Ctedra de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa

Dr. Gustavo E. Giusiano

MICOSIS
Y
DIAGNSTICO MICOLOGICO

Gustavo G. Giusiano

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Dr. Gustavo E. Giusiano

CLASIFICACIN DE LAS MICOSIS

1) Micosis superficiales
A. Dermatofitosis o tias
B. Malasseziosis
C. Tia negra
D. Piedra negra
E. Piedra blanca
2) Micosis subcutneas
A. Cromomicosis
B. Esporotricosis
C. Micetomas
D. Lobomicosis
3) Micosis sistmicas endmicas
A. Blastomicosis
B. Coccidioidomicosis
C. Histoplasmosis
D. Paracoccidioidomicosis

a) Micosis oportunistas
A. Aspergilosis
B. Candidiasis
C. Criptococosis
D. Feohifomicosis
E. Hialohifomicosis
F. Zigomicosis
G. Pneumocistosis
MICOSIS SUPERFICIALES
A.

Dermatofitosis o tias:

Las tinas son producidas por hongos denominados dermatofitos.

Estos hongos son queratinoflicos por lo que atacan exclusivamente piel, pelos y uas.
Agentes etiolgicos: Gneros Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton.

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Especies ms frecuentes en nuestro pas:

Microsporum: M. canis, M. gypseum
Trichophyton: T. rubrum, T. mentagrophytes, T. tonsurans
Epidermophyton: E. floccosum.
Microsporum: ataca ms frecuentemente pelos y piel
Trichophyton: ataca pelos, piel y uas
Epidermophyton: ataca ms frecuentemente piel y uas
Estudio micolgico:
Se solicita como examen micolgico directo y cultivo indicando la o las lesiones que
tuviera el paciente.
Recomendaciones previas al paciente:
Suspender toda medicacin sistmica con antifngicos, una semana previa.
Suspender toda medicacin tpica, cremas, pomadas, lociones, polvos de aplicacin
local, 3 das previos a la toma de muestra.
Lavar la zona afectada con agua y jabn.

Toma de muestra:

Material para el diagnstico: Muestras de escamas de piel, pelos y uas

Lesiones de piel lisa, pequeos y grandes pliegues: Se realiza por raspado cuidadoso de la
lesin, en especial de los bordes, con bistur estril de poco filo. Se recogern escamas en
una placa de Petri estril o entre dos portaobjetos estriles.
En caso de infeccin de pelos se extraern pelos enfermos con pinza de depilar y raspado
de la lesin.
En el caso de infeccin en uas (onicomicosis) depende del tipo de afeccin, puede
rasparse la cara profunda de la zona afectada (entre la lmina de la ua y el lecho
subungual) o bien, la tabla ungueal.
Si las muestras tomadas no pueden ser procesadas de inmediato, o deben ser derivadas a
un laboratorio alejado, se tomar la precaucin de cerrar perfectamente las cajas de Petri o
portaobjetos que contienen las muestras y remitirlas cuidadosamente embaladas e
identificadas. Se conservan perfectamente a temperatura ambiente durante muchos meses
por lo que el envo no ofrece mayores inconvenientes.

Procesamiento de las muestras

Examen microscpico directo

Colocar una parte del material extrado en un portaobjetos, agregar una gota de KOH 20%40% y cubrir con cubreobjetos. Calentar suavemente el preparado sobre la llama de un
mechero. Dejar enfriar y observar al microscopio con ptica seca 10X y 40X. Tambin se
puede dejar actuar el KOH durante 1 hora sin calentar y despus observar.
Observacin microscpica
En piel y uas se deben observar hifas hialinas tabicadas, ramificadas o no, de 6 a 10 de
dimetro.
En ocasiones pueden observarse artroconidios, que son clulas rectangulares de paredes
gruesas, formadas por fragmentacin de las estructuras tubulares de los hongos.
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En los pelos parasitados se debe observar la disposicin de artroconidias. Esta puede ser:
a)

Endotrix, cuando las artroconidias se disponen ordenadamente dentro del pelo.

Caracterstico de gnero Trichophyton. Los pelos microides con artroconidias
pequeos y los megasporados con artroconidias de mayor tamao.

b)

Ectotrix, las artroconidias se disponen desordenadamente

Caracterstico de gnero Microsporum (Pelo microsprico).

c)

Pelo fvico: se observan hifas y burbujas de aire (Trichophyton schoenleinii).

fuera

del

pelo.

