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Espectrometría de Masas
Espectrometría de Masas
de Masas
Q. Georgina Duarte Lisci
Facultad de Qumica
UNAM
INTRODUCCIN
Cronologa de la EM
Investigador (es)
Ao
Contribucin
J.J. Thompson
1912
Dempster
1918
Stephens
1946
Nier-Johnson
1952
Paul, Steinwedel,
Raether, Reinhard y
von Zahn
1953
-58
1955
Analizador cuadrupolar
Gohlke y
McLafferty
Beynon
1956
1956
Cromatografa de Gases/Espectrometra de
Masas
Espectrometra de Masas de alta resolucin
Munson y Field
1966
Ionizacin Qumica
Wiley y McLaren
INTRODUCCIN
Cronologa de la EM
Investigador (es)
Dole, Mack, Hines, M.
Ferguson y Alice
Ao
Contribucin
1968
Ionizacin por
Electro-spray (ESI)
1973
Cromatografa de
Lquidos/Espectrometra
de Masas
McLafferty
1981
Blakely y Vestal
1983
Yamashita, Fenn, Aleksandrov,
Gall, Krasnov, Nikolaev,
Pavlenko, Shkurov, Dokl,
Baram y Garacher
1984
Bombardeo de
tomos rpidos
(FAB)
Ionizacin por
Termo-spray
Aplicacin de la
ionizacin por Electrospray (ESI) en
macromolculas
J. J. Thompson, 1912
Joseph John
Thompson, 1912
Ventajas de la
Espectrometra de Masas
9Capacidad de Identificacin
Identificacin inequvoca de casi cualquier tipo de substancia, desde
tomos hasta molculas complejas de peso molecular elevado
Por qu es importante la
Espectrometra de Masas?
Porque es una tcnica analtica poderosa
utilizada para:
Identificar compuestos qumicos
Cuantificar compuestos qumicos
Proveer informacin vlida en reas como la
qumica, fsica, astronoma, geologa,
biologa, criminalstica, etc.
INTRODUCCIN
EM Diagrama General
Sistema
de entrada
Sistema
de Cmputo
Cmara
de
Ionizacin
Detector
Analizador
Componentes principales de
un Espectrmetro de Masas
9 Sistema
de bombeo
9 Sistema de entrada
9 Fuente de Iones (Cmara de Ionizacin)
9 ptica Inica
9 Analizador Msico
9 Detector
9 Lnea de transferencia (CG-EM)
Sistema de Bombeo
Tipos de Bombas de Vaco
Sistemas de Entrada
Muestras Puras
Entrada directa
Sonda de Introduccin Directa (DIP)
Sonda de Exposicin Directa (DEP)
Mezclas
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Lquidos
Electrocromatografa
Electroforesis Capilar
Extraccin de Fludos Supercrticos
Entrada Directa
Sonda de Insercin Directa (DIP)
La muestra en disolucin se coloca en un tubo capilar de vidrio
Temperatura mxima: 300oC
Diferentes velocidades de Calentamiento
Posibilidad de calentamiento directo de la muestra (sin solubilizar)
Tipos de Ionizacin
9 Ionizacin en Fase Gaseosa:
9 Ionizacin y Desorcin:
9 Bombardeo de Partculas:
9 Ionizacin a Presin
Atmosfrica:
9 Desorcin Lasser
Electroionizacin (EI)
Ionizacin Qumica (CI)
Desorcin de Campo (FD)
Ionizacin de Campo (FI)
Bombardeo de Atomos Rpidos
(FAB)
Espectrometra de In Msico
Secundario (SIMS)
Electroespray (ESI)
Termospray
Ionizacin Qumica a Presin
Atmosfrica (APCI)
Ionizacin por desorcin lasser en
matriz asistida (MALDI)
CMARA DE IONIZACIN
Ionizacin Electrnica
Magneto
Filamento
+- --
+
+++++ + Hacia el Analizador
+ +
Repeledor
Target
Magneto
CMARA DE IONIZACIN
Ionizacin Electrnica
Las molculas de la muestra son ionizadas
por un haz de electrones (70 eV)
Los iones son expulsados de la cmara y
dirigidos al analizador
Se producen iones positivos y negativos:
