Urocultivo

Objetivo: que el alumno con los conocimientos ya adquiridos realice un urocultivo

con el medio Mac Conkey, adems de identificar las bacterias desarrolladas en el
medio de cultivo y llevar acabo una tincin para hacer una buena observacin de
las bacterias, pero es mas importante la observacin de su crecimiento en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio que la identificacin
de micro organismos.
Introduccin: El urocultivo permite la identificacin del nmero y los tipos de
bacterias presentes en la orina. Una vez identificado el tipo de microorganismo, el
mdico puede recetar el medicamento adecuado para combatirlo.
Cundo se recomienda?

Cuando los sntomas indican una posible infeccin urinaria como: dolor y
sensacin de calor al orinar, as como urgencia frecuente de orinar.
Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre
sntomas de infeccin.
En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que
pueda causar algn problema al beb.

Para que ests bien y puedan realizarte tus estudios

Se necesita la recoleccin de orina. Debes lavar con agua y con jabn los
genitales para evitar una contaminacin de la muestra.
Por lo general este estudio no requiere que ests en ayunas o limitar o
alterar tus actividades antes del estudio, sin embargo, te sugerimos pedirle
a tu mdico que te d sus indicaciones.
Comntale a tu mdico de todo tipo de medicamentos que ests tomando
en ese momento, para ver si es necesario que los interrumpas antes del
estudio.

Valores normales

Menos 10,000 U.F.C/ml se considera contaminacin

Entre 10,000 y 100,000 U.F.C/ml se considera sospecha de infeccin
Mayor a 100,000 U.F.C/ml se considera infeccin
*U.F.C. Unidades Formadoras de Colonias.

Los resultados varan de laboratorio a laboratorio, por lo que, te sugerimos

siempre realizar tus anlisis en el mismo laboratorio, a menos que tu mdico diga
lo contrario.

Desarrollo:
1.- preparacin de material.
Lo primero que se a de hacer es en volver las cajas de petri que se han de utilizar
en papel de estraza y sellarlos con cinta testigo.
2.-esterilizar.
Se procede a introducir las cajas de petri es un bote de chiles grande y sellarlo con
papel aluminio y cinta testigo, despus introducirlo en la olla de presin con agua
al nivel de tripie, tapar la olla y colocar mecheros de bunsen para que al canse una
presin de 15 libras a 121grados centgrados dejarlo as por 15minutos, cuidar que
no se pase y si se pasa retirar los mecheros para bajar la presin.
3.-preparacion de medios.
En esta practica se preparara el medio Mac Conkey, se vierte los gramos pesados
de este en la solucin poco apoco para evitar que se hagan grumos se deja
reposar 15 minutos, despus se pone a bao mara hasta que hierva, al terminar
se deja enfriar previamente con un tapn de algodn si es que se a de utilizar
despus.
4.-sembrado.
Se procede tomar el medio y verterlo en una o varias cajas de petri dejarlo cuajar,
y se toma una pequea muestra de la orina infectada, con una asa de platino
previamente esterilizada y se procede a sembrar en forma de sig-sag (ejemplo en
dibujo de abajo)

Ya terminado el sembrado se introducen los cultivos ala estufa de

manera que se coloque al revs paraqu las bacterias vayan hacia el
medio, se pone la estufa a una temperatura de 38 grados centgrados.
5.-observcion de colonias.
En este paso se sacan los cultivos de la estufa para observar su
crecimiento y si no hay contaminacin en el cultivo, esto se debe de
hacer cercas de un mechero de bunsen para evitar contaminacin del
cultivo o que el cultivo se contamine.
6.-preparacion de frotis.

primero Con la ayuda de un mechero, flamear un asa

bacteriolgica y esperar que enfre un poco.
Tomar el asa (previamente flameada) y con sta tomar un poco de
muestra.
Una vez obtenida una pequea cantidad de la muestra (con el
asa), hacer que sta tenga contacto con una lmina portaobjetos,
la cual servir para depositar la muestra contenida en el asa.
Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lmina portaobjetos,
proceder a realizar la extensin de la muestra en el portaobjetos
mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la
lmina, de tal forma que al terminar la extensin, tengamos como
producto una espiral en la parte media de la lmina.
Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un
mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no
debe ser directo (slo se pasa por la llama), puesto que el calor
excesivo puede cambiar la morfologa celular de las bacterias a
observar. El calor deseable es aqul en el que el portaobjetos sea
apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la
mano.

Tincin
Con violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad
suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla
por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tincin de 1
minuto est dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 C. Al
transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lmina conteniendo la muestra
con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que
el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, sta
debe caer sobre la parte superior de la lmina que no contiene muestra.

El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un

centmetro de espesor. Tambin el enjuague se debe realizar poniendo la
lmina en posicin inclinada hacia abajo. Una vez enjuagado el
portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1 minuto
ms. El mordiente es cualquier sustancia que forme compuestos
insolubles con colorantes y determine su fijacin a las bacterias Pasado
el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol
al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no
escurra ms lquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del
decolorante. Se van aadiendo cantidades suficientes del decolorante,
hasta lograr que ste salga totalmente transparente, es decir, hasta que
ya no escurra ms lquido azul. Lavar con agua para quitar los residuos
de decolorante y esperar que seque la lmina al aire libre o con la ayuda
de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita. Una vez
que la lmina ya sec, procedemos a teir nuevamente, pero esta vez se
va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina,
dejar actuar durante 1 minuto. Pasado el minuto correspondiente, se
procede a enjuagar la lmina con agua, se escurre el agua sobrante y se
seca en la forma anteriormente descrita. De esta manera, ya tendremos
listo el frotis para su respectiva observacin microscpica.
7.- que se observo.
S observaron cocos, espirilicocos, neumococos, etc. Adems que las
bacterias se cambiara su coloracin segn se a grampositiva o
gramnegativas.
8.-resultados microscpicos.

Conclusiones: de esta prctica se puede decir que es el mejor de los

mtodos para realizar un urocultivo, adems de tener un amplio
espectro clnico