Cultivo
Medios de cultivo para hongos: Sabouraud, Agar papa dextrosa, Lactrimel, fraccionado en
tubos en pico de flauta con el agregado de antibiticos, por ejemplo cloranfenicol.
Se siembra una suficiente cantidad de escamas de piel, pelos o raspado de uas, haciendo
toques sobre la superficie del medio de cultivo. Incubar un tubo a 25-28C y otro a 35-37C
durante 10 a 15 das con observaciones peridicas.
Observacin macroscpica de las colonias desarrolladas
La descripcin del color, textura, aspecto y velocidad de crecimiento de la colonia permitir
la introduccin a una clave taxonmica para la identificacin morfolgica del hongo.
Se observan el color del anverso y del reverso y la eventual difusin de pigmento al medio
de cultivo.
La textura puede ser: granulosa, algodonosa, pulverulenta, aterciopelada, cremosa, etc.
Aspecto: lisa, rugosa o cerebriforme.
La velocidad de crecimiento se refiere al tamao de la colonia en un tiempo determinado.
Observacin microscpica de las colonias desarrolladas
Lquido de montaje: Azul de lactofenol (cotton blue+ cido lctico+fenol)
Con ansa estril en forma de gancho separar una porcin de la colonia tomando la parte
area del crecimiento. Colocar sobre un portaobjetos y agregar una gota de azul de
lactofenol. Disgregar el material con la ayuda de dos agujas estriles. Cubrir con un
cubreobjetos y calentar ligeramente. Dejar enfriar y observar al microscopio con 40X.
Microsporum canis:
Desarrolla entre los 7 a 10 das a 25-28C.
Colonia ligeramente aterciopelada, micelio
areo algodonoso blanco, desarrolla
pigmento amarillo intenso difusible al
medio.
Microscopa: micelio hialino, tabicado,
ramificado. Macroconidias fusiformes, muy
abundantes, de 40 a 150 de largo y 8 a
20 de ancho, pared doble, gruesa,
equinulada. Presenta de 7 a 15 tabiques.
Microconidias unicelulares escasas.

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Microsporum gypseum:
Desarrolla entre los 7 a 10 das a 25-28C.
Colonia pulverulenta color canela.
Microscopa:
micelio
hialino,
tabicado,
ramificado. Macroconidias muy abundantes,
naviculares de 30 a 50 de largo, pared
delgada
finamente
rugosa,
extremos
redondeados. Presenta de 7 a 15 tabiques.
Microconidias clavadas y cciles, escasas.

Trichophyton mentagrophytes:
Hay dos variedades:
Trichophyton mentagrophytes variedad interdigitale desarrolla como una colonia blancas
vellosa o algodonosa y Trichophyton mentagrophytes var. mentagrophytes como una
colonia color blanco tiza, yesosa o
pulverulenta.
Crece entre los 10 y 15 das a 25-28C.
Microscopa: micelio hialino, tabicado,
ramificado.
Microconidias
abundantes,
esfricas de 2 a 3 de diam., pared fina y
lisa, dispuestas a los lados y extremo de las
hifas. Macroconidias de 20 a 50 de largo,
paredes finas y lisas, abundantes o no
segn las cepas. Se observan hifas en
espiral, hifas en raqueta y cuerpos
nodulares.
En la variedad algodonosa la fructificacin es reducida mientras que en la yesosa las
microconidias y las hifas en espiral son ms abundantes.

Trichophyton rubrum:
Colonia blanca aterciopelada que difunde
pigmento rojo vinceo al medio.
Crece entre los 10 y 15 das a 25-28C.
Microscopa: micelio hialino, tabicado,
ramificado. Microconidias muy abundantes,
en forma de lgrimas dispuestas a los lados
de las hifas, miden de 3 a 5 de largo y 2 a
3 en su dimetro mayor. Macroconidias
largas, paredes finas, escasas.
Trichophyton tonsurans:
Micelio hialino tabicado, ramificado.
Microconidias abundantes, en forma de mazo, de fsforo o irregulares, que nacen a los
lados o en el extremo de hifas, pueden encontrarse otras conidias de mayor tamao en
forma de baln, artroconidias, hifas en raqueta y clamidoconidias. Macroconidios escasos y
de extremos ms romos que en T. rubrum.