+
90% M + e
M. + 2 e.
10% M + e
M
Espectro Electromagntico
70 eV
Ionizacin Electrnica
Excitacin electrnica (similar a la teora de UV) en
orden decreciente se ionizan preferentemente
los electrones:
n
n .. >
R-O-R
>
R-O-R
R-CH :: CH-R
R-CH : . CH-R
R-CH 2 : CH 2-R
R-CH 2 . CH 2 -R
Ionizacin Electrnica
70 eV de energa
Produce el Ion Molecular y una gran cantidad de iones
con diferentes estados de energa
Aquellos iones con gran cantidad de energa interna
(vibracional, rotacional y electrnica) liberan esta
energa por medio de la fragmentacin
Los iones con baja energa permanecen intactos (Ion
Molecular)
Es la tcnica de ionizacin ms comn
Es la tcnica de ionizacin de la que se obtiene ms
informacin
Todas las bibliotecas comerciales disponibles estn
basadas en los espectros obtenidos por esta ionizacin
Es la ionizacin que ms se utiliza con el sistema CG-EM
CMO SE GENERA UN
ESPECTRO DE MASAS POR IE?
Filamento
Analizador
Cmara de Ionizacin
Espectro de Masas
m/z
Detector
Ionizacin Electrnica
Metanol (CH3OH, P.M. 32)
31
12C
16O
29
32
1H
13C
15
30
17
33
Ionizacin Qumica
Ionizacin Qumica
Reacciones
CH4 + e -
+
CH4
+ CH4
CH5+
+ 2 e-
+
CH4
+
CH5 + CH3
+
+ CH4
MH
analito
Protonacin
Ionizacin Qumica
Ejemplo
IE
IQ
Malatin
(Pesticida)
P.M. 330
Xe
Xe+
Xe
Xe+
Xe+
Xe+
Xe+
Xe+
Xe+
Xe+
Xe
Xe
Intercambio de carga
Ionizacin
Xe+
Xe
M+
M-
Xe
M
M+
M+
M+H+
M-H-
Xe
Procesos primarios
Procesos secundarios
Ionizacin por transferencia de carga
Xe
ANALIZADORES
Sector Magntico
Cuadrupolo
Trampa de Iones
Tiempo de Vuelo
Sector Magntico
Magneto
Cmaradedeionizacin
Cmara
Ionizacin
Detector
Sector Magntico
y Sector Elctrico
Sector magntico: El campo magntico ejerce una
fuerza perpendicular al movimiento del ion para
deflectar los iones de acuerdo a su momento.
Sector elctrico: El campo elctrico ejerce una fuerza
perpendicular al movimiento del ion para deflectar los
iones de acuerdo a su energa cintica.
Al salir los iones de la cmara de ionizacin tienen
diferente velocidad, para obtener una mejor
resolucin es necesario adicionar un sector elctrico
que colime o rena los iones de acuerdo a su energa
cintica.
Doble Sector
m/z=B2r2/2V
Sector Magntico
Doble sector
Geometra
Nier - Johnson
Geometra Inversa:
1.
Sector Magntico
2.
