UNIVERSIDAD

DEL CAUCA
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA
EDUCACIN
DEPARTAMENTO DE BIOLOGA
REA DE MICROBIOLOGIA
Prcticas de Laboratorio de Microbiologa

MTODOS DE ASEPSIA Y UBICUIDAD MICROBIANA
Gua No. 3



1. INTRODUCCIN

Los microorganismos como otros seres vivos, son susceptibles a los cambios de
condiciones ambientales y en la medida en que se han podido adaptar a estos cambios,
se han distribuido en una gran diversidad de hbitats incluyendo los de condiciones
extremas sobre todo de tipo fsico y qumico.

Por lo tanto, para limitar su presencia o eliminarlos, y de esta manera poder desempear
correctamente las tareas en un laboratorio de microbiologa, es indispensable contar con
conocimientos tericos acerca de los diferentes mtodos de control del crecimiento
microbiano (mtodos de esterilizacin, desinfeccin, asepsia, etc.); y con un buen manejo
prctico de los equipos destinados a tal fin, as como tambin del flameado de cajas de
Petri, tubos y esterilizacin de asas a la llama del mechero.

2. OBJETIVOS
Observar la importancia de la asepsia en el control de la contaminacin microbiana en
el laboratorio
Demostrar la ubicuidad de los microorganismos a partir de diversas fuentes utilizando
tcnicas de cultivo en medio slido.

3. CONSULTAS PRELIMINARES

Se recomienda leer un texto de microbiologa general sobre la distribucin de los
microorganismos en diferentes ambientes y conceptos de tcnicas de asepsia.

4. MATERIALES

Los materiales requeridos por grupo son:

MATERIAL CANTIDAD
Cajas de Petri 6
Copos de algodn 6
Asa bacteriolgica 1
Mechero 1
Tubos taparosca (2 agua, 1 sln salina) 3

5. REACTIVOS

SUSTANCIAS* CANTIDAD
Agar nutritivo 90 ml (15 x c/c)
Solucin salina fisiolgica 10 mL
Hipoclorito de Na (5,25%, 2,5%, 0,5%)
Agua destilada estril 20mL
Cultivo bacteriano en caldo 1


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No hay restriccin de seguridad por el uso de este medio de cultivo. Remitirse al protocolo
de preparacin recomendado por el proveedor en el frasco del medio de cultivo.

6. EQUIPOS

EQUIPOS* CANTIDAD
Incubadora 1 para todos los
grupos

La incubadora estar previamente calibrada a la temperatura requerida, lo cual ser
realizado por el auxiliar de laboratorio. Favor no manipular el equipo y mantenerlo
cerrado. Abrir solamente para incluir el cultivo a incubar.

7. PROCEDIMIENTO

7.1. TCNICAS ASPTICAS

a) Con un asa sin esterilizar tomar una gota de agua destilada estril y rayar suavemente
la superficie del agar nutritivo, como lo muestra la grfica, teniendo la precaucin de no
romper la superficie del medio de cultivo

b) Limpiar la superficie de la mesa con alcohol al 70%, encender el mechero y quemar el
asa bacteriolgica hasta que se torne roja y dejarla enfriar. Al lado del mechero,
destapar cuidadosamente otro tubo de agua destilada estril y con el asa tomar una
gota, rayar suavemente la superficie del medio de cultivo

c) Una vez realice la siembra, vuelva a quemar el asa para desinfectarla. Flamee la boca
del tubo de ensayo para evitar contaminacin. Repita el procedimiento anterior, pero
coloque la gota a partir del tubo que contiene un cultivo bacteriano. En todos los casos,
evite la manipulacin libre del asa bacteriolgica y flamela hasta lograr la
esterilizacin.

Rotule cada una de las cajas y sllelas con papel parafilm o similar. Colquelas en forma
invertida en la incubadora a 35 +/- 2 C por un periodo de 24 horas.







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7.2. DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN AMBIENTES NATURALES

7.2.1. MICROORGANISMOS DEL AIRE

Destapar una caja de petri con agar nutritivo en. 1. Sobre la incubadora, 2. En pasillo,
3. En el bao, 4. Dentro de la cmara de flujo laminar apagada, 5. Dentro de la
cmara de flujo laminar encendida (realizar el procedimiento de desinfeccin previo al
uso de la cmara) y 6. Al lado del mechero encendido
Dejarla expuesta por 15 minutos, despus tapar adecuadamente y rotular
Incubar a 35 2 C durante 24 a 48 horas, colocando las cajas invertidas.

Los muestreos descritos en los siguientes tems deben realizarse teniendo en
cuenta las tcnicas de asepsia

7.2.2. MICROORGANISMOS EN SUPERFICIES

Tomar una torunda o copo de algodn humedecido en solucin salina
Frotar sobre las siguientes superficies: 1. mesn del laboratorio sin desinfectar, 2.
mesn desinfectado con etanol al 70%, 3. mesn desinfectado con hipoclorito al
5,25%, 4. mesn desinfectado con hipoclorito al 2,5%, 5. mesn desinfectado con
hipoclorito al 0,5%, 6. Pared interna de la incubadora.
Aplicar la torunda sobre un extremo del medio de cultivo en la caja de Petri
Hacer estras en toda la superficie sin romper el medio de cultivo
Tapar adecuadamente y rotular
Incubar a 35 2 C durante 24 a 48 horas, colocando las cajas invertidas.