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Epidermphyton floccusum:
Colonia marrn amarillenta, aterciopelada, de
crecimiento lento y reverso incoloro a marrn.
No difunde pigmento al medio.
Microscopa:
abundantes
macroconidias
claviformes, de paredes lisas y en forma de
"dedos", con 1 a 4 clulas. No forma
microconidias.

B. Malasseziosis
Pitiriasis versicolor
Agente etiolgico: hongos levaduriformes del gnero Malassezia.
La pitiriasis versicolor es una infeccin superficial crnica, leve y generalmente asintomtica.
Se caracteriza por mculas hipo o hiperpigmentadas en el estrato crneo, con una
descamacin fina. La coloracin de estas manchas puede variar entre blanquecina, rosada o
color caf (de all el nombre de versicolor). Es una enfermedad cosmopolita, si bien se
presenta con ms frecuencia en zonas tropicales.
Las zonas del cuerpo ms comnmente afectadas son tronco, cara, cuello y brazos.
La pitiriasis versicolor es diagnosticada mediante el examen micolgico directo, el cultivo no
se hace de rutina.
La tipificacin slo se practica para estudios epidemiolgicos y se realiza mediante estudios
de sus caractersticas morfolgicas y pruebas bioqumicas, o bien, por tcnicas de biologa
molecular.
Diagnstico
Se solicita como examen micolgico directo y cultivo indicando la o las lesiones que
tuviera el paciente.

Toma de muestra: Consideraciones generales

Recomendaciones previas al paciente para la toma de muestra:

Suspender toda medicacin sistmica con antifngicos, una semana previa.
Suspender toda medicacin tpica, cremas, pomadas, lociones, polvos de aplicacin
local, 3 das previos a la toma de muestra.
Lavar la zona afectada con agua y jabn.
La toma de muestra de lesiones descamativas sospechosas de pitiriasis versicolor se
realiza por raspado de las lesiones de piel, con bistur estril, recolectando entre 2
portaobjetos o en placa de Petri.
Para la recoleccin de muestras tambin se puede utilizar un trozo de cinta adhesiva
transparente. Se aplica la cara engomada sobre la lesin, se retira la cinta con la impronta y
se coloca sobre un portaobjetos.

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Examen microscpico directo

Los exmenes directos se realizan con hidrxido de potasio o de sodio al 20-40% con el
agregado de tinta Parker azul negro permanente.
El hidrxido tiene por objeto aclarar la capa cornea de la piel y la tinta la coloracin del
hongo.
Otra tcnica de observacin utiliza azul de metileno al 1% con buenos rendimientos.
Se colocan las escamas con una gota del hidrxido o el azul de metileno entre portaobjetos
y cubreobjetos, se calienta suavemente, se deja durante 10 a 20 minutos y se observa con
objetivo de 40x.
En el caso de la muestra tomada con cinta engomada la observacin se realiza agregando,
por capilaridad, azul de metileno al 1% entre la cinta y el portaobjeto
Se observan hifas cortas de bordes romos, tabicados, de 2 a 3 m de dimetro y elementos
levaduriformes de 3 a 8 m, con brotacin de base ancha, dispuestos en cmulos. Ambas
morfologas pueden coexistir o no.
Figura 1

Figura 2

INFORME:
Se observan elementos levaduriformes y micelios compatibles con Malassezia spp.
(Figura 1)
Se observan abundantes elementos levaduriformes compatibles con Malassezia spp.
(Figura 2)
Otras formas clnicas en que puede encontrase Malassezia:
Foliculitis, Dermatitis seborreica, Dermatitis atpica y a veces se encuentra asociada a otras
afecciones de zonas seborreicas.

