el suero de un
paciente, para detectar infecciones por estreptococos -hemolticos del grupo A.
MATERIAL:
Equipo de estreptolisina O de Beli
Termmetro
Centrfuga
Pipetas graduadas de 2, 5 y 10 ml.
Suspensin de glbulos rojos lavados al 5%
Sangre sin anticoagulante del paciente
Bao mara a 37C

Sol. Amortiguadora de pH (6.5-6.7)
Pipetas pasteur
Solucin salina fisiolgica
Gradilla
INTRODUCCIN
Es importante que el estreptococo - hemoltico del grupo A sea identificado
correctamente en el laboratorio porque es necesario implementar un rpido
tratamiento del paciente infectado, no slo para controlar la infeccin primaria
(faringitis aguda, Hypoderma, escarlatina, erisipela o celulitis), sino tambin para
prevenir las complicaciones potenciales serias, como fiebre reumtica,
endocarditis y valvulitas reumtica y glomerulonefritis aguda o crnica.
Entre las pruebas para su deteccin tenemos el cultivo en agar sangre con la
manifestacin de la -hemlisis, sensibilidad a la bacitracina, determinacin
serolgica de Antiestreptolisinas, entre otras muchas.
El estreptococo pyogenes (grupo A) produce diversas sustancias y toxinas
extracelulares. Las dos hemolisinas, estreptolisina O y estreptolisina S, lbil y
estable frente al oxgeno respectivamente, pueden lisar eritrocitos humanos y de
otras especies as como las membranas celulares de los PMNS, plaquetas y otras
clulas. La estreptolisina O es antignica; es decir, estimula al paciente infectado
la produccin de anticuerpos, las Antiestreptolisinas, que determinadas en el
laboratorio pueden ser de utilidad para diagnosticar infecciones por este
microorganismo.
DESARROLLO
1.- Extraer una muestra de sangre del paciente, recolectndola en un tubo seco
(sin anticoagulante) y una vez bien coagulada la sangre, centrifugar para separar
el suero. Es importante que evites que se hemolice la muestra.
2.- Obtener una muestra de sangre con anticoagulante (EDTA) y preparar la
suspensin de glbulos rojos lavados al 5% en sol. Amortiguadora.
La sangre humana y la del conejo son igualmente satisfactorias. Una cantidad
apropiada de sangre (desfibrinada o con anticoagulante) se centrifuga a 2000 rpm
durante 5 min., el sobrenadante es descartado y el paquete de glbulos se lava
agregando solucin salina al 0.85 %, centrifugndose nuevamente.
22
Este procedimiento es repetido 3 veces, debiendo ser claro el sobrenadante en el

ltimo lavado. Lo contrario indicara que los glbulos rojos estn frgiles y no
deben ser usados. Los glbulos rojos se suspenden en solucin amortiguadora a
una concentracin final de 5 %.
3.- La estreptolisina O BELI se presenta en forma oxidada que es estable, pero
no es activa
MODO DE ACTIVARLA:
a) Se reconstituye con agua destilada con el volumen indicado en la etiqueta
del frasco.
b) Para cada 5 ml. De estreptolisina se adiciona el hidrosulfito de sodio
contenido en uno de los tubos capilares que se adjuntan.
c) Se agita por inversin hasta que se disuelva, encontrndose ahora en su
forma activa. Una vez aadida el hidrosulfito de sodio la estreptolisina debe ser
empleada se inmediato, ya que al reoxidarse esta se inactiva. La estreptolisina
reconstituida mientras no sea reducida puede conservarse en congelacin sin que
su potencia se altere por periodos hasta de un mes.
4.- Las diluciones del suero problema y la suspensin de glbulos rojos deben ser
preparadas con solucin amortiguadora de pH 6.5-6.7.
La solucin amortiguadora puede prepararse disolviendo 7.4 grs. de NaCl, 3.7 grs.
De KH2PO4 y 1.81 grs. De Na2HPO4 en 1000 ml de agua destilada ajustndose el
pH a 6.5-6.7 con solucin de NaOH 0.1 N.
Diluciones del suero: las soluciones siguientes se hacen usando solucin

amortiguadora como diluyente:
1:10
0.5ml de la solucin 1:10
+ 4.5 ml de solucin amortiguadora
1:100
1.0 ml de suero
+ 9 ml de solucin amortiguadora
1:500
2.0 ml de dilucin 1:100
+ 8.0 ml de solucin amortiguadora
1. La prueba se monta de acuerdo con el siguiente protocolo:
DILUCIONES DEL SUERO PROBLEMA
Tubos
Volumen de la
disolucin en ml
Volumen de la
solucin salina
amortiguada en ml
1:10
1
2
0.8
0.2
3
1.
4
0.8
1:100
5
0.6
6
0.4
7
0.3
8
1.0
9
0.8
10
0.6
1:500
11
12
0.4
0.2
13
0
14
0
0.2
0.0
0.2
0.4
0.6
0.7
0.0
0.2
0.4
0.6
1.5
1.0
0.8
0.8
AGITAR LOS TUBOS
23
Volumen de
estreptolisina en ml
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.0
0.5
Volumen de la
suspensin de
glbulos rojos en ml.
0.5
AGITAR E INCUBAR A 37 C DURANTE 15 MINUTOS

0.5
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
AGITAR E INCUBAR A37 C DURANTE 45 MIN TENIENDO

CUIDADO DE AGITAR LOS TUBOS DURANTE ESTE TIEMPO CADA 15
MINUTOS. CENTRIFUGAR LOS TUBOS DURANTE 1 MINUTO A 1500 RPM
Titulo en unidades
Todd
12
50
100 125 166 250 333 500 625 833 1250 2500
INTERPRETACION: el ttulo de Antiestreptolisinas O, se expresa en unidades

Todd. Estas unidades son la recproca de la dilucin ms alta del suero que
neutraliza completamente la estreptolisina O. As, un suero que no representa
hemlisis de los tubos 1 a 4, huellas de hemlisis en el tubo 5 hemlisis completa
en todos los dems, es reportado como 125 unidades Todd.
Patrn de Antiestreptolisinas.- el patrn de Antiestreptolisinas es suero o gama
globulina estandarizada para ser usada como control. Despus de haber sido
diluida 1:5 con solucin amortiguadora, debe ser usado como la dilucin 1: 100 del
suero, en el rango de 100 a 333 en tubos 3 a 7 como se muestra en el cuadro.
Debe ser un punto final equivalente a 166 unidades Todd por ml., o sea, ausencia
de hemlisis en los tubos 3, 4 y 5 y hemlisis en los tubos 6 y 7.
Despus de reconstituido el producto debe ser usado el mismo da.
CUESTIONARIO
1.- Elabora un diagrama de flujo donde indiques el proceso completo (tcnicas y
pruebas) necesario para la identificacin de una infeccin de estreptococo hemolticos desde que el paciente se presenta al laboratorio.
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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- Explica por qu cuando se requiere aislar estreptococo pyogenes -hemoltico
en agar sangre, es necesario ranurar el medio?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
24
3.- Explica en qu consiste la enfermedad de la fiebre reumtica y cules pueden

