UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA FACULTAD

DE INGENIERA AMBIENTAL

ACCIN BACTERIOSTTICA SELECTIVA

DEL CRISTAL VIOLETA-ACCIN
OLIGODINMICA DE METALES PESADOS

Presentado por: PAREJA MENDOZA

WILLIAM

20141379K

PROFESOR: TELLO CEBREROS, JORGE

GILBERTO

CURSO:MICROBIOLOGIA SANITARIA 1
LABORATORIO N 5

2016

1. OBJETIVO
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

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Demostrar el efecto de diferentes concentraciones de cristal violeta sobre bacterias

Gram positivas y Gram negativas.
Tambin es demostrar como las concentraciones en que se diferencia cada crisol
varia el crecimiento de microorganismos.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Demostrar la accin oligodinmica de algunos metales

Determinar el por qu no presenciamos crecimiento cerca de la moneda pero si lo hubo
alrededor, mientras ms lejano a la moneda ms crecimiento se notara.

2. FUNDAMENTO TEORICO
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Los colorantes derivados del trifenilmetano tiene una accin bacteriosttica selectiva
sobre los organismos Gram positivos en diluciones que no tienen ningn efecto apreciable
sobre el crecimiento delas bacterias Gram negativas.. En general, la accin
bacteriosttica selectiva es semejante a la reaccin de Gram, aunque unas cