Fisiologa de la hematopoyesis

M. Ramrez Orellana1, A.M. Cornejo Gutirrez2

Oncologa Peditrica. Hospital Nio Jess. 2Equipo de Atencin Primaria de Ocaa

Resumen

Palabras clave

Abstract

Key words

El sistema hematopoytico est compuesto por diferentes tipos celulares que derivan de la
diferenciacin y expansin de progenitores inmaduros. Su funcionamiento correcto asegura la
produccin de las clulas responsables del transporte de oxgeno, la coagulacin sangunea y
la inmunidad. Se organiza como una jerarqua en la que las relaciones entre los diferentes tipos
celulares se basan en la capacidad de proliferacin y de diferenciacin celular. El
funcionamiento normal de la hematopoyesis resulta de la interaccin entre mecanismos
intracelulares y la influencia del microambiente donde se desarrollan las clulas
hematopoyticas.
Hematopoyesis; Fenotipo; Ensayos funcionales; Proliferacin; Diferenciacin.

PHYSIOLOGY OF HEMATOPOIESIS
Hematopoietic cells derive from the selfrenewal and differentiation of immature progenitors. The
hematopoietic system provides the cells responsible for the oxigen exchange in the body
tissues, blood clotting and immune defense. This system is organized as a hierarchy of different
cells with different proliferative and differentiative capacities. Microenviroment cues as well as
intracellular genetic programms govern the physiology of the hematopoietic system.
Hematopoiesis; Phenotype; Functional assays; Proliferation; Differentiacion.

Pediatr Integral 2004;VIII(5):377-382.

INTRODUCCIN
Diariamente miles de millones de clulas hemticas maduras, principalmente
eritrocitos y granulocitos, mueren y son
eliminadas de la circulacin. Un nmero
equivalente de clulas jvenes alcanza la
sangre perifrica (SP), de manera que se
compensa la prdida ya sealada. La hematopoyesis hace referencia a este proceso continuo de produccin de clulas
hemticas. En este artculo, vamos a comenzar describiendo las clulas que componen el sistema hematopoytico, seguidamente describiremos la organizacin
de dicho sistema y, por ltimo, hablaremos del funcionamiento normal de la hematopoyesis.
ANATOMA CELULAR
DE LA HEMATOPOYESIS
El sistema hematopoytico est compuesto por diferentes tipo celulares: c-

lulas madre, progenitores y clulas maduras. Su localizacin anatmica cambia a lo largo del desarrollo embrionario.
El sistema hematopoytico est compuesto por diferentes tipo celulares organizados jerrquicamente (Fig. 1). Mientras
su desarrollo y maduracin sucede en localizaciones anatmicas concretas, los
elementos maduros y, en menor medida,
los inmaduros circulan juntos por la SP.
La hematopoyesis durante
el desarrollo embrionario
La localizacin anatmica del sistema
hematopoytico cambia a lo largo del desarrollo embrionario y postnatal. Hoy da
se piensa que este proceso se inicia durante la embriognesis, a partir de clulas mesodrmicas capaces de generar
tanto hematopoyesis como clulas endoteliales: hemangioblastos. La primera localizacin es extraembrionaria, en los is-

lotes hemticos del saco vitelino. La hematopoyesis en este momento se caracteriza por restringirse a la produccin de
clulas eritroides nucleadas, con hemoglobina embrionaria. Posteriormente, la
hematopoyesis tendr una localizacin
definitiva intraembrionaria, primero en la
esplacnopleura paraartica y luego en
la regin denominada AGM (Aortic-Gonadal-Mesonephros). Despus de desarrollarse la circulacin sangunea, es el hgado fetal el principal rgano hematopoytico, para trasladarse definitivamente a
la mdula sea (MO) y tejidos linfticos
perifricos.
Clulas hematopoyticas
En el sistema hematopoytico se reconocen diversos tipos celulares, que podemos agrupar en: clulas madre, clulas progenitoras y clulas maduras
(Fig. 2). El inicio del proceso de diferenciacin hematopoytica se encuentra en

377

FIGURA 1.
Clulas del
sistema
hematopoytico

Clulas
madre
mieloides

Clulas
madre

Clulas
madre
linfoides

CFU-GEMMM

Pro-B
Pro-T
Pre-B

CFU-Meg BFU-E

CFU-GM

CFU-Eo CFU-Ba CFU-Mast

Pre-T

CFU-E CFU-G CFU-M

Basfilos
Neutrfilos
Plasmticas
Monocitos
Mastocitos
Eosinfilos
Eritrocitos

NK

Plaquetas

La figura recoge las diferentes subpoblaciones hematopoyticas y las relaciones que

mantienen entre ellas.