ser sus complicaciones si no se controla?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones:______________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
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Vo.Bo. del maestro
25
Laboratorio de Anlisis Clnicos
Prctica no. 7
NOMBRE DE LA PRCTICA: Determinacin de Factor Reumatoide
COMPETENCIA: Realiza la determinacin del Factor Reumatoide, como una
prueba ms para la deteccin de infecciones reumticas, como la artritis
reumatoide.
MATERIAL:
Un equipo de Reumaclin de sanofi o similar que contiene los siguientes reactivos:
REACTIVOS:
1
Reactivo de ltex sensibilizado (almacenar a Temp. De +2 a +8
C)
2
Frascos con 60 ml de solucin amortiguadora
1
Frasco con suero control positivo
1
Frasco con reactivo control negativo
Laminillas con 3 reas marcadas, con fondo negro para realizar la prueba.
Jeringa, torundas con alcohol y torniquete
Tubo rojo o con gel para la toma de sangre.
Rotor
Reloj o cronmetro
INTRODUCCIN
FACTOR REUMATOIDE
Definicin: Inmunoglobulina presente en el suero del 50-95 por ciento de los
adultos que tienen artritis reumatoide y que sirve para diagnosticar e investigar la
enfermedad.
El factor reumatoide (FR) es una prueba que mide la presencia y nivel de la IgM
especfica contra las inmunoglobulinas IgG anormales, producidas por los
linfocitos de la membrana sinovial, de las articulaciones de personas afectadas por
la artritis reumatoide.
La artritis reumatoide es una enfermedad crnica, que produce la inflamacin de
las articulaciones principalmente de manos y pies.
Cuando se originan estas inmunoglobulinas IgG y se fija la IgM, se forman
inmunocomplejos IgG-IgM que activan el complemento y otros factores
inflamatorios que producen secundariamente la destruccin de las articulaciones
afectadas. Por ello se le llama una enfermedad autoinmune, ya que es el sistema
inmunitario del individuo el que destruye tejidos del propio cuerpo.
Varias pruebas para ponerlos en evidencia se basan en provocar la reaccin
antigeno-anticuerpo, de modo que el suero del enfermo aglutine partculas
26
hemates, ltex, bentonita, etc. A las que se ha fijado una capa de globulina
gamma
No es un anlisis especfico de esta enfermedad, aparece positivo en el 80% de
los pacientes con artritis reumatoide, pero puede aparecer negativo. Inclusive
puede aparecer positivo en otras enfermedades no relacionadas (Lupus
Eritematoso Sistmico, Leucemia, Sndrome Nefrtico etc.) En personas de la
tercera edad pueden aparecer niveles elevados sin repercusin clnica.
DESARROLLO
METODO CUALITATIVO EN PLACA
1. Dejar que los reactivos y muestras alcancen la temperatura ambiente.
2. Preparar una dilucin 1:20 del suero problema; diluyendo 0.1 ml del suero
con 1.9 ml de solucin amortiguadora.
3. Poner 1 gota (aproximada mente 0.05 ml) del suero diluido en las reas
marcadas en la laminilla
4. Colocar una gota del suero control (+) y (-) en las reas marcadas del la
laminilla.
5. Mezclar el reactivo de ltex Reumaclin hasta obtener una suspensin
homognea y aadir 1 gota de reactivo de ltex a cada uno de los sueros
controles.
6. Mezclar con aplicadores diferentes por cada rea
7. Mover en un ngulo de 45 la laminilla por 2 minutos
8. Observar inmediatamente la aglutinacin utilizando una fuente de luz
directa, comparar las reacciones del suero y de los controles.
INTERPRETACION
La aglutinacin de las partculas de ltex indica una reaccin positiva (+). Si es
as, realizar la prueba cuantitativa.
La no aglutinacin o una ligera aparicin de granulosidad que no exceda a la
observada en el control (-), indica un resultado (-).
Nota: la sensibilidad del reactivo de ltex es 3UI/ml.
CUESTIONARIO
1. Define qu es el factor reumatoide:
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
27
2. Por qu no es aconsejable trabajar con sueros con alto contenido de lpidos, o

que el plasma tenga fibrina?
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
3. Por qu la artritis reumatoide se considera una enfermedad autoinmune?.

__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
___________________________________________________
CONCLUSIONES:___________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

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Vo.Bo. del maestro
28
Prctica no. 8
NOMBRE DE LA PRCTICA: Protena C reactiva
COMPETENCIA: Determina y cuantifica la protena C reactiva en suero
sanguneo humano que cursa con un proceso inflamatorio o necrtico.
REACTIVOS: Un equipo para PCR que contiene los siguientes reactivos:
un Ltex anti protena C reactiva (conservar entre 2 y 8 C)
un Suero control positivo
Un Suero control negativo
MATERIAL:
Laminillas con 3 reas marcadas, con fondo negro para realizar la prueba.
Jeringa, torundas con alcohol y torniquete
Rotor
Reloj o cronmetro
Centrfuga
Pipeta pasteur
Pipetas graduadas de 5 ml
Pipetas pistn de 100 y 500 micro litros
Perilla de tres vas
INTRODUCCIN
La protena C-reactiva es un tipo especial de protena producida por el hgado que
slo est presente durante episodios de inflamacin aguda. El aspecto ms
importante de la PCR es su interaccin con el sistema del complemento, el cual
es uno de los mecanismos de defensa contra elementos extraos.
A pesar de que ste no es un examen especfico, s advierte de forma general
sobre la presencia de un proceso inflamatorio agudo. El mdico puede utilizar
este examen para evaluar una exacerbacin de artritis reumatoide o de fiebre
reumtica. El examen tambin puede ser til para evaluar la respuesta a la
terapia. La protena C reactiva no se eleva de forma habitual en enfermedades
producidas por virus.
La protena C reactiva se eleva ante un problema infeccioso o inflamatorio antes
que la VSG y comienza a disminuir ante la recuperacin de la enfermedad.
29
Si se trata la enfermedad con aspirina o antiinflamatorios desaparece su

elevacin.
La protena C reactiva aparece elevada en el infarto de miocardio. Tambin puede
ser de ayuda tras una intervencin de ciruga, ya que aparece elevada durante 3
4 das, para luego disminuir, si persiste elevada es que hay alguna infeccin o
complicacin post-quirrgica.
PROCEDIMIENTO
PRUEBA CUALITATIVA
1. Extraiga sangre sin anticoagulante, Centrifuga durante 5 minutos a 2000
rpm y separe el suero.
2. Diluya el suero a probar (1:40) con solucin salina amortiguadora: 2 gotas
(0.1 ml) del suero en 3.9 ml de solucin salina amortiguadora.
3. Coloque una gota de la solucin anterior en una de las divisiones de la
placa de vidrio, en las otras reas coloca una gota de suero control negativo
y suero control positivo.
4. Aada una gota de ltex anti protena C reactiva a cada una de las
muestras.
5. Oscile suavemente la placa durante 2 minutos y observe si se presenta
aglutinacin macroscpica.
INTERPRETACION
Positivo: Aglutinacin visible con formacin de grandes agregados y fondo claro
comparable al control positivo. Si la prueba de suero sale positiva se deber
realizar la prueba cuantitativa.
Negativo: Suspensin uniforme sin aglutinacin visible, comparable al control
negativo. En ocasiones se pueden apreciar finas granulaciones que no exceden a
las observadas con el control negativo, por lo que este fenmeno no deber
interpretarse como aglutinacin.
PRUEBA CUANTITATIVA:
1. Prepare diluciones del suero problema en solucin salina de la siguiente
manera:
Coloque 5 tubos de ensayo en una gradilla, deposite 0.5 ml de solucin
salina en cada uno de los tubos.
Aada0.5 ml del suero diluido1:40 (ver prueba cualitativo) al primer tubo.
mezcle bien y transfiera 0.5 ml de la dilucin anterior al segundo tubo.
Contine efectuando la misma operacin hasta terminar con el tubo No.5.
TUBO
1 1/80
2 1/160
30
3 1/320
4 1/640
5 1/1280
2. Utilizando un capilar o gotero, ponga una gota de cada dilucin en las
divisiones de la placa de vidrio previamente marcadas.
3. Aada una gota de ltex anti protena C reactiva a cada divisin.
4. Mezcle con un aplicador, desde la dilucin ms elevada hasta la ms baja y
extienda por toda el rea del ovalo
5. Oscile suavemente la placa durante 2 minutos y observe si se presenta
aglutinacin macroscpica.
INTERPRETACION
La dilucin ms elevada del suero que muestre aglutinacin visible, se considera
como el titulo de protena C reactiva en el suero plasma.
CUESTIONARIO
1.- Para qu se realiza la determinacin de la protena C reactiva?
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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
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__________________________________________________________________
2.- En qu casos pueden elevarse los niveles de PCR?:
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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- Cules son los niveles normales de PCR?:
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__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
CONCLUSIONES:___________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
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Vo.Bo. del maestro
31
Prctica no. 9
NOMBRE DE LA PRCTICA: Reacciones febriles
COMPETENCIA: Determina y cuantifica a travs de pruebas serolgicas, los
ttulos de anticuerpos contra antgenos bacterianos para evaluar la presencia de
enfermedades como fiebre tifoidea, brucelosis, entre otras; que se caracterizan por
provocar en el paciente un sndrome febril.
REACTIVOS: Un equipo para Reacciones Febriles que contiene los siguientes
antgenos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Tfico O (antgeno somtico)

Tfico H (antgeno flagelar)
Paratfico A (antgeno flagelar)
Paratfico B (antgeno flagelar)
Brucella abortus
Proteus OX-19
Suero control positivo
Suero control negativo
MATERIAL:
Placa de vidrio con excavaciones para serologa.