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MICOSIS PROFUNDAS O SISTMICAS

PARACOCCIDIOIDOMICOSIS
Agente etiolgico: Paracoccidioides brasiliensis.
El Paracoccidioides brasiliensis es un hongo dimrfico dependiente de la temperatura, cuyo
hbitat natural es el suelo y la vegetacin.
En su fase saproftica ambiental se presenta como hifas septadas con escasos
microconidios y en la fase parasitaria se observa como levadura multigemante.
La paracoccidioidomicosis es endmica en Amrica latina desde el trpico de Cncer hasta
el paralelo 32 de latitud sur. En nuestro pas es endmica en Chaco, Corrientes, Misiones,
Formosa, norte de Santa F y Entre Ros, noreste de Santiago del Estero, Salta y Jujuy.
Las formas clnicas se clasifican en:
1)
Paracoccidioidomicosis infeccin: a) sintomtica especfica, b) asintomtica.
2)
Paracoccidioidomicosis enfermedad: a) aguda tipo juvenil b) crnica tipo adulto,
unifocal o multifocal.
3)
Latencia post-teraputica.
Existen diferentes formas clnicas y las localizaciones ms frecuentes son: pulmn, ganglios,
mucosas, tejido cutneo, glndulas suprarrenales, hueso y cerebro, por lo tanto, los
materiales posibles de estudio para el diagnstico pueden ser: esputo, lavado bronquial,
biopsias, raspado de lesiones cutneas y mucosas, etc.
Diagnstico
Se solicita como examen micolgico directo y cultivo de la o las lesiones que tuviera el
paciente o de las muestras a estudiar.
Examen microscpico directo
Fresco
Se realiza un montaje del material con Azul de
lactofenol. En el caso de biopsias se debe
realizar un tratamiento previo con mortero para
obtener preparaciones finas. Para los esputos
puede hacerse con hidrxido de potasio 2040% para clarificar mejor la preparacin.
Observar al microscopio con ptica seca 10X y
40X. Se observan levaduras de pared gruesa y
refringente de 10 a 40 que pueden presentar
1,2 o ms brotes, generalmente se observan multibrotantes.
Coloraciones
Con otra porcin de la muestra se realizan extendidos y se colorean
con Giemsa, tambin Gram y Ziehl Neelsen, para observar no solo
elementos de hongos, sino tambin para descartar otros posibles
agentes de infeccin.
La coloracin de Grocott en preparaciones histolgicas permite la
coloracin selectiva de los elementos de hongos que aparecen negros.

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INFORME: (tanto para el examen en fresco como para las coloraciones)

Se observan elementos levaduriformes multibrotantes compatibles P. brasiliensis.
Cultivo
En medio de Sabouraud, Agar infusin cerebro-corazn y medios especiales, siempre con el
agregado de antibiticos. Se incuban un mnimo de 6 tubos repartidos 3 a 25-28 y 3 a 3537. Las lecturas se realizan hasta las 6 semanas.
A 25-28C desarrolla colonias con delicado micelio blanco (fase saproftica).
Microscpicamente se observan constituidas por hifas hialinas tabicadas con aleuroconidias
y clamidoconidias.

A 35-37C desarrollan colonias cerebriformes, color

gamuza, compuesta por elementos levaduriformes
brotantes (fase parasitaria).
Diagnstico inmunolgico: Las tcnicas ms
utilizadas en la rutina de laboratorio son
Inmunodifusin
en
gel
de
agar
y
Contrainmunoelectroforesis
con
antgenos
especficos para detectar la presencia de
anticuerpos.
Inoculacin en cobayos, se realiza en forma intratesticular. En 1 mes el animal desarrolla
una orquitis.
HISTOPLASMOSIS
Agente etiolgico: Histoplasma capsulatum var capsulatum.
Histoplasma capsulatum es un hongo dimrfico dependiente de la temperatura que se
desarrolla en el suelo y est asociado a deyecciones de aves y murcilagos.
La histoplasmosis se considera una enfermedad del sistema fagoctico mononuclear. Las
formas clnicas y la severidad dependen de las condiciones inmunolgicas del hospedador y
de la cantidad de conidios inhalados. Predomina en las zonas templadas hmedas de Africa
y Amrica.
Los rganos ms frecuentemente afectados en las formas diseminadas a partir del
pulmn son: hgado, bazo, ganglios linfticos, mdula sea, piel y mucosas. Por lo tanto los