FIGURA 2.
Representacin
esquemtica del
sistema
hematopoytico

Sistema hematopoytico
Clulas
madre
Progenitores
comprometidos

+ Maduracin
Expansin

Clulas
maduras

378

el compartimento de clulas madre o clulas troncales hematopoyticas (stem

cells). Este grupo de clulas es el responsable de la generacin continua y de
por vida de todas las dems clulas hemticas. Son las clulas con la mxima
capacidad de autorrenovacin y diferenciacin, caractersticas que se van perdiendo conforme las clulas hematopoyticas se diferencian en elementos ms
maduros. Las clulas madre hematopoyticas son las nicas capaces de regenerar el sistema hematopoytico del
receptor de un trasplante. Los estadios
intermedios de desarrollo celular entre las
clulas madre y las clulas hematopoyticas maduras estn constituidos por clulas que han sufrido restricciones en la
capacidad de diferenciacin, pero todava no han adquirido los cambios morfolgicos tpicos de las clulas hemticas
maduras; son los progenitores comprometidos. Las clulas ms maduras de los
diferentes linajes mieloides (eritrocitos,

polimorfonucleares, monocitos y megacariocitos) se reconocen fcilmente gracias a sus caractersticas morfolgicas.

Suponen el estadio final en el proceso de
maduracin hematopoytica y constituyen la mayora de las clulas presentes
en los sitios de hematopoyesis fisiolgica, por lo que son las clulas monitorizadas en los diferentes procesos fisiopatolgicos de la prctica mdica. Son, adems, las clulas diana de los diferentes
mecanismos de control que afinan los
cambios en su viabilidad, expansin y diferenciacin, as como de la liberacin final de las clulas maduras a la circulacin sangunea. Tanto las clulas madre
como los progenitores y las clulas maduras se encuentran en la MO, en la SP
y tambin en la sangre del cordn umbilical del recin nacido.
El proceso de diferenciacin hematopoytica se describe como una jerarqua
de clulas progenitoras, en la que cada
estadio sucesivo se distingue del siguiente
por un fenotipo caracterstico, as como
por el nmero y tipo(s) de clulas hijas
maduras que son capaces de generar.
Esta organizacin no se puede visualizar in vivo directamente, en parte por la
movilidad de los progenitores dentro de
la MO y en parte porque muchos cambios
tempranos e irreversibles en la expresin
gnica suceden antes de que se expresen como cambios en la morfologa celular. Por este motivo, todas las clulas he-