Aplicadores de madera.
Jeringa, torundas con alcohol y torniquete.
Rotor.
Reloj o cronmetro.
Centrfuga.
Pipeta pasteur.
Pipeta pistn de 40, 20, 10 y 5 micro litros.
INTRODUCCIN
Esta prueba representa un mtodo de laboratorio til para seguir la secuencia
de ciertas infecciones con acceso febril, causadas por bacterias. Son
reacciones de aglutinacin entre los antgenos de Salmonella, Brucella y
Proteus y los anticuerpos contra estos antgenos presentes en el suero del
paciente.
La tcnica comprende:
32
1. - Reaccin de Widal para diagnstico de la fiebre tifoidea, entrica y ondulante.

La reaccin mide el ttulo de anticuerpos (aglutininas) en el suero contra una
suspensin de antgenos conocidos de Salmonella typi, S.paratyphi A y
S.paratyphi B.
2.- Reaccin de Huddleson para la brucelosis (Brucella abortus, B.suis o B.
melitensis).
3.- Reaccin de Weil-Felix para el tifo. Las especies de Rickettsias que causan tifo,
tienen componentes antignicos idnticos a Proteus (cepas OX-19, OX-2 y OXK). En esta prueba se utilizan antgenos de Proteus para diagnstico de tifo.
PROCEDIMIENTO
1. Extraiga sangre sin anticoagulante y una vez que se coagule bien,
centrifugar 5 minutos a 3000 rev/ minuto.
2. Con ayuda de una pipeta pasteur transfiera el suero a un tubo limpio y
procede de la siguiente manera:
EXCAVACIN
1
2
3
4
5
6
7
8
SUERO (ml)
0.08
0.08
0.08
0.08
0.08
0.08
0.02
0.02
ANTIGENO (1 gota )
Tfico O
Tfico H
Paratfico A
Paratfico B
Brucella abortus
Proteus OX-19
Suero control positivo
Suero control negativo
Ttulos
1:20
1:20
1:20
1:20
1:20
1:20
1:20
1:20
3. Mezclar con aplicadores de madera y poner en el rotor por 7 min. Verificar

que prueba te da positiva; es decir cual prueba manifiesta franca
glutinacin. Realiza la observacin al microscopio con objetivo seco dbil
para determinar la aglutinacin.
4. Una vez que establezcas que antgenos dan positivo, solo a estos les
realizaras las pruebas con los siguientes volmenes de suero. Por ejemplo,
si te dieron positivo los antgenos O y H :
SUERO
Tfico O
SUERO (ml)
Tfico H
TITULOS
0.04
1 gota
0.04
1 gota
1:40
0.02
1 gota
0.02
1 gota
1:80
0.01
1 gota
0.01
1 gota
1:160
0.005
1 gota
0.005
1 gota
1:320
5. Mezclar con aplicadores de madera, agitar por 7 minutos en el rotor y

verificar hasta que ttulos manifiesta franca aglutinacin, para que reportes
33
el resultado final de cada prueba. Recuerda verificar la aglutinacin al

microscopio con objetivo seco dbil.
6. La siguiente tabla te ayudara a realizar la interpretacin de los resultados y
los controles precisamente te ayudaran para verificar el equipo y adems,
como se debe ver una prueba positiva (aglutinada) de una negativa (no
aglutinada).
SUERO PROBLEMA
(ml)
0.08
0.04
0.02
0.02
0.005
0.02 de suero control
positivo
0.02 de suero control
negativo
ANTGENO
TTULOS
1 gota
1 gota
1 gota
1 gota
1 gota
1 gota
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:80
1 gota
NO AGLUTINA
CUESTIONARIO
1. Describe brevemente las enfermedades: fiebre tifoidea, paratifoidea,
brucelosis, infeccin por Rickettsias.
____________________________________________________________
____________________________________________________________
____________________________________________________________
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2. Por qu se dice que las reacciones febriles son poco especficas?
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3. Cmo podemos determinar si la infeccin esta activa o es por la presencia
de anticuerpos de memoria?
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4. Qu resultados se espera en las pruebas si un paciente?
a. Padeci anteriormente una infeccin por tifoidea,
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b. Recibi tratamiento con antibiticos
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c. O fue vacunado anteriormente.
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5. Qu otras pruebas se puede realizar en el paciente para verificar estas
enfermedades, y que adems sean pruebas ms especficas?
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CONCLUSIONES:___________________________________________________
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Nombre del alumno:________________________________6to sem. gpo_______

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Vo.Bo. del maestro
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Prctica no. 10
NOMBRE DE LA PRCTICA: Coprocultivo
COMPETENCIA: Identifica Enterobacterias por medio del coprocultivo.
MATERIAL:
Asa bacteriolgica Mechero Fisher
Estufa de incubacin a 37C
Agares estriles de SS, EMB, Mc Conkey,
Caldo tetrationato, agar sulfito bismuto
Agar verde brillante.
Una muestra de heces recolectada en frasco estril
Hisopos estriles
INTRODUCCIN
Las Enterobacterias representan la mayor parte de la flora microbiana del tracto
intestinal del hombre. En ella se incluyen grmenes comensales (Proteus y bacilos
coliformes), as como patgenos del gnero Salmonella y Shigella. El vibrin
colrico puede ser aislado de casos de clera.
Durante las infecciones entricas, cuando se presentan patgenos tales como
Salmonella y Shigella, el bacterilogo debe distinguir entre los habitantes normales
del intestino y los agentes etiolgicos de enfermedad.
Es importante destacar que las bacterias intestinales toman parte en los procesos
digestivos tanto del hombre como de los animales. Ellos ayudan a la sntesis de
vitaminas del complejo B y de la vitamina K.
La materia fecal evacuada debe ser reciente y deben cultivarse lo ms pronto
posible despus de haber sido recolectada. Las muestras debern obtenerse al
inicio del cuadro clnico, antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano.
Las muestras de heces se pueden tomar directamente en un frasco limpio de boca
ancha y con tapa hermtica, de preferencia estril. Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a realizar el aislamiento, no es necesario usar
medio de transporte y hay que sembrar de inmediato.
En estudios de campo o cuando el laboratorio no est cercano, la muestra se toma
con un hisopo, el cual debe quedar bien impregnado de materia fecal. El hisopo se
coloca en un medio de transporte como el Cary-blair.
PROCEDIMIENTO
1. Introducir un hisopo estril en varios puntos de la muestra.
2. Descargar la muestra en un rea pequea de los medios de cultivo: SS, Mc
Conkey y EMB y realizar el estriado.
3. Incubar las cajas a 37C durante 24 o 48 horas
4. Observar las caractersticas morfolgicas de las colonias desarrolladas
indicando si existen cambios en el medio, pigmentos en la colonia etc.
36
5. Tratar de identificar si existe crecimiento de Salmonella o Shigella que se