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materiales de estudio para el diagnstico pueden ser: Esputo, lavado bronquial, sangre,
aspirado de mdula sea, biopsias, raspado de lesiones cutneas y mucosas, etc.
Diagnstico
Se solicita como examen micolgico directo y cultivo de la o las lesiones que tuviera el
paciente o de las muestras a estudiar.
Examen microscpico directo
Fresco:
Se realiza un montaje del material con Azul de lactofenol o con hidrxido de potasio al 2040%. Observar al microscopio con ptica seca 10X y 40X. En el caso de biopsias se debe
realizar un tratamiento previo con mortero para obtener preparaciones finas.
En este paso del examen micolgico generalmente es muy difcil ver el agente
etiolgico ya que este organismo en estado parasitario es una levadura de tamao muy
reducido, mide 1-5 y es intracelular.
Coloraciones
Con otra porcin de la muestra se realizan extendidos y se colorean con Giemsa, Gram,
Ziehl Neelsen, para observar no solo elementos de hongos, sino tambin para descartar
otros posibles agentes de infeccin. La coloracin de Grocott en preparaciones histolgicas
permite la coloracin selectiva de los elementos de hongos que aparecen negros.
El Giemsa es la coloracin de eleccin
para el diagnstico de la histoplasmosis,
donde
se
observan
levaduras
intracelulares de 1 a 5 dentro de los
macrfagos, con el ncleo teido en un
tono violeta oscuro y la cromatina
desplazada hacia uno de los polos de la
clula levaduriforme. El citoplasma de azul
tenue, casi incoloro, no toma la coloracin
de Giemsa y da la apariencia de una
cpsula. Cuando los macrfagos se
rompen los histoplasmas pueden verse
extracelulares.
INFORME:
Se observan elementos levaduriformes compatibles con Histoplasma capsulatum.
Cultivo
En medio de Sabouraud, Agar infusin
cerebro-corazn y medios especiales,
siempre con el agregado de antibiticos.
Se incuban un mnimo de 6 tubos
repartidos 3 a 25-28 y 3 a 35-37,
durante 6 a 12 semanas.
A 25 - 28C alrededor de la segunda
semana desarrollan colonias blancas
vellosas, limitadas (fase saprofitita) la
cual es caractersticas de esta especie y

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permite la identificacin del hongo.

En el examen microscpico se observa micelio delgado, tabicado, hialino con
macroconidias tuberculadas de 8 a 15 de dimetro.
A los lados de las hifas nacen microconidias (aleuroconidias) piriformes, de aprox. 2 de
diam., lisas o finamente rugosas.
A 35 37C desarrolla una colonia cremosa compuesta por elementos levaduriformes
iguales a los de la fase parasitaria.
Diagnstico inmunolgico: Las tcnicas ms utilizadas en la rutina de laboratorio son
Inmunodifusin en gel de agar y Contrainmunoelectroforesis con antgenos especficos para
detectar la presencia de anticuerpos.
Inoculacin en ratn, se realiza en forma intraperitoneal. Al mes se sacrifican los animales
y se realiza cultivo de bazo, hgado y pulmn.
COCCIDIOIDOMICOSIS
Agente etiolgico: Coccidioides posadasii (en Sudamrica)
Coccidioides sp. es un hongo dimrfico que en su fase saproftica vive en el suelo de zonas
ridas. Es endmica de extensas zonas secas de Amrica. En nuestro pas en la pampa
occidental seca, donde la precipitacin anual no es mayor a 600 mm3.
La localizacin ms frecuente es pulmonar, menngea, cutnea y generalizada. Los
materiales para el diagnstico, por lo tanto, pueden ser: esputo, lavado bronquial, biopsias,
raspado de lesiones cutneas y mucosas, etc. Segn el rgano afectado.
Diagnstico
Se solicita como examen micolgico directo y cultivo de la o las lesiones que tuviera el
paciente o de las muestras a estudiar.
Examen microscpico directo
Se realiza un montaje del material con Azul
de lactofenol o con hidrxido de potasio al 2040%. Observar al microscopio con ptica
seca 10X y 40X.
Se observan esfrulas de 20 a 80 de
dimetro con endosporos.
Coloraciones
Con otra porcin de la muestra se realizan
extendidos y se colorean con Giemsa, tambin Gram y Ziehl Neelsen, para observar no solo
elementos de hongos, sino tambin para descartar otros posibles agentes de infeccin. La
coloracin de Grocott en preparaciones histolgicas permite la coloracin selectiva de los
elementos de hongos que aparecen negros.
INFORME:
Se observan esfrulas con endosporos compatibles con Coccidioides sp.

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Cultivo
En medio de Sabouraud, Agar infusin cerebro-corazn y medios especiales, siempre con el
agregado de antibiticos. Se incuban un mnimo de 6 tubos repartidos 3 a 25-28 y 3 a 3537C, hasta 6 semanas.
Desarrolla una colonia blanca con micelio areo que toma color
pardo con el tiempo, en ambas temperaturas, ya que el
dimorfismo de este hongo es dependiente de los nutrientes.
Microscpicamente se observa micelio hialino tabicado
fragmentado en clamido-artroconidias.
Diagnstico inmunolgico: Las tcnicas ms utilizadas en la rutina de laboratorio son
Inmunodifusin en gel de agar y Contrainmunoelectroforesis con antgenos especficos para
detectar la presencia de anticuerpos. Se practican con coccidioidina o esferulina; la primera
es un antgeno micelial estandardizado y la segunda un polisacrido extrado de esfrulas.
Inoculacin en ratn, se realiza en forma intraperitoneal o intravenosa y en cobayos,
intratesticular, para obtener la fase parasitaria.
MICOSIS SUBCUTNEAS
Las micosis subcutneas se adquieren generalmente por va traumtica, que permite la
inoculacin del agente. Por esta razn los brazos y piernas son las localizaciones ms
frecuentes de este tipo de afecciones.
ESPOROTRICOSIS
Agente etiolgico: Sporothrix schenkii
Sporothrix schenkii es un hongo dimrfico que en su fase saproftica se encuentra como
saprofito en el suelo, madera y vegetales, especialmente plantas espinosas.
Esta micosis se distribuye mundialmente, pero su mayor incidencia se observa desde
Mxico hasta Amrica del Sur.
Se observa con presentaciones generalmente en las extremidades y con mayor frecuencia
en jardineros, floristas, amas de casa o nios que juegan en los jardines. En personas
inmunocomprometidas la inhalacin de las conidias de este hongo, puede dar origen a
formas extracutneas de esta micosis.
La esporotricosis puede presentarse con diferentes formas clnicas. La linfangtica es la
forma clnica que aparece con mayor frecuencia. La lesin se inicia despus de 3 a 6
semanas de la inoculacin. Aparece un ndulo subcutneo, liso, mvil y duro.
Estos ndulos luego reblandecen y pueden ulcerarse formando un goma e incluso tender a
la cicatrizacin. Despus de das o semanas pueden aparece nuevos ndulos como
lesiones en escalera siguiendo la va linftica con linfangitis y adenopatas satlites. No hay
diseminacin ni compromiso general del paciente.
La lesin se presenta en forma de gomas que se diseminan siguiendo la va linftica. Para el
diagnstico de la esporotricosis se estudia el material de puncin de los gomas o el exudado
de aquellos que se encuentren ulcerados, o bien, biopsias de los mismos.

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Diagnstico
Se solicita como examen micolgico directo y cultivo de la o las lesiones que tuviera el
paciente o de las muestras a estudiar.
Es importante indicar siempre el diagnstico presuntivo como orientacin el tipo de muestra
a tomar.
Examen microscpico directo
Fresco: Generalmente es difcil ver el agente etiolgico ya que este organismo en estado
parasitario es una levadura muy pequea, en ocasiones se puede observar la presencia
cuerpos en forma de cigarro o los llamados cuerpos asteroides. Se realiza un montaje del
material con Azul de lactofenol o con hidrxido de potasio al 20-40% y se observa al
microscopio con ptica seca a 40X.
Coloraciones: extendidos del material se colorean con Giemsa, Gram, Ziehl Neelsen, para
observar no solo elementos de hongos, sino tambin para descartar otros posibles agentes
de infeccin. En preparaciones histolgicas se emplea PAS y Grocott, esta ltima permite la
coloracin selectiva de los elementos de hongos que aparecen negros.
Cultivo
En medio de Sabouraud con el agregado de antibiticos, a 25-28 y agar Sangre 35-37,
hasta 4 semanas.
A 25-28 desarrolla una colonia que inicialmente (3 a 6 das) tiene aspecto levaduriforme y
color beige. A partir de los 10 a 15 das, toma color pardo que se va oscureciendo hasta
adquirir el color negro. Las colonias se presentan con estriaciones del centro hacia la
periferia y a veces con una elevacin central.
Microscpicamente se presenta como un
micelio muy delgado, con hifas de 1 a 2
micras de dim., con conidiforos que en el
extremo
distal
presentan
dentculos
simpodiales. Cada dentculo soporta un
conidio y la acumulacin de estas
microconidias da el aspecto de flor o
margarita. Los conidios son ovales a
piriformes (2-3 a 6) producidos en bouquet
en el extremo del conidiforo. Los
conidiforos son sutiles de 1 a 2 de base y
0,5 a 1 en la punta, emergen en ngulo
recto a los lados de la hifa.
A 35-37 desarrolla una colonia de tipo levaduriforme.
CROMOMICOSIS
La cromomicosis es una afeccin producida por un extenso grupo de hongos dematiceos
saprofitos de suelo y vegetales. Entre ellos los ms frecuentes son: Fonsecaea pedrosoi,
Fonsecaea compacta, Phialophora verrucosa, Phialophora richardsiae, Cladophialophora
bantiana, Rinocladiella serophilum, Rinocladiella aquaspersa, Wangiella dermatitidis, etc.
Esta afeccin es ms frecuente en climas tropicales y subtropicales de Amrica, con
predominio en Mxico, Amrica central hasta Brasil. Est relacionada a los agricultores y

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jardineros, que trabajan descalzos, con una edad promedio de entre los 30 y 50 aos,
siendo rara en los nios.
Estos agentes penetran por inoculacin traumtica originando una lesin de evolucin
crnica y localizada, en la piel y tejido subcutneo. Las localizaciones ms frecuentes son
pies, piernas, manos y brazos. Tambin se han informado en glteos, pabelln auricular,
pecho y abdomen.
Se caracteriza por su aspecto verrucoso y seco, vegetante con el tiempo. Cuando
evolucionan, despus de meses o aos, puede comprometerse de la epidermis. Las
lesiones pueden ulcerase y cubrirse de material hematopurulento, en algunos casos se
observan zonas de cicatrizacin en el centro de las lesiones. Los sucesivos episodios de
infecciones bacterianas secundarias producen linfangitis y adenopatas satlites que
conducen a la estenosis de los linfticos y la elefantiasis del miembro.
Diagnstico
Se solicita como examen micolgico directo y cultivo de la o las lesiones que tuviera el
paciente o de las muestras a estudiar.
Es importante indicar siempre el diagnstico presuntivo como orientacin el tipo de muestra
a tomar.
Los materiales de estudio pueden ser escamas obtenidas por raspado con bistur estril de
las lesiones o bien, materiales de biopsias de las mismas.
Examen microscpico directo
Fresco: Se realiza un montaje del
material con hidrxido de potasio al 2040%. Observar al microscopio con
ptica seca 10X y 40X la presencia de
los cuerpos de Medlar o cuerpos
esclerticos o cuerpos fumagoides,
que se presentan como elementos
esfricos de 4 a 15 micras,
dematiceos, tabicados y agrupados
generalmente de 2, 4, 6 o ms.
Coloraciones: Extendidos del material se colorean con Giemsa y Gram para observar no
solo elementos de hongos, sino tambin para descartar otros posibles agentes de infeccin.
En preparaciones histolgicas se emplea PAS y Grocott, esta ltima permite la coloracin
selectiva de los elementos de hongos que aparecen negros.
INFORME:
Se observan cuerpos de Medlar o cuerpos esclerticos o cuerpos fumagoides.
Cultivo
En medio de Sabouraud con el agregado de antibiticos, a 25-28 y 35-37, hasta 4
semanas. Segn los diferentes especies se obtendrs colonias de hongos dematiceos con
caractersticas especficas.

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Ctedra de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa

Dr. Gustavo E. Giusiano

MICETOMAS
El micetoma es una infeccin crnica de la piel y tejidos subyacentes con tendencia a
afectar los huesos. La lesin se caracteriza por ser una tumoracin que fistuliza hacia el
exterior drenando a travs de ellas lquido que contiene grnulos.
Los micetomas se clasifican en EUMICETOMAS, aquellos producidos por hongos y los
ACTINOMICETOMAS, cuando los agentes etiolgicos son bacterias filamentosas, los
actinomicetales.
Los agentes productores de micetomas son saprofitos ambientales. La infeccin se produce
por la inoculacin del agente etiolgico, a travs de heridas en la piel originadas por
traumatismos y se presenta con mayor frecuencia en miembros inferiores. Esta micosis est
ms relacionada a personas con actividad agrcola.
Si bien esta enfermedad tiene distribucin mundial, su mayor incidencia se observa en
zonas tropicales y subtropicales.
Diagnstico
Se solicita como examen micolgico directo y cultivo de la o las lesiones que tuviera el
paciente o de las muestras a estudiar.
Es importante indicar siempre el diagnstico presuntivo como orientacin el tipo de muestra
a tomar.
Procesamiento de las muestras para el diagnstico: El diagnstico se realiza a partir de
los granos, que son el material necesario para diagnosticar un micetoma.
Los granos obtenidos por drenaje de la fstula se lavan varias veces por centrifugacin con
solucin isotnica salina. Generalmente el material es obtenido a travs de una biopsia, los
cuales no necesitarn ser lavados para su procesamiento.
Examen microscpico directo
Fresco: Los granos deben fragmentarse por cortes o ayuda de mortero y solucin salina. Se
realiza un montaje del material con Azul de lactofenol y se observa al microscopio con ptica
seca 10X y 40X.
* En el caso de los eumicetomas, estos granos pueden ser blancos o negros, segn el
agente etiolgico sea un hongo hialino o dematiaceo. Estn constituidos por hifas gruesas,
vesiculosas, tabicadas.
* En el caso de los actinomicetomas, estos granos pueden ser amarillentos o rojizos.
Generalmente con forma de rin constituidos por bacterias filamentosas.
La morfologa microscpica de los filamentos (los actinomicetales miden menos de 1 micra y
los hongos de 3 micras o ms) junto con el color de los granos y nos permitir una
diferenciacin primaria entre eumicetoma y actinomicetoma. A partir de esta informacin se
cultivarn en medios diferentes.
Coloraciones: Las coloraciones ms usadas para actinomicetales son Fite y Kinyoun.
Giemsa y Gram para observar, no solo elementos de hongos, sino tambin para descartar
otros posibles agentes de infeccin.

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Cultivos:
En el caso de eumicetomas, estos granos se cultivan en medio de Sabouraud con el
agregado de antibiticos, a 25C, hasta 4 semanas.
En el caso de actinomicetomas se siembran en agar sangre, agar infusin cerebro corazn,
medio de Lowestein-Jensen y Sabouraud con extracto de levadura, a 25C y 37C.
Segn las diferentes agentes se obtendrn colonias con sus caractersticas especficas.
Agentes de micetomas
Los hongos informados como ms frecuentes agentes de eumicetomas son:
* Granos blancos: Pseudoallescheria boydii, Acremonium kiliense, Fusarium
moniliforme, Fusarium solani, etc.
* Granos negros: Madurella mycetomatis, Madurella grisea, Exophiala jeanselmei,
Exophiala wernekii, Pyrenochaeta romeroi, Leptosphaeria senegalensis, etc.

Los actinomicetales informados como ms frecuentes agentes de actinomicetomas son:

Nocardia brasiliensis, N. caviae, N. asterorides, Actinomadura madurae, A. pelletieri y
Streptomyces somaliensis.
Bibliografia:
1.- Alexopoulos, C. J. Introduccin a la Micologa, Tercera edicin. Eudeba. Bs As. 1979.
2.- Arenas, Roberto. Micologa Mdica Ilustrada. Clnica, Laboratorio y Teraputica. Ed.
Interamericana. Mc Graw Hill. 1993.
3.- De Hoog, G. S & Guarro, J. Atlas of Clnical Fungi. CBS Universitat. Rovira i Virgili. 1995.
4.- Zinsser, Joklik, W.K. y otros. Microbiologa. 20a edicin. Ed, Mdica Panamericana,
Buenos Aires. 1994.
8.- Kendrick, B. The fifth Kingdom. Micologue Pub. Waterloo, Ontario. Cnada, 1985.
9.- Koneman Roberts. Micologa Prctica de Laboratorio. Editorial Panamericana. 3ra
Edicin. 1987.
10.- Kwon-Chung, K.J.; Bennett J.E. Medical Micology. Lea & Febiger. Philadelphia. London.
3ra ed. 1991.
11.- Negroni, P; Negroni, R. Micosis Cutneas y Viscerales. Lpez Libreros. Bs As. 1989.
12.- Pumarola. Microbiologa Mdica,
13.- Rippon, J,W. Tratado de Micologa Mdica. Tercera edicin. Interamericana. Mc Graw
Hill. 1990.

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