7.2.3. MICROBIOTA DEL CUERPO HUMANO

7.2.3.1. MANOS

El siguiente procedimiento lo debe realizar una sola persona

a) Sin lavarse las manos, frotar cada uno de los dedos de la mano izquierda haciendo
crculos sobre el agar nutritivo.
b) Aplicar sobre la mano izquierda un gel antibacterial, dejar secar y realizar el
procedimiento anterior en otro medio de cultivo.
c) Lavar con jabn la mano derecha (segn las instrucciones del docente) y enjuagar con
agua de grifo, secar con toalla de papel.
d) Realizar el procedimiento como en el tem a.
e) tapar adecuadamente y rotular
f) Incubar a 35 2 C durante 24 a 48 horas, colocando las cajas invertidas.







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7.2.3.2. MUCOSAS

El siguiente procedimiento lo deben realizar dos personas

Frotar con una torunda de algodn humedecida en solucin salina estril las
siguientes mucosas por persona: fosas nasales, lengua, parpado inferior. (utilizar una
torunda por mucosa muestreada)
Aplicar la torunda sobre un extremo del medio de cultivo en la caja de petri y hacer
estras en toda la superficie sin romper el medio de cultivo
tapar adecuadamente y rotular
Incubar a 35 2 C durante 24 a 48 horas, colocando las cajas invertidas.

8. OBSERVACIONES, CLCULOS Y RESULTADOS

Lleve un registro de todos los cambios observados sobre el medio de cultivo, describiendo
el crecimiento de las colonias, sus colores, formas y texturas, con base en los grficos
anexos. Diferencie los resultados para cada uno de los orgenes de muestras. Para
efectos de descripcin del crecimiento de las colonias, utilice el material anexo.

9. REPORTE DE RESULTADOS

1. Datos del experimento de muestreo de aire
a. Ambiente muestreado:_______________________________________
b. Tiempo de contacto entre ambiente y medio de cultivo:______________
c. Medio de cultivo usado:______________________________________
d. Horas de incubacin:________________________________________
e. Temperatura de incubacin:___________________________________

2. Datos del experimento de lavado de manos
a. Tipo de jabn usado: _______________________________________
b. Tiempo de lavado: __________________________________________
c. Medio de cultivo usado:______________________________________
d. Horas de incubacin:________________________________________
e. Temperatura de incubacin:___________________________________

3. Datos del experimento de muestreo de superficies
a. Ambiente muestreado:_______________________________________
b. Qumico Usado para desinfectar:_______________________________
c. Concentracin del qumico:___________________________________
d. Tiempo de contacto entre ambiente y qumico:____________________
e. Medio de cultivo usado:______________________________________
f. Horas de incubacin:________________________________________
g. Temperatura de incubacin:___________________________________



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4. Datos del experimento de muestreo de mucosas
a. Mucosa muestreada:________________________________________
b. Medio de cultivo usado:______________________________________
c. Horas de incubacin:________________________________________
d. Temperatura de incubacin:___________________________________


Ambiente Microorganismo
Forma de la
colonia
Borde Color
Nmero de
colonias





















10. PREGUNTAS

1. Segn los resultados de la prctica de laboratorio, existen diferencias en la
abundancia y diversidad de los microorganismos dependiendo del ambiente
muestreado? Por qu?
2. Son similares o diferentes lo microorganismos que se encuentran en cada uno de
los ambientes muestreados? Por qu?
3. Consultar y hacer una lista con nombres cientficos de 10 microorganismos
comunes en cada uno de los ambientes de donde se obtuvo la muestra

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4. Con base en la lista que usted realice, seleccionar un microorganismo de cada
ambiente y consultar sobre su clasificacin taxonmica, su metabolismo y su
importancia ecolgica.

11. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/O ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE
LOS RESIDUOS

Los residuos resultantes corresponden a cultivos bacterianos, los cuales se inactivan y
esterilizan en autoclave. Una vez terminado el proceso de esterilizacin, los residuos se
disponen en bolsas termoresistentes, se dejan enfriar hasta solidificacin y se almacenan
temporalmente bajo congelacin, La disposicin final se hace mediante el servicio de
recoleccin de residuos biolgicos contratado por la Universidad con la Administracin
Municipal.

12. BIBLIOGRAFA

ALCARAZ MUNGUA, MONICA. 2005. Manual de prcticas de microbiologa. Universidad de
Colima, Mxico, D.F.

ALZATE, Rubn. Microbiologa: Prcticas de laboratorio. Universidad Nacional de Colombia.
Sede Palmira. 1996.

BENSON, HAROLD. 1981. Microbiological applications. A laboratory manual in general
microbiology. Wm. C. Brown Company Publishers. Iowa.

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CRECIMIENTO EN CALDO NUTRITIVO




CRECIMIENTO EN AGAR INCLINADO









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CRECIMIENTO EN GELATINA