manifiestan como colonias de color blanco en Mc Conkey e incoloras en
EMB.
6. Al mismo tiempo que las placas, con la muestra fecal se inocula un medio
de enriquecimiento como el caldo tetrationato, colocando el hisopo
impregnado con la muestra en el caldo al cual se le agreg previamente
0.2 ml de yodo por gramo de materia fecal.
7. Incubar este medio de enriquecimiento por 12 o 18 horas a 37C
8. A partir del caldo tetrationato se siembran placas con medios inhibitorios
como el agar verde brillante y el agar sulfito de bismuto, este ltimo si se
est buscando S. typhi. Despus de incubar a 37C durante 24 horas la
placa de verde brillante y 48 horas la de sulfito bismuto, se revisan
cuidadosamente en busca de colonias sospechosas. En el verde brillante
Salmonella crece como colonias rojas y en sulfito de bismuto como colonias
negras.
9. Para mayor seguridad en la identificacin de Enterobacterias es necesario
realizar pruebas bioqumicas a las cepas aisladas en los medios de cultivo.
Las ms comunes son IMVIC
En el siguiente cuadro indica las caractersticas morfolgicas de las diferentes
bacterias en cada uno de los medios de cultivo:
MEDIO DE
CULTIVO
EMB
Escherichia coli
Salmonella
Shigella
Agar SS
Agar sulfito
bismuto
Agar verde
brillante
37
CUESTIONARIO
1.- Cules son las principales bacterias patgenas que pueden ser aisladas por
medio del coprocultivo? Qu enfermedades producen cada una de stas?
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2.- Investiga el protocolo para el aislamiento e identificacin del vibrin cholerae:
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3.- Explica brevemente en qu consisten las pruebas de Indol, Rojo de Metilo,
Voges-Proskauer y Citrato (IMVIC):
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CONCLUSIONES:___________________________________________________
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Vo. Bo. del maestro
38
Prctica no. 11
NOMBRE DE LA PRCTICA: Identifica Enterobacterias a travs de pruebas
bioqumicas (IMVIC)
COMPETENCIA: Realiza la prueba bioqumica del Indol, rojo de metilo, voguesproskauer y citrato para la diferenciacin de Enterobacterias, especialmente de
Escherichia coli.
MATERIAL:
Caldo triptfano (MIO o SIM)
Reactivo de Kovac
Cepa reciente del organismo en estudio.
Caldo RM/VP
Medio de Citrato Simmons
Reactivo de alfa-naftol al 5%
Pipetas pasteur
Reactivo de Ehrlich
Indicador de pH de rojo de metilo
Cloroformo
KOH al 40%
Pipetas graduadas de 5 ml
Incubadora
INTRODUCCIN
El indol, es un bencilpirrol, es uno de los productos de degradacin metablica del
aminocido triptfano. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son
capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano con produccin de indol, cido
pirvico y amonaco. La produccin de indol es una caracterstica importante para
la identificacin de muchas especies de microorganismos, siendo especialmente
til para diferenciar Escherichia coli (positiva) de miembros del grupo KlebsiellaEnterobacter (la mayora negativos).
La prueba de indol est basada en la formacin de un complejo de color rojo
cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo del p-dimetilaminobenzaldehdo.
Este es el principio activo de los reactivos de Kovac y ehrlich. Se debe utilizar un
medio rico en triptfano. En la prctica se emplean medios combinados tales como
sulfuro-indol-movilidad (SIM), movilidad-indol-ornitina (MIO) o indol-nitrato.
La prueba de rojo de metilo es cuantitativa para la produccin de cido y
requiere organismos positivos que produzcan cidos fuertes (lctico, actico,
frmico) a partir de glucosa, por la va de la fermentacin cida mixta. Dado que
son muchas las especies de Enterobacterias que pueden producir cantidades
suficientes de cidos fuertes detectables con el indicador rojo de metilo durante la
fase inicial de la incubacin, slo se consideran rojo de metilo positivos aquellos
organismos que pueden mantener este pH bajo luego de una incubacin
prolongada (48 a 72 horas), contrarrestando el sistema estabilizador de pH del
medio.
39
La reaccin de Voges-proskauer: el cido pirvico, componente fundamental

formado en la degradacin fermentativa de la glucosa, es metabolizado luego a
travs de varias vas, de acuerdo con los sistemas enzimticos que poseen las
diferentes bacterias.
Una de dichas vas lleva a la produccin de acetona (acetilmetilcarbinol), un
subproducto de reaccin neutra. Los organismos tales como los miembros del
grupo Klebsiella-Enterobacter producen acetona como principal subproducto del
metabolismo de la glucosa y forman cantidades menores de cidos mixtos.
En presencia de oxgeno atmosfrico y de hidrxido de potasio al 40%, la acetona
se convierte en diacetil y el alfa-naftol acta como catalizador para revelar un
complejo color rojo.
Citrato: la utilizacin de citrato por una bacteria se detecta en un medio con citrato
mediante la formacin de subproductos alcalinos. El medio incluye citrato de
sodio, un anin como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como nica
fuente de nitrgeno.
Las bacterias que pueden utilizar citrato tambin pueden extraer nitrgeno de la
+
sal de amonio, con produccin de amonaco (NH3 ) alcalinizando el medio por
conversin del amoniaco en hidrxido de amonio (NH4OH). El azul de bromotimol,
amarillo a pH menor a 6 y azul a pH mayor de 7.6 es el indicador.
DESARROLLO
a.- Prueba de Indol
1.- Inocular caldo triptfano (u otro medio con indol) con el organismo en estudio e
incubar a 35-37C.
2.- Al finalizar este perodo, aadir 5 gotas de reactivo por la pared interior del
tubo. Si se emplea reactivo de Ehrlich, este paso debe ser precedido por la adicin
de 1 ml de cloroformo. Esto no es necesario con el reactivo de Kovac.
INTERPRETACIN
El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo (o en
la capa de cloroformo) segundos despus de aadir el reactivo indica la presencia
de indol y una prueba positiva.
NOTA: Es aconsejable probar los reactivos con controles positivos (Escherichia
coli) y negativos (Klebsiella pneumoniae).
b.- Prueba de Rojo de Metilo
1.- Inocular el caldo RM/VP con un cultivo puro del organismo en estudio. Incubar
a 35C durante 48 a 72 horas (no menos de 48 horas). Finalizado este perodo,
aadir directamente al caldo 5 gotas de reactivo de rojo de metilo.
40
INTERPRETACIN: El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del

medio indica que la produccin de cido es suficiente como para bajar el pH a 4.4
y es una prueba positiva. Dado que otros organismos pueden producir cantidades
menores de cido a partir del sustrato, es posible el desarrollo de un color naranja
intermedio entre el amarillo y el rojo. Esto no indica una prueba positiva.
Nota: no olvidar probar medios y reactivos con controles positivos y negativos.
c.- Prueba de Voges-proskauer
1.- Inocular un tubo de caldo RM/VP con un cultivo puro del organismo en estudio.
Incubar durante 24 horas a 35C. Al finalizar este periodo, transferir 1 ml de caldo
a un tubo de ensayo limpio. Aadir 0.6 ml de alfa-naftol al 5% y 0.2 ml de KOH al
40%. Es esencial adicionar los reactivos en ese orden.
Agitar el tubo
cuidadosamente para exponer el medio al oxgeno atmosfrico y dejarlo reposar
durante 10 o 15 minutos.
INTERPRETACIN: Una prueba positiva est indicada por el desarrollo de un
color rojo a los 15 minutos de aadir los reactivos, revelando la presencia de
diacetilo, producto de oxidacin de la acetona. Las pruebas no deben leerse luego
de ms de 1 hora, ya que cultivos de voges-proskauer negativos pueden producir
un color cobrizo, con la consecuente posibilidad de una interpretacin falsa
positiva.
d.- Prueba de Citrato
1.- Tomar una colonia bien aislada de la superficie de un medio de aislamiento
primario e inocularla en una sola estra en el pico de agar citrato de Simmons.
Incubar a 35C durante 24 a 48 horas.
INTERPRETACIN: El desarrollo de un color azul intenso en 24 a 48 horas indica
una prueba positiva y revela que el organismo en estudio ha sido capaz de utilizar
el citrato contenido en el medio, con la formacin de productos alcalinos.
CUESTIONARIO
1. Por qu es importante que las cepas de los organismos en estudio sean
recientes para estas pruebas?
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2.- En la prueba de Indol, por qu utilizas cloroformo cuando usas el reactivo de

Ehrlich?
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3.- Por qu se recomienda la utilizacin de controles para cada una de las

pruebas?
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Conclusiones:______________________________________________________
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Nombre del alumno:______________________________ 6to sem. Gpo._______

Fecha de realizacin:______________________________________
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Vo.Bo. del maestro
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Prctica no.12
NOMBRE DE LA PRCTICA: Urocultivo
COMPETENCIA: Identifica la diferente flora patgena que puede desarrollarse
en el tracto urinario.
MATERIAL:
SUSTANCIAS:
Muestra de orina tomada en frasco estril
Agar EMB
Agar sangre
Agar Mc Conkey
Agar Salado manitol
Agar nutritivo
Asa bacteriolgica
Porta objetos
Cubre objetos
Centrfuga
Microscopio
Incubadora
Mechero Fisher
Cajas de Petri estriles
Pipetas de 1ml estriles
Tubos de ensayo conteniendo 9 ml de agua peptonada, estriles
INTRODUCCIN
Las infecciones urinarias pertenecen al grupo de los procesos infecciosos ms
frecuentes de la patologa mdica. Su importancia radica en el dao que pueden
ocasionar sobre la funcin renal.
Las vas urinarias normalmente son estriles por encima del nivel de la uretra
distal. Los microorganismos que infectan las vas urinarias altas son comensales
localizados en reas vecinas. En esta colonizacin intervienen varios factores
predisponentes que pueden ser de origen local o general. Los primeros incluyen la
contaminacin fecal del meato urinario, el cateterismo, la patologa urinaria
congnita o adquirida y el reflujo vesical. Entre los factores generales estn la
diabetes mellitus, el embarazo y la terapia con frmacos de amplio espectro.
Las bacterias que con mayor frecuencia se aslan de la orina de pacientes
ambulatorios con infeccin urinaria son: Escherichia coli, Staphylococcus
saprophyticcus, Proteus sp, Klebsiella sp, Enterococcus faecalis etc.
Para lograr que el cultivo de orina realmente sea veraz, requiere que las muestras
sean obtenidas en condiciones ptimas.
PROCEDIMIENTO
El Urocultivo incluye:
1) Aislamiento e identificacin de microorganismos
2) Cuenta viable
3) Antibiograma para los grmenes patgenos aislados e identificados
43
1) Aislamiento e identificacin de los microorganismos

a) Mezclar perfectamente el frasco con la muestra de orina y depositar
aproximadamente entre 5 y 10 ml de orina en un tubo.
b) Centrifugarla durante 5 minutos a 3500 r.p.m.
c) Se desecha el sobrenadante dejando solo unas gotas de orina
residual para emulsionar el sedimento.
d) Con la suspensin del sedimento se lleva a cabo el estudio
microscpico directo, tomando una gota del sedimento que se
deposita en un portaobjetos, colocndole un cubreobjetos.
e) Observarlo al microscopio con el objetivo seco fuerte, e identificar lo
observado.
f) Mediante un asa de platino se hacen siembras por aislamiento en
estras del sedimento, obtenido al centrifugar una muestra de la orina
colocada en tubo estril y centrifugada. La siembra se realiza en los
siguientes medios de cultivo. AS, Mc Conkey, ASM y EMB
g) Los medios inoculados se incuban a 37C entre 24 y 48 horas.
h) Observar las caractersticas de cultivo de las colonias desarrolladas
en los diversos medios. Si es necesario, realizar pruebas
bioqumicas para confirmacin de la especie bacteriana.
i) Preparar frotis para realizar una tincin de Gram para el estudio de
morfologa microscpica.
2) Cuenta viable
a) Realizar diluciones de la orina de la siguiente manera:
Colocar 5 tubos estriles conteniendo 9 ml. de agua
peptonada. La cantidad de tubos utilizada depender
de la carga bacteriana observada en el examen
microscpico del sedimento urinario
Tomar 1ml. de la orina problema con una pipeta estril,
y agregarlo al tubo No.1. (dil. 1:10), agitar el tubo y
tomar de este 1ml. para pasarlo al tubo No.2, (dil 1:100)
realizar el mismo paso las veces que sea necesario
rotulando el tubo con la dilucin correspondiente.
Recuerda que el nmero de diluciones depender de la
carga bacteriana.
b) Colocar 1ml de cada dilucin en diferentes cajas de Petri estriles y
rotularlas con la correspondiente dilucin.
c) Vaciar en estas cajas de 15 a 20 ml de Agar nutritivo fundido a Bao
Mara previamente enfriado hasta que alcance una temperatura que
soporte la piel de tu mano (debes evitar que solidifique).
d) Mezclar perfectamente por rotacin suave este agar con la dilucin y
dejar que solidifique. Incubar las cajas a 37C durante 24 a 48 horas
e) Contar el nmero de colonias desarrolladas, para esto seleccionar
para su lectura, la placa que muestre entre 30 a 300 colonias.
44
f) Reportar la cuenta bacteriana de la siguiente manera:

Nmero de colonias contadas X el factor de dilucin de la caja en la que se
observa y cuentan las colonias bacterianas = Unidades Formadoras de Colonias
por ml. (UFC/ml).
CUESTIONARIO
1.- Realiza un diagrama de flujo que indique los pasos a seguir para el Urocultivo:
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2.- Cules son las principales bacterias que pueden presentarse infectando las
vas urinarias? Por qu?
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3.- Explica detalladamente las tcnicas de recoleccin de muestras de orinas para
Urocultivo, tanto en adultos como en lactantes.
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CONCLUSIONES:___________________________________________________
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Vo.Bo. del maestro
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Prctica no.13
NOMBRE DE LA PRCTICA: Tincin de Ziehl- Neelsen
COMPETENCIA: Identifica las Bacterias Alcohol Acido resistentes (BAAR), como
las del Gnero Mycobacterium, utilizando la tincin de Ziehl-Neelsen.
MATERIAL:
Mechero Fisher
Papel de estraza
Portaobjetos nuevos
Muestra de expectoracin
Colorante de carbolfucsina o
Fucsina fenicada
Alcohol cido
Colorante de azul de metileno
Fenol
INTRODUCCIN
La propiedad tintorial que presentan numerosas bacterias de resistir la
decoloracin con cidos fuertes, despus de teirlas con soluciones de fucsina
caliente, permite reunirlas bajo la denominacin general de bacterias
acidorresistentes o alcohol acidorresistentes. Es caracterstica del gnero
Mycobacterium, junto con su tamao y forma caracterstica, constituyen una ayuda
valiosa para la deteccin temprana de infecciones y para el control del tratamiento
de enfermedades micobacterianas. La presencia de bacilos cido-alcohol
resistentes en el esputo, en combinacin con antecedentes de tos, prdida de
peso y una radiografa de trax que muestra un infiltrado pulmonar, todava es
evidencia presuntiva de tuberculosis.
Se ha estimado que cuando se emplean las tcnicas de concentracin estndar,
se necesitan aproximadamente 10,000 bacilos cido-alcohol-resistentes por
mililitro de esputo para ser detectados microscpicamente. Los pacientes con
enfermedad extensa albergan gran nmero de micobacterias con una buena
correlacin entre frotis positivos y cultivos positivos puede ser slo de 25% a 40%.
Los extendidos con esta coloracin tambin son tiles para seguir la respuesta del
paciente al tratamiento. Despus de comenzar con las drogas
antimicobacterianas, los cultivos se tornan negativos antes que los extendidos, lo
que sugiere que los microorganismos no son capaces de replicarse pero pueden
unirse al colorante. Con tratamiento continuado, ms microorganismos son
destruidos y muy pocos permanecen de modo que evaluando el nmero de
microorganismos en el esputo durante el tratamiento se puede tener una medida
objetiva de la respuesta. Si despus de iniciado el tratamiento el nmero de
microorganismos no disminuyera, deber considerarse la posibilidad de
resistencia a la droga, caso en el cual habr que realizar cultivos adicionales y
estudios de susceptibilidad.
46
PROCEDIMIENTO
1.- Colocar papel de estraza sobre la mesa para trabajar. Colocar un frasco con
fenol al 5% para desechar aplicadores usados.
2.- Usar guantes y cubre bocas
3.- Prender el mechero Fisher y tomar el frasco que contiene la muestra. Abrir el
frasco y pasar la boca por la llama del mechero. Es importante trabajar siempre
atrs de la llama del mechero.
4.- Romper la punta de un aplicador de madera y con la punta aguzada tomar
muestra del esputo.
5.- Descargar la muestra sobre un portaobjetos nuevo, realizando un frotis cuyas
dimensiones sean de 20 mm de largo por 10 mm de ancho. Preferentemente en el
centro del portaobjetos.
6.- Desechar el aplicador contaminado en el frasco con fenol al 5%.
Recuerda la importancia de trabajar por atrs del mechero.
7.- Dejar secar el frotis al aire y fijar con la llama del mechero.
Proceder a teir con la tcnica de Ziehl-Neelsen de acuerdo al siguiente protocolo:
a. Cubrir el frotis con fucsina fenicada y calentar 5 minutos a emisin de
vapores con ayuda de hisopos de algodn y gasa con alcohol.
b. Agregar ms colorante si este empieza a secarse. Es importante evitar la
ebullicin
c. En forma inclinada lavar con agua destilada el frotis y decolorar agregando
alcohol cido de 1 a 2 minutos, dependiendo del grueso del frotis.
d. Lavar nuevamente, y quitar el exceso de agua
e. Colorear con azul de metileno por 1 minuto.
f. Volver a lavar y dejar secar a temperatura ambiente.
g. Leer con objetivo de inmersin, en el sentido de las manecillas del reloj 100
campos y contar los BAAR por campo.
h. Los bacilos aparecen como bastoncillos delgados, ligeramente curvos,
teidos de rojo, generalmente con grnulos ms coloreados en su interior,
aislados, en parejas o en grupos, sobre el azul claro de la tincin de
contraste.
REPORTE DE RESULTADOS
No se encontraron bacilos cido-alcohol
resistentes en 100 campos observados
1-9 BAAR
Informar el nmero de bacilos observados
en 100 campos
POSITIVO (+)
Menos de 1 bacilo por campo en promedio,
en 100 campos observados
POSITIVO (++) MS DE 100
De 1 a 10 bacilos por campo en promedio,
en 50 campos observados
POSITIVO (+++)
Ms de 10 bacilos por campo en 20 campos
observados
NEGATIVO
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CUESTIONARIO
1. Qu microorganismos pueden ser detectados por la tcnica de tincin de
Ziehl-Neelsen? Qu enfermedades producen?
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2. Por qu es importante trabajar atrs del mechero durante todo el proceso?
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3. Por qu es poco prctico el aislamiento y cultivo del bacilo de la tuberculosis?
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Conclusiones.
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Prctica no.14
NOMBRE DE LA PRCTICA: Diagnstico de Paludismo
COMPETENCIA: Realiza las tcnicas de gota gruesa y frotis delgado de sangre
para bsqueda e identificacin de parsitos sanguneos, como el Plasmodium, que
causa el paludismo en el hombre.
MATERIAL:
Lancetas estriles
Portaobjetos nuevos
Agua tamponada a pH de 7.2
Portaobjetos nuevos
Piseta
Colorante de Giemsa al 10%