Sector Elctrico
Sector Electrosttico
Sector Magntico
Ventajas:
Excelente resolucin de masa
Excelente exactitud de masa
Excelente sensibilidad
Desventajas:
Precio: Sistemas de alto costo
Adquisicin espectral lenta
(tiempos de anlisis largos)
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Un valor
de m/z
sale
Todos los
valores de m/z +
entran
+
-
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Ventaja:
Precio: el sistema menos caro del mercado
Desventajas:
Los lmites de deteccin no son
tan buenos como en otros sistemas
Adquisicin espectral lenta
(tiempos de anlisis largos)
Rango de masas limitado
Trampa de Iones
Detector
Trampa de Iones
Trampa de Iones
Ventajas:
Capacidad para MS/MS
Precio: no tan bajo como los
cuadrupolares
Lmites de deteccin mejores que
los cuadrupolares
Desventajas:
Reacciones ion-molcula
Adquisicin espectral lenta
(tiempos de anlisis largos)
Rango de masas limitado
Detector
El detector es colocado en el punto focal
para asegurar una ptima resolucin msica
Desventaja:
Precio: tiende a ser ms caro que los
sistemas cuadrupolares y algunas
trampas de iones pero menos costoso
que los de sectores
Sistema CG/EMTOF
Algoritmo de Deteccin
Automtica de Picos
Enmascaramiento y Coelucin
Propylene Glycol
139
139Analitos
Analitos
16
16minutos
minutos
Anlisis Elemental
(Combustin-Reduccin)
La informacin
obtenida se reporta
como porcentajes de
elementos (C, H, N, S,
y O). Hay rompimiento
de todos los enlaces
Anlisis por
Espectrometra de Masas
En Espectrometra de
Masas la energa
impartida por el haz
de electrones a la
molcula rompe
algunos de los
enlaces. Porciones
grandes de la
estructura de la
molcula
permanecen intactas
permitiendo la
identificacin del
analito.
Resolucin
Clculo de Masa
3 diferentes formas de calcular el Peso Molecular:
Masa Promedio: Se utiliza el peso atmico (es el
promedio de todos los istopos) para cada
elemento. C=12.01115, H=1.00797, O=15.9994,
N=14.00674
Masa Monoisotpica: Se utiliza la masa exacta
del istopo ms abundante de cada elemento.
C=12.000000, H=1.007825, O=15.994915,
N=14.003074
Masa Nominal: Se utiliza la masa ntegra del
istopo ms abundante de cada elemento. C=12,
H=1, O=16, N=14
Resolucin
Es la capacidad de un espectrmetro
para distinguir entre dos iones con
masas cercanas.
Se expresa como R=m/m, donde m es
la diferencia de masas entre los dos
iones y m la masa nominal del in de
menor masa.
Resolucin
Baja Resolucin
CO .
+
N2 .
+
C2H4 .
+
27 28 29
Alta Resolucin
+
+
CO
+
N2
C2H4
Resolucin
Ejemplo
Masa
Nominal
Masa
Monoisotpica
Masa Promedio
C17H32
236
236.2504
236.44459
C16H28O
236
236.2140
236.40096
C15H28N2
236
236.2252
236.40389
Resolucin
Ejemplo
C17H32 y C16H28O
C17H32 y C15H28N2
C15H28N2 y C16H28O
Resolucin = R = m / m
C 17H 32 y C 16H 28O
C 17H 32 y C 15H 28N 2
C 15H 28N 2 y C 16H 28O
Resolucin necesaria
236.2140 / 0.0364= 6,489
236.2252 / 0.0252= 9,374
236.2140 / 0.0112= 21,090
Exactitud de Masa
Exactitud de Masa = m/z Calculada m/z Observada x 106
m/z Calculada
Ejemplo:
400.0020 400.0000 = 0.002 x106 = 4.99 ppm
400.0020
400.0020
Exactitud: 2 mmu (miliunidades) o 5 ppm
Sensibilidad
Es una medida de la respuesta del
instrumento para iones de un compuesto en
particular
Indica el valor de la corriente inica
detectada en el colector
Siempre debe estar referida a un compuesto
determinado (relacin seal-ruido)
Disminuye al aumentar la resolucin y la
velocidad de barrido
Est determinada por la eficiencia de la
ionizacin, eficiencia de la transmisin y
respuesta del detector
Sensibilidad y
Detectores para CG
DETECTOR
MS-SIM
MS-Scan
1
FPDS
TCD
ECD-CC
3
0.1
NPD
0.1
FID
0
20
40
60
80
pg
DIP
DEP
Se obtuvo M .
IE
No se obtuvo M.
No
IQ
PM < 3000
PM > 3000
FAB
Otras tcnicas
(ESI, MALDI)
Diagrama Mezcla
+
Se obtuvo M .
Mezcla
S
Voltil?
No
CG
HPLC
IE
IQ
+.
No se obtuvo M
ECZ
Otras tcnicas
Electroespray, , Frit FAB