Inmovilizacin celular

El empleo de clulas enteras inmovilizadas presenta una

serie de ventajas frente a las enzimas aisladas:
Se evita los procesos de aislamiento y purificacin
enzimtica.
Las enzimas de inters se hallan en su ambiente celular
natural con lo que aumenta su estabilidad y consecuentemente
la vida til del sistema permitiendo la reutilizacin del material
cataltico.
El ambiente celular provee a las enzimas de los cofactores,
coenzimas y dems compuestos necesarios para asegurar una
ptima actividad, adems de brindar buenas condiciones de
temperatura y pH.
Los sistemas celulares permiten el desarrollo de reacciones
multienzimticas.

Inmovilizacin celular

Condiciones bsicas que debe reunir un mtodo

Sencillez de preparacin
Baja toxicidad de la matriz y de los elementos de
preparacin
Bajo costo
Alta resistencia mecnica
Baja o nula interferencia en los procesos de
purificacin de productos
Posibilidad de alternar ciclos de crecimiento y ciclos
de produccin y/o biotransformacin

Inmovilizacin celular
Por adsorcin

Adsorcin a
soportes inertes

Por entrampamiento

Inclusin en estructuras
preformadas
Entrampamiento en matrices
polimricas

Inmovilizacin celular

Adsorcin a soportes inertes

Bolillas de vidrio
Virutas de madera, etc
Inclusin en estructuras preformadas
Biorreactores de fibra hueca
Espumas de poliuretano
Membranas de nylon

Inmovilizacin celular: en esferas alginato

Alginato (Acido manurnico 1,4)
OH

O
O

O
O

CaCl2

O
O

O
OH

Ca

Ca

O-

O-

O
O

O
O
O

O
O

O
O-

O-

Ca

Ca

O-

O-

O
O

O
O
O

O
O

O
O

O
O

O
O-

Ca

O-

Ca

Inmovilizacin celular: Metodologa de trabajo

Mezcla de solucin de alginato
Y cultivo celular en medio libre
De agentes complejantes de Ca++

Solucin de Ca++

Algunos ejemplos de metabolitos de inters comercial

producidos en sistemas de clulas vegetales
inmovilizadas

Especie

Matriz

Producto

Comentarios

Catharanthus roseus

Agarosa

Catelamina

Suministro
ajmalicina

Catharanthus roseus

Alginato

Alcaloides
indlicos

Prolonga capacidad
biosinttica

Catharanthus roseus

Alginato

Ajmalicina

Prolonga estabilidad y
capacidad biosinttica
(220 dias con cambio
de medio)

Catharanthus roseus

Xantanos/po Serpentina
liacrilamida

Prolonga estabilidad y
capacidad biosinttica
(180 dias con cambio
de medio)

de

Algunos ejemplos de metabolitos de inters comercial

producidos en sistemas de clulas vegetales
inmovilizadas

Especie

Matriz

Producto

Comentarios

Daucus carota

Alginato

5--hidroxidigitoxigenina

Tcnica: Suministro de
precursor
(digitoxigenina)

Daucus carota

Alginato

fenoles

No hay variaciones con

respecto a cultivos
no inmovilizados

Algunos ejemplos de metabolitos de inters comercial

producidos en sistemas de clulas vegetales
inmovilizadas

Especie

Matriz

Producto

Comentarios

Digitalis lanata

Alginato

-metildigoxina Suministro de precursor:

-metildi-gitoxina

Digitalis lanata

Alginato

digoxina

Suministro de precursor:
digitoxina

Algunos ejemplos de metabolitos de inters comercial

producidos en sistemas de clulas vegetales
inmovilizadas

Especie

Matriz

Producto

Beta vulgaris

Nylon

Capsicum frutescen

Espuma de Capsaicina
poliuretano

Betacianina

Comentarios
Incrementa
acumulacin
Incrementa
rendimiento

Algunos ejemplos de metabolitos de inters comercial

producidos en sistemas de clulas vegetales
inmovilizadas
Solanum

Especie

Matriz

Producto

Comentarios

Morinda citrifolia

Alginato

Antraquinonas Incrementa acumulacin

intracelular

Talictrum minus

Alginato

Berberina

Incrementa liberacin

Solanum surretense

Alginato

Solasodina

Incrementa liberacin

Lithospermun
erithrorhysum

Fibra
hueca

fenoles

Incrementa rendimiento.

El empleo de clulas inmovilizadas ofrece una serie de ventajas

vinculadas al estado fisiolgico y al diseo y modo de operacin del
proceso fermentativo.
El entrampamiento en matrices inertes permite un gran contacto
intercelular y la generacin de gradientes fsicos y qumicos que
conducen a un mayor grado de diferenciacin.
Al estar minimizada la tasa de reproduccin celular la inestabilidad
gnica se disminuye notablemente.
Se alcanzan fases estacionarias prolongadas lo cual es muy importante
cuando la produccin esta asociada a la idiofase o al final de la etapa
exponencial

Estos sistemas permiten desacoplar las fases de crecimiento y

produccin facilitando el empleo de estrategias como la elicitacin
bitica y abitica o la permeabilizacin para incrementar la
produccin
Es posible realizar ciclos alternantes de rejuvenecimiento/crecimiento
para mantener la viabilidad y capacidad biosinttica.
las clulas inmovilizadas permiten operar en sistemas continuos a
altas velocidades de disolucin sin riesgo de lavado de los cultivos
Es posible controlar el tamao de los agregados celulares en caso de
ser importante esa variable para la acumulacin y/o produccin de
metabolitos.

Con la biomasa entrampada es ms sencillo trabajar con procesos en

dos fases, lo ms comn es realizar una de crecimiento previo a la
inmovilizacin y la segunda de produccin inmovilizando cuando el
cultivo ha llegado a su etapa estacionaria.
En cultivos inmovilizados se facilita la remocin de inhibidores
metablicos
se protege a las paredes celulares de las fuerzas de corte

Con inmovilizacin es posible lograr: sistemas de produccin de

metabolitos de una vida til prolongada puesto que se puede
reutilizar la biomasa y realizar una recuperacin continua de los
productos.
Es posible inducir la liberacin al medio extracelular los metabolitos de
inters que naturalmente no son excretados mediante el empleo de
agentes permeantes, especialmente DMSO
El empleo de estos sistemas se encuentra limitado a la produccin de
compuestos secundarios y la realizacin de procesos de
bioconversin dnde los productos de inters se liberen al medio de
cultivo.

Races transformadas

Algunos metabolitos secundarios sintetizados en races

Metabolito

Gnero vegetal

Aplicacin

Atropina

Hyoscyamus

Anticolinrgico

Berberina

Hydratis
canadensis

Antihemorrgico
uterino

Esteres
bornilo

de Valeriana

Sedante

Ginsensidos Panax ginseng

Tnico,
estimulante

Rotenona

Derris elliptica

Insecticida

Vincristina,
vinblastina

Catharantus
roseus

Antileucmico

Quinina,
quinidina

Cinchona

Antimalrico,
antirreumtico

Reserpina

Rauwolfia

Antihipertensivo

Metabolitos acumulados en cultivos de races NO transformadas

Agrobacterium rhizogenes .

Bacteria del suelo gram negativa

causa la enfermedad de las races en cabellera

Agrobacterium tumefaciens

La infeccin de muchas especies in-vitro con el

microorganismo patgeno Agrobacterium rhizogenes
permite obtener clones de races estables y en condiciones
axnicas

Mayoritariamente, los clones preservan la capacidad

biosinttica de las races de las plantas que les dieron
origen

Las races neoplsicas producidas por A. rhizogenes

se caracterizan por :
su alto ndice de crecimiento
y su estabilidad gentica

Estos cultivos producen niveles de metabolitos

secundarios comparables a las plantas intactas

Biologa de la interacin
Agrobacterium-planta

El nico ejemplo conocido de

transferencia natural de AND interreino

Opinas
Auxinas

Genes Rol A, B, C y D
TL

TR

Regin Vir
catabolismo de opinas

Origen de
Replicacin

El T-ADN es el sector del plsmido que se transfiere a las clulas husped

Esta flanqueado por las secuencias bordes de aproximadamente 25 pb esenciales
para la transferencia
En el T-ADN existen dos regiones, la derecha (TR) y la izquierda (TL)
Ambas codifican para funciones rizognicas una vez integradas a la clula
husped
La regin TR especifica la sntesis de agropinas y auxinas
Regin TL porta cuatro loci que contienen los genes rol (A,B,C y D) implicados
en el desarrollo morfolgico de las races mediante la sensibilizacin de las clulas
al efecto auxnico
El gen rol D induce la formacin de tejido de callos mientras que los genes rol A,
B y C regulan el tamao, grado de ramificacin, alteraciones de tropismo y dems
caractersticas de las races en cabellera

Hairy roots are fast growing and plagiotropic

They require no external supply of growth hormones

The plagiotropic characteristic is advantageous as it

increases the aeration in liquid mediumand roots grown in air
have an elevated accumulation of biomass.

Una vez establecidos los cultivos de races transformadas se pueden

desarrollar a partir de pequeos inculos y obtener buenos ndices de
crecimiento.

El principal problema es el cambio de escala a niveles industriales ya

que la agitacin mecnica causa injurias que conducen a la formacin
de callos.

En los medios lquidos se forman

esferas de races con las raicillas
jvenes en crecimiento sobre la
periferia y un corazn de tejido
viejo en el interior

La restriccin nutricional que soporta esta parte interna,

principalmente en lo referido al oxgeno da origen a un
bolsillo de tejido senescente
Debido a las ramificaciones las races forman una matriz que
ofrece resistencia al flujo, siendo el principal problema
nuevamente el suministro de oxgeno.

Produccin de metabolitos en cultivos de races TRANSFORMADAS

Las principales ventajas de utilizar cultivos de races transformadas, en

cabellera o hairy roots para producir metabolitos secundarios en lugar de
cultivos dediferenciados son:

Con estos sistemas no son necesarios medios suplementados con

fitorreguladores para desarrollar biomasa
Las races transformadas crecen rpidamente, son robustas y vigorosas
Sintetizan metabolitos secundarios caractersticos de las races de las plantas
de las cuales provienen
La sntesis de estos metabolitos se realiza a niveles reproducibles puesto que,
a diferencia de los cultivos de clulas indiferenciadas, son genticamente
estables por perodos prolongados de cultivo
El cultivo masivo de races transformadas es sencillo y tiene potencialidad
para desarrollarse en biorreactores, ampliando la posibilidad de aplicacin
industrial de estos procedimientos