Alcohol metlico
Microscopio
Aceite de inmersin
INTRODUCCIN
El paludismo, tambin conocido como malaria, es la principal enfermedad
parasitaria causante de anemia en el hombre, la ms frecuente dentro de las
enfermedades transmitidas por artrpodos y un constante flagelo del hombre en su
historia. En Mxico, principalmente el agente etiolgico del paludismo es P. vivax y
alrededor del 1% es causada por P. falciparum.
El diagnstico por el laboratorio no es una tarea fcil, ya que las parasitemias que
se alcanzan son pobres, lo que dificulta su hallazgo. Sin embargo, existen
metodologas como la gota gruesa que favorecen su hallazgo. La diferenciacin de
las dos especies ms frecuentes en Mxico se basa en la presencia de
granulaciones, alteraciones al eritrocito parasitado y caractersticas morfolgicas.
ANTECEDENTES HISTRICOS
Malaria, paludismo, fiebres paldicas, fiebres intermitentes, fiebres
veraniegas,
son
nombres
distintos para
una
misma
enfermedad.
El nombre de Malaria fue dado en Italia en 1847 por Torti, porque se crea que era
causada por el aire malo (en italiano, mal aria) o miasmas que se desprendan
de las aguas estancadas y de los terrenos pantanosos; y el de Paludismo o fiebres
paldicas, porque las fiebres predominaban entre los pobladores de las zonas
cercanas a pantanos, cuyo nombre en italiano es palude y en latn palus.
Livio, Galeno, Celso, Varrn, Vitrubio y Columela describieron perfectamente
la enfermedad desde la ms remota antigedad, e Hipcrates se refiere en sus
escritos a las fiebres paldicas (an no se le conocan con este nombre)
clasificndolas en tres grupos: cotidianas, ternarias y cuaternarias, reconociendo la
influencia de las estaciones, las lluvias y las aguas estancadas en la proximidad de
los pueblos. Platn, 184 aos A.C., hace referencia del bazo abultado de los
49
enfermos
de
malaria.
El parsito productor del paludismo fue descubierto con la ayuda del microscopio
por el mdico francs Charles Louis Alphonse Lavern en el hospital militar de
Constantine (Argelia) el da 6 de noviembre de 1880. Al principio crey que se
trataba de un alga a la que llam Oscillaria malariae, sin embargo rectific luego
denominando al parsito hematozoario.
Lavern march a Italia y convenci de su descubrimiento a los malarilogos
Marchiafava y Celli, quienes erigieron el gnero Plasmodium.
En 1897, Welch descubri el Plasmodium falciparum productor de la forma
tropical y en 1922, Stephens encontr el Plasmodium ovale en el frica Oriental. El
ciclo evolutivo se descubri gracias a Sir Ronald Ross (1857-1932) mdico ingls
quien en 1898 demostr el papel del mosquito intermediario (no lo ubic
taxonmicamente) en el ciclo del paludismo en aves (gorriones y alondras),
obteniendo el premio Nbel en 1902 por sus descubrimientos; sin embargo fue el
zologo italiano Gian Batista Grassi quien demostr el papel del mosquito como
transmisor de la malaria en los humanos, sealando que el insecto del gnero
Anopheles es el nico vector del paludismo.
Anopheles
PROCEDIMIENTO
La gota gruesa permite analizar una mayor cantidad de sangre, facilitando la
deteccin de parasitemias bajas y un ahorro de tiempo en el examen, aunque al
romperse los eritrocitos resulta difcil la identificacin de la especie.
1.- Realizacin del frotis y de la gota gruesa. La toma de muestra se realiza
mediante la puncin con una lanceta estril, normalmente en la yema del dedo. Se
recoge una gota de sangre en un portaobjetos y con otro se realiza la extensin en
capa fina.
50
2.- Para la gota gruesa se recogen 3 o 4 gotas sobre un portaobjetos y con la

esquina de otro de unen en movimientos rpidos, extendindose en una capa
gruesa y uniforme; hasta formar una gota gruesa de 1 cm de lado o de dimetro.
La sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente con 3 a 6
movimientos. De preferencia, realizar el homogeneizado de la muestra en una sola
direccin, en forma concntrica (de adentro hacia fuera o viceversa).
3.- Secar la lmina con la gota gruesa en una superficie plana y protegida de polvo,
calor e insectos.
COLORACIN DE LAS MUESTRAS