matopoyticas inmaduras se clasifican

morfolgicamente de manera indiscriminada como clulas blsticas: clulas de
tamao pequeo, redondas, con ncleo
grande y citoplasma escaso. Las relaciones entre progenitores y su progenie, que
definen el inicio de la diferenciacin irreversible de dichos progenitores hacia un
linaje hematopoytico concreto, no pueden ser estudiadas por criterios morfolgicos sino por otro tipo de anlisis, fundamentalmente por marcadores de la
membrana plasmtica (inmunofenotipo) y
por ensayos funcionales (cultivos in vitro,
modelos animales):
Inmunofenotipo: los elementos celulares diferentes del sistema hematopoytico presentan un perfil de expresin de marcadores de superficie que permite distinguirlos unos de
otros mediante citometra de flujo (Fig.
3). Adems, basndose en dichas molculas de superficie se pueden purificar poblaciones de progenitores hematopoyticos para su uso en trasplantes hematopoyticos o para ensayos funcionales. Existen muchas
molculas que determinan el inmunofenotipo de los progenitores, algunos de los cuales estn recogidos en
la figura 3. As, las clulas madre hematopoyticas del ratn se definen
como clulas que expresan la molcula Sca1, altos niveles del receptor
c-kit, bajos niveles del antgeno Thy
y no expresan antgenos de los diferentes linajes maduros. Son clulas
Sca1+c-kithiThyloLin-. La expresin del
receptor de interleuquina 7 (IL7R) y
del receptor de trombopoyetina (TpoR)
ayudan a identificar progenitores que
exclusivamente generan clulas mieloides o clulas linfoides. De la misma
manera, la expresin o no de otras molculas distingue a progenitores diferentes durante la maduracin y diferenciacin hematopoyticas (Fig. 3).
Tambin, existen marcadores asociados clsicamente a clulas hemticas maduras: CD41 en plaquetas,
glicoforina en eritrocitos, CD15 en granulocitos, CD14 en monocitos, CD19
en linfocitos B, CD3 en linfocitos T o
CD56 en clulas NK.
Ensayos funcionales: estudian las dos
caractersticas principales que distin-

guen a los diversos tipos de progenitores hematopoyticos: el potencial

proliferativo (nmero total de clulas
hijas) y los linajes hematopoyticos diferentes (tipos distintos de clulas hijas) que puede generar un determinado tipo de progenitor (Fig. 4). Ms
adelante, detallaremos los ensayos
ms utilizados, tanto in vitro como in
vivo. Un tipo especial de ensayo in vivo que no explicaremos aqu es la generacin de animales que bien sobreexpresan (animales transgnicos)
o bien no expresan (animales knockout) un determinado cido ribonuclico
mensajero (ARN-m) y, por tanto, su
protena correspondiente. Estos animales sirven para estudiar la significacin fisiolgica de molculas implicadas en la hematopoyesis.
El desarrollo de las clulas linfoides
es diferente al de las clulas mieloides en
muchos aspectos. Por ejemplo, los cambios morfolgicos no son tan pronunciados, al menos hasta el momento en el que
alcanzan la capacidad de responder a estmulos antignicos. Adems, los primeros estadios de diferenciacin linfoide
se acompaan de produccin y destruccin de una enorme cantidad de clulas. Hasta la fecha, no se han conseguido desarrollar condiciones de cultivo in vitro para progenitores linfoides, lo que ha
impedido realizar estudios comparables
a los desarrollados para los progenitores mieloides.
ENSAYOS FUNCIONALES PARA
PROGENITORES
HEMATOPOYTICOS
Las capacidades de proliferacin y
maduracin de los diferentes tipos de
clulas hematopoyticas slo se pueden
estudiar mediante ensayos funcionales.
Mucho de lo que hoy da conocemos
sobre la hematopoyesis fisiolgica y sus
mecanismos de regulacin proviene de
estudios cuantitativos de poblaciones
de clulas madre y progenitores comprometidos, definidos por su comportamiento en ensayos in vitro e in vivo. Los ensayos funcionales parten de una poblacin
hematopoytica y detectan una actividad
concreta en las clulas estudiadas al finalizar dicho ensayo. Requieren someter

Clulas
madre
mieloides
CD34+FCRlo
EpoR+

Sca1+ckithiThyloLin-

Sca1lockit+ThyLin-IL7R-TpoR+

Clulas
madre
linfoides

Clulas
madre
Sca1lockitloThyLin-IL7R+TpoR-

CFU-GEMMM

FIGURA 3.
Inmunofenotipo
de las clulas
hematopoyticas

CD34+FCRhi
EpoR-

CFU-GM
BFU-E
Pro-B

CFU-G CFU-M

CFU-Meg
CFU-E
Plaquetas

Eritrocitos

CD41

GlyA

Neutrfilos
Monocitos
CD15

Pro-T

Linfocitos B Linfocitos T Clula

NK
CD19

CD3

CD14

CD56

Las diferentes subpoblaciones hematopoyticas se distinguen por el perfil de

molculas que expresan en su membrana plasmtica. La figura recoge algunos de los
inmunofenotipos mejor caracterizados, que aparecen encuadrados.

a las clulas a unas condiciones en las

que se puedan determinar tanto el potencial de diferenciacin (nmero de linajes hematopoyticos representados entre las clulas hijas), como el potencial de
proliferacin (nmero total de clulas hijas producidas). Los ensayos que cumplen estos criterios y que permiten la evaluacin de la actividad de clulas hematopoyticas individuales, facilitan la cuantificacin de la frecuencia de progenitores en una poblacin determinada. De esta forma, se pueden estudiar tambin cambios cualitativos y cuantitativos en los progenitores.
El estudio de la hematopoyesis humana se ha beneficiado de los modelos y
ensayos aplicados a la hematopoyesis
murina. Aunque no todos los ensayos funcionales en ratones son aplicables a la hematopoyesis humana, comentaremos los
ms importantes por ser los que se encuentran ms frecuentemente en la literatura.
Clulas madre
CFU-S
El primer ensayo desarrollado para
cuantificar la capacidad de proliferacin
y de diferenciacin de clulas hematopoyticas fue denominado unidad formadora de colonias esplnicas (CFU-S, colony
forming unit-spleen). Este ensayo detecta una subpoblacin de progenitores que,
11-12 das despus de ser trasplantadas

Sistema hematopoytico
clulas progenitoras
Clulas CRUs
madre CFU-S
LTC-ICs
Progenitores CFU-GEMM
comprometidos CFU-GM, BFU-E
CFU-G, CFU-M,
CFU-E, CFU-Meg
Clulas
maduras

FIGURA 4.
Ensayos
funcionales
hematopoyticos

La figura representa la localizacin de

los diferentes progenitores en el sistema
hematopoytico. Cada progenitor se
identifica por un ensayo funcional (ver
texto).

a ratones irradiados letalmente, son capaces de originar colonias de clulas hematopoyticas en el bazo de los receptores. Las colonias esplnicas son visibles
macroscpicamente y dan lugar a clulas hematopoyticas de diferentes linajes.
Ms an, si se aslan y se trasplantan a ratones, algunas son capaces de generar
nuevas colonias esplnicas en los receptores secundarios. Por lo tanto, las CFUS definen a una clula capaz de autorrenovarse y de diferenciarse en distintos
linajes hematopoyticos, caractersticas
ambas de una clula pluripotente. Estudios posteriores han descubierto que las
CFU-S nos son una poblacin homognea, sino que engloban a progenitores con
propiedades fenotpicas y biolgicas distintas.

379

CRU
La unidad de repoblacin competitiva
(CRU, competitive repopulation unit) se refiere a una clula que produce un nmero estable y continuado (por ms de 4 meses) de clulas mieloides y linfoides, tras
ser trasplantada a un ratn receptor. Este ensayo requiere unas condiciones especiales y complejas. De un lado, el trasplante se hace a dilucin lmite, para que
exista la posibilidad de examinar la actividad de clulas individuales. De otro lado, la CRU compite con otras clulas hematopoyticas en el proceso de regeneracin postrasplante. Esto hace imprescindible que dicha CRU y su progenie sean distinguibles, normalmente por marcadores de membrana. Por ltimo, la duracin del ensayo es larga, ms de 4 meses.
Sin embargo, las caractersticas tan exigentes del ensayo han servido para caracterizar muchos aspectos biolgicos de
las clulas troncales hematopoyticas.
El ensayo de CRU se desarroll primero en estudios de hematopoyesis murina. Recientemente, han aparecido animales inmunodeficientes en los que se ha
conseguido trasplantar y desarrollar hematopoyesis humana. Esto ha hecho que
se haya intentado desarrollar ensayos para caracterizar cualitativa y cuantitativamente las clulas madre hematopoyticas
humanas. Aunque han resultado de utilidad, hay que tener presente que estos ensayos de hematopoyesis humana en animales inmunodeficientes no deben ser
considerados como ensayos funcionales de las clulas madre humanas. El nico ensayo de este tipo sera el trasplante
alognico en humanos.

380

LTC-IC
Este ensayo es defendido por algunos
como un ensayo para clulas madre, aunque no existe acuerdo al respecto. Identifica una clula capaz de generar progenitores mieloides al cabo de 5 semanas de
cultivo sobre un estroma de MO. Sus siglas
corresponden a una clula iniciadora de
cultivo a largo plazo (long term cultureinitiating cell). Experimentos con retrovirus
han demostrado que las LTC-ICs no son
capaces de generar hematopoyesis humana en ratones inmunodeficientes, lo que
pone en cuestin su validez como ensayo para clulas madre hematopoytica.

Progenitores comprometidos
CFU
Las unidades formadoras de colonias
hematopoyticas (colony forming units)
identifican a progenitores hematopoyticos
comprometidos con algn linaje mieloide
conocido. En estos ensayos se cultiva una
poblacin de clulas hematopoyticas en
un medio semislido (metilcelulosa normalmente) que contiene diferentes factores de crecimiento hematopoyticos. La
actividad hematopoytica de los progenitores se identifica por el crecimiento de colonias de clulas tras 2 semanas en cultivo. El tipo de colonia identifica al tipo de
progenitor. As, se identifican progenitores
granuloctico-macrofgicos (CFU-GM), granulocticos (CFU-G), eritrocticos (BFU-E
ms inmaduro, y CFU-E ms maduro), megacariocticos (CFU-Meg), y mixtos (CFUGEMM). Los ensayos de colonias han servido para estudiar los tipos y concentraciones de factores de crecimiento que mantienen, estimulan, aumentan o bloquean la
proliferacin y diferenciacin de los diferentes progenitores hematopoyticos.
FUNCIONAMIENTO
DE LA HEMATOPOYESIS
El funcionamiento normal de la hematopoyesis resulta de la interaccin entre mecanismos intracelulares y la influencia del microambiente donde se desarrollan las clulas hematopoyticas.
Mecanismos intrnsecos versus
extrnsecos
Los mecanismos intrnsecos se refieren a los cambios que acontecen en la
clula hematopoytica y dirigen su comportamiento. Se han distinguido siempre
cambios reversibles (aquellos que tienen
que ver con la proliferacin celular) de los
irreversibles (los que se asocian a diferenciacin o a muerte celular).
Los mecanismos moleculares que regulan la viabilidad y la progresin en el ciclo celular estn conservados a lo largo
de la evolucin. No son diferentes en las
clulas hematopoyticas en comparacin
con otras clulas del organismo. Estudios
en este sentido han explorado sobre todo
el papel de factores extrnsecos en la activacin de estos fenmenos biolgicos,
adems de las vas de sealizacin de la
seal extracelular hacia el ncleo.

Los procesos moleculares que regulan los cambios progresivos e irreversibles en la expresin gnica que resulta
en la diferenciacin de las clulas hematopoyticas, se asocian a mediadores
intracelulares especficos y tambin genricos. Entre los genes ms caractersticos de estos procesos se hallan los factores de transcripcin expresados slo en
clulas hematopoyticas, e incluso a veces slo en algn linaje hematopoytico:
SCL/TAL-1, GATA-1, GATA-2, PU-1. Otros
genes codifican molculas que no son especficas del sistema hematopoytico, pero que son especficos en un estadio de
desarrollo concreto. Un ejemplo lo constituyen la familia de los genes HOX. Adems, se han descrito cambios en la expresin de genes de las molculas de superficie, de molculas de adhesin y de
mediadores intracitoplasmticos, durante los cambios asociados a la diferenciacin hematopoytica. Los estudios de
sobreexpresin o de inhibicin de genes
han descubierto tanto un papel esencial
en algunos genes como un papel redundante de otros, adems de funciones no
hematopoyticas en diferentes estadios
del desarrollo embrionario.
Mecanismos locales versus
sistmicos
Aunque los ensayos in vitro han permitido estudiar la respuesta de las clulas hematopoyticas a factores de crecimiento definidos, la viabilidad, proliferacin, diferenciacin y apoptosis in vivo debe estar regulada por cambios en el ambiente local que rodea a las clulas progenitoras. Dichos cambios incluyen el contacto directo de los progenitores y las clulas del estroma, y cambios en factores
de crecimiento hematopoyticos solubles
y unidos a la matriz extracelular. Existen
numerosos ejemplos del papel regulador
de tales contactos. Por ejemplo, la interaccin de las CFUs con las clulas del
estroma se hace por medio del factor de
clulas madre (SCF, stem cell factor), expresado como molcula unida a la membrana de clulas estromales. Menos conocido es el papel que puedan jugar molculas que se internalizan en la clula.
Los cultivos de MO a largo plazo reproducen algunas de las caractersticas locales de la hematopoyesis. El estroma ce-

lular que se genera contiene diversos tipos

celulares: macrfagos, adipocitos, fibroblastos, clulas endoteliales y reticulares.
Adems, contiene matriz extracelular, formada por fibronectina, hemonectina, trombospodina, colgeno, laminina y glicosaminoglicanos. La interaccin entre los progenitores y el estroma es un proceso muy
complejo. Estas interacciones adhesivas,
junto con la accin de las citoquinas presentes en el microambiente medular promoviendo o inhibiendo el crecimiento de
los elementos celulares, inducen la quiescencia o la proliferacin y diferenciacin
de los progenitores hematopoyticos primitivos y resultan en la progresin ordenada del sistema hematopoytico.
Pero no toda la regulacin in vivo es
local. La eritropoietina es una molcula circulante prototipo de un mecanismo de control por retroalimentacin. Cambios mensurables en los niveles circulantes de otros

factores hematopoyticos pueden ser detectados en una gran variedad de enfermedades y alteraciones del sistema hematopoytico. Asimismo, la administracin
de dosis farmacolgicas de algunos factores de crecimiento produce efectos importantes en el nmero de clulas hemticas circulantes y la salida desde la MO
a la SP de progenitores muy inmaduros
(movilizacin de progenitores a la SP). Este proceso resulta clnicamente til porque
permite recoger dichos progenitores mediante leucoafresis, lo que ha permitido
la realizacin de trasplantes hematopoyticos en humanos sin necesidad de realizar la recogida de MO.
BIBLIOGRAFA
Los asteriscos reflejan el inters del artculo a
juicio del autor.
1.** Baron MH. Embryonic origins of mammalian hematopoiesis. Exp Hematol 2003;
31: 1160-9.

Es un resumen actualizado de los conocimientos

existentes sobre las primeras fases del desarrollo del sistema hematopoytico.
2.***

Akashi K, Traver D, Miyamoto T, Weissman IL. A clonogenic common myeloid

progenitor that gives rise to all myeloid
lineages. Nature 2000; 404: 193-7.

3.***

Kondo M, Weissman IL, Akashi K. Identification of clonogenic common lymphoid progenitors in mouse bone marrow.
Cell 1997; 91: 661-72.
Estos dos trabajos son muy buenos ejemplos
del uso de tcnicas de citometra y ensayos
funcionales que han permitido la identificacin
fenotpica y funcional de poblaciones de progenitores exclusivamente mieloides y linfoides.
4.**

Ramrez M, Civin CI. Fisiologa de la hematopoyesis. En: Madero L, Muoz A,

editores. Hematologa y Oncologa Peditricas. Madrid: Ergon S.A.; 1997. p.
1-19.
Este captulo ampla la informacin reflejada en
el presente artculo, sobre todo en lo referente a factores de crecimiento hematopoyticos
y subpoblaciones celulares.

381

ALGORITMO:
FISIOLOGA
DE LA
HEMATOPOYESIS

FISIOLOGA DE LA HEMATOPOYESIS

Anatoma celular

Hematopoyesis
embrionaria

Ensayos funcionales

Clulas madre

Funcionamiento

Mecanismos
intrnsecos versus
extrnsecos

CRU
Clulas
hematopoyticas

Inmunofenotipo

Ensayos
funcionales

CFU-S

LTC-IC

Progenitores

CFU

382

Mecanismos
locales versus
sistmicos