Antes de proceder a la coloracin de la gota gruesa, fije el frotis
sumergindolo en metanol, por tres segundos y djelo secar, la gota gruesa
no la fijes con metanol. Secas ambas preparaciones procedes a teirlas
PROCEDIMIENTO
a. Coloque las varillas de vidrio sobre un lavatorio o recipiente de tal forma que
facilite la eliminacin de los lquidos que se usarn en la coloracin y coloque las
lminas que debe colorear sobre las varillas, espacindola de tal forma que pueda
manipularlas con seguridad.
b. Vierta colorante de Giemsa al 10% sobre ambas preparaciones (gota gruesa y
frotis delgado), cubrindolas por completo. Haga esto suavemente, a una distancia
corta de la lmina y deje actuar el colorante por 30 minutos. La experiencia le
puede indicar la necesidad de modificar este tiempo de espera.
c. Descarte el exceso de colorante diluido y lave la lmina con agua corriente,
usando una piseta, hasta que el agua no desprenda colorante. Se recomienda
utilizar agua tamponada a pH de 7.2 (tanto en la dilucin del colorante como en los
lavados) para facilitar la observacin de los grnulos de Schuffner, tan importantes
para la diferenciacin de especies
51
d. Acomode las lminas en una gradilla, de modo que queden inclinadas y con la
gota gruesa hacia abajo. Deje secar las lminas en esta posicin.
EXAMEN DE RUTINA DE LA GOTA GRUESA Y DEL FROTIS
El examen de la gota gruesa es recomendable para detectar la presencia de

los parsitos de malaria, mientras que el frotis sirve como herramienta auxiliar para
determinar la especie de Plasmodium en caso de que no sea posible hacerlo en la
gota gruesa.
Examen de la gota gruesa
El examen de rutina de la gota gruesa requiere observar 100 campos

microscpicos ptimos a un aumento final de 1000x, con lente de inmersin.
Una lmina puede declararse como negativa, slo despus de observar 100 campos
microscpicos sin haber encontrado parsitos. Si se encuentran parsitos, deben
examinarse tambin los 100 campos microscpicos; esto asegura detectar la
posibilidad de infeccin mixta (ms de una especie presente en una muestra de
sangre).
En lo posible, debe identificarse la(s) especie(s) a la(s) que pertenecen los parsitos.
RECORRIDO DE LA GOTA GRUESA DURANTE SU

OBSERVACIN AL MICROSCOPIO
Examen del frotis de sangre

Este examen requiere mayor tiempo de observacin en comparacin con la gota
gruesa, debido a que la concentracin de los elementos sanguneos es mucho
menor.
Examinar el mayor nmero de campos microscpicos (300) para determinar si la
muestra de sangre es positiva o negativa para malaria. Si el diagnstico es dudoso
deber examinar de 400 a 500 campos microscpicos
52
RECORRIDO DEL FROTIS DURANTE SU OBSERVACIN AL

MICROSCOPIO
4.- Realiza dibujos de lo observado
FROTIS DE SANGRE PARASITADO CON PLASMODIUM
53
CUESTIONARIO
1.- Adems de el diagnostico del Plasmodium, qu otros parsitos pueden ser
diagnosticados con estas tcnicas? Indica adems del parsito, la enfermedad
que producen.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- Qu ventajas y desventajas tienen las tcnicas de gota gruesa y frotis

delgado para el diagnostico de parsitos hemticos? Explica.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- Por qu se sugiere utilizar agua tamponada con pH 7.2 en vez de agua de la
llave al preparar la dilucin del colorante de Giemsa y lavar las preparaciones al
teirlas?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
4.- Qu otras tinciones pueden ser utilizadas con el mismo fin?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
54

_________________________________
Vo.Bo. del maestro
55
Prctica no.15
NOMBRE DE LA PRCTICA: Examen Coproparasitoscpico, tcnica directa
COMPETENCIA: Realiza un examen Coproparasitoscpico (cps), a una muestra
de heces con el fin de buscar e identificar formas parasitarias.
MATERIAL:
Portaobjetos
Solucin de lugol
Microscopio
Papel de estraza
cubreobjetos
tubos de ensaye de 13x100
sol. Salina fisiolgica
INTRODUCCIN
Un examen Coproparasitoscpico es el estudio de la materia fecal para la
bsqueda
e
identificacin
de
formas
parasitarias.
Los
mtodos
Coproparasitoscpico, se pueden dividir en: cualitativos y cuantitativos; los
primeros se usan para saber que formas parasitarias existen y los segundos en
qu numero se encuentran; estos ltimos se utilizan sobre todo en las helmintiasis
Los mtodos cualitativos pueden ser de dos tipos: los mtodos de concentracin y
el examen directo. El examen directo es el ms antiguo que se conoce por los
datos histricos que se tienen en relacin a los primeros microscopios,
probablemente Antonio Van Leewenhoek en el siglo XVIII, fue de los primeros en
utilizarlo, al encontrar y observar en sus propias heces fecales trofozotos de
Giardia lamblia.
El mtodo tiene entre sus caractersticas, la sencillez y rapidez para llevarlo a
cabo, adems de lo econmico que resulta realizarlo, pues es el que requiere
menos material
Ha sido el mtodo indicado como excelente para la bsqueda de trofozotos. En la
prctica ha demostrado su eficacia cuando se utiliza lugol, para la bsqueda e
identificacin de quistes, huevecillos y larvas. Pero tiene una limitante: la muestra
utilizada es tan pequea, que es poco representativa.
PROCEDIMIENTO
1. En un portaobjetos se colocan, separadamente (en cada extremo), una gota
de solucin salina fisiolgica y otra de lugol.
2. Con uno o dos aplicadores de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de
heces y se mezcla con la solucin salina, haciendo una suspensin
homognea.
56
3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos.

4. Se coloca el cubreobjetos.
5. Se efecta la misma operacin en la gota de lugol.
6. Se observa al microscopio, primero con objetivo seco dbil y despus con el
seco fuerte.
7. La preparacin con solucin salina, sirve para identificar y reportar el
hallazgo de trofozotos. La preparacin con lugol sirve para reportar el
hallazgo de quistes, huevos y larvas.
8. Realiza el dibujo de lo observado.
9. RECUERDA: la materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se
tendrn los cuidados necesarios para su manejo que garanticen la
correspondiente bioseguridad.
57
58
59
60
CUESTIONARIO
1. Explica que son los protozoarios, estadios que presentan y cules son las
especies patgenas ms comunes para el hombre
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
2. Indica la clasificacin de los helmintos, sus caractersticas principales y los
que parasitan con ms frecuencia al hombre
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
3. Por qu se dice que la preparacin con solucin salina fisiolgica sirve
para identificar trofozotos de los parsitos?
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
4. Adems del intestino, donde ms pueden los parsitos infectar al hombre?
Da algunos ejemplos
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
5. A qu se refiere cuando decimos que el inconveniente de esta tcnica es
que es poco representativa? Explica e indica cmo podemos disminuirla
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
61
Conclusiones.
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
___________________
Vo.Bo. del maestro
62
Prctica no.16
NOMBRE DE LA PRCTICA: Examen Coproparasitoscpico, tcnica de
concentracin de Faust
COMPETENCIA: Realiza un examen Coproparasitoscpico (cps), de
concentracin utilizando la tcnica de Faust; con el fin de buscar e identificar
formas parasitarias, en una muestra de heces.
MATERIAL:
Papel de estraza
Portaobjetos
cubreobjetos
Solucin de lugol
tubos de ensaye de 13x100
Microscopio
agua de la llave
Asa bacteriolgica
vaso de precipitados de 100 ml
Gasas
gradilla
Centrifuga
mechero bunsen o Fisher
Embudo
densmetro de 1.100 a 1.200
Sulfato de zinc con densidad 1.18 (aprox. 33%)
INTRODUCCIN
Desde 1938 cuando fue descrito este mtodo, fue bien recibido, es uno de
los ms utilizados en todo el mundo. Es parecido al que describi Lane en 1924,
aunque l utiliz solucin saturada de cloruro de sodio, como este mtodo es poco
eficaz para quistes; se utiliza ms el de Faust que es muy eficaz para estas formas
parasitarias. La tcnica de Faust, hace una buena concentracin de quistes,
huevos y larvas; es la tcnica preferida por la generalidad de los laboratorios. Las
formas parasitarias son encontradas con facilidad pues las preparaciones quedan
con pocos artefactos.
Su limitacin es que es poco eficaz para huevos pesados como los de
Taenia spp; Faciola heptica y de Ascaris lumbricoides.
Este mtodo se utiliza solucin de Zinc, cuya densidad especfica es de 1.180g/ml
(33%), que conforma un medio de densidad ms alta que la de los huevos:
Necator 1.055 g/ml, Tricocfalo 1.150 g/ml, Ascaris frtil 1.110 g/ml y facilita que
los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso especfico que la solucin,
se concentren y floten.
63
La concentracin adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una

solucin acuosa de sulfato Zinc al 33% con una densidad al 1.180 g/ml. El agua
utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los
detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugacin enriquece en delgada
pelcula la superficie del lquido centrifugado con los huevos livianos de algunos
helmintos.
PROCEDIMIENTO
1) Mezclar bien una porcin de materia fecal para preparar una suspensin
homognea con 1 a 2 g de materia fecal en 10 ml de agua destilada.
2) Filtrar la suspensin a travs de una gasa doblada en cuatro, sobre un
tubo de centrfuga, ayudndose con un embudo pequeo.
3)
Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 min.
4) Decantar el lquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la

medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.
5)
Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el lquido sobrenadante est
listo.
6) Decantar nuevamente el lquido sobrenadante reemplazndolo por igual
cantidad de solucin de sulfato de Zinc al 33%. Mezclar bien la solucin con el
sedimento. Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.
7) Tomar 3 a 4 gotas de las partculas que flotan en la superficie del lquido.
Colocarlas en portaobjeto y mezclarla con 1-2 gotas de lugol, colocar cubreobjeto. (Te puedes ayudar con el asa limpia o flameada, para recoge la
muestra de la pelcula superficial, durante 2 o 3 ocasiones sucesivas y se
deposita en el portaobjetos)
8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.
9) Realiza el dibujo de lo observado.
10) Para ayudarte a identificar a los parsitos que puedas encontrar; recurre a
los dibujos de los diversos parsitos mostrados en las grficas de la
practica anterior.
NOTA: Recuerda, la materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se
tendrn los cuidados necesarios para su manejo, que garanticen la
correspondiente bioseguridad.
64
CUESTIONARIO
1.- Por qu es importante cuidar la preparacin del sulfato de zinc y checar su
densidad cada vez que se utilice?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- Esta tcnica de flotacin me permite ver a todos los huevos de helmintos? Y
a los trofozotos de amibas? Por qu?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- En todo examen de heces es importante realizar una evaluacin fsica de la
muestra. Qu fin tiene este?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Nombre del alumno: ___________________________________6to sem.gpo.____

Fecha de realizacin: __________________________________
___________________
Vo.Bo. del maestro
65
Manual de Prcticas de laboratorio de Anlisis Clnicos III, fue aprobado por la

Academia Estatal de Anlisis Clnicos III, con la participacin de los profesores
titulares de la materia: QFB. Isabel Ruiz Snchez, QFB. Emilia Elizabeth Bolio
Salazar, QFB. Myrna Ftima Ramrez Garca y QFB. Alberto Rodrguez Moya.
Supervisado por la Licda. Silvia Luz Lpez Alcaraz y Licda. Laura Araceli Jimnez
Cobin. Vigente a partir de febrero de 2009.
66

Manual de Prácticas para Análisis Clínicos

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DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN MEDIA SUPERIOR

MANUAL DE PRCTICAS ANLISIS CLNICOS III

Elaborado por: QFB. EMILIA ELIZABETH BOLIO SALAZAR

Conocimiento y esterilizacin de los medios de cultivo ..5

Identificacin de Staphylococcus aureus.18

Determinacin de Factor Reumatoide.26

Identificacin de Enterobacterias a travs de

Pruebas bioqumicas (IMVIC)......39

Tincin de Ziehl- Neelsen...46

Examen Coproparasitoscpico, tcnica directa..56

Examen Coproparasitoscpico, tcnica de concentracin de Faust....63

REGLAMENTO GENERAL DE LABORATORIO

X. Cualquier experimento en el que se desprenda gas txico o inflamables en el que se utilicen

Matraces erlenmeyer de 500 ml.

De acuerdo a su utilidad tenemos:

Nombre del alumno:___________________________________6to sem.gpo.____

COMPETENCIA: Realiza algunas de las tcnicas de cultivo utilizadas en el

Nombre del alumno:___________________________________6to sem.gpo.____

Placa de agar eosina azul de metileno

Nombre del alumno:___________________________________6to sem.gpo.____

Nombre del alumno:___________________________________6to sem.gpo.____

La prueba de la catalasa, llevada a cabo en portaobjetos o en tubos, es muy

la coagulasa se utiliza ms comnmente para diferenciar al S. aureus (coagulasa

Prueba en tubos o placas de agar:

Nota: es recomendable que el perxido de hidrgeno se pruebe con organismos

Nota: la coagubilidad del plasma utilizado puede comprobarse aadiendo 1 gota

3.- Indica 3 pruebas ms que nos permitan la identificacin plena de

Nombre del alumno:________________________________6to sem. gpo______

Bao mara a 37C

Este procedimiento es repetido 3 veces, debiendo ser claro el sobrenadante en el

Diluciones del suero: las soluciones siguientes se hacen usando solucin

AGITAR LOS TUBOS

AGITAR E INCUBAR A 37 C DURANTE 15 MINUTOS

AGITAR E INCUBAR A37 C DURANTE 45 MIN TENIENDO

INTERPRETACION: el ttulo de Antiestreptolisinas O, se expresa en unidades

3.- Explica en qu consiste la enfermedad de la fiebre reumtica y cules pueden

Nombre del alumno:________________________________6to sem. gpo______

2. Por qu no es aconsejable trabajar con sueros con alto contenido de lpidos, o

3. Por qu la artritis reumatoide se considera una enfermedad autoinmune?.

Nombre del alumno:________________________________6to sem. gpo______

Si se trata la enfermedad con aspirina o antiinflamatorios desaparece su

Tfico O (antgeno somtico)

Placa de vidrio con excavaciones para serologa.

1. - Reaccin de Widal para diagnstico de la fiebre tifoidea, entrica y ondulante.

3. Mezclar con aplicadores de madera y poner en el rotor por 7 min. Verificar

5. Mezclar con aplicadores de madera, agitar por 7 minutos en el rotor y

el resultado final de cada prueba. Recuerda verificar la aglutinacin al

Nombre del alumno:________________________________6to sem. gpo_______

5. Tratar de identificar si existe crecimiento de Salmonella o Shigella que se

La reaccin de Voges-proskauer: el cido pirvico, componente fundamental

INTERPRETACIN: El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del

2.- En la prueba de Indol, por qu utilizas cloroformo cuando usas el reactivo de

3.- Por qu se recomienda la utilizacin de controles para cada una de las

Nombre del alumno:______________________________ 6to sem. Gpo._______

1) Aislamiento e identificacin de los microorganismos

f) Reportar la cuenta bacteriana de la siguiente manera:

Nombre del alumno:________________________________6to sem. gpo______

Nombre del alumno:___________________________________6to sem.gpo.____

Colorante de Giemsa al 10%

2.- Para la gota gruesa se recogen 3 o 4 gotas sobre un portaobjetos y con la

COLORACIN DE LAS MUESTRAS

El examen de la gota gruesa es recomendable para detectar la presencia de

El examen de rutina de la gota gruesa requiere observar 100 campos

Nombre del alumno:_______________________________6to sem.gpo.

Nombre del alumno:_______________________________6to sem.gpo.

Nombre del alumno:_______________________________6to sem.gpo.

Nombre del alumno:_______________________________6to sem.gpo.

Nombre del alumno:__________________________6to sem. gpo

Nombre del alumno:__________________________6to sem. gpo

Nombre del alumno:__________________________6to sem. gpo

Nombre del alumno:__________________________6to sem. gpo_

Nombre del alumno:________________________ 6to sem. Gpo._

Nombre del alumno:__________________________6to sem. gpo

Nombre del alumno:_______________________________6to sem.gpo.

Nombre del alumno:_______________________________6to sem.gpo.

Nombre del alumno:_______________________________6to sem.gpo.

Nombre del alumno: _______________________________6to sem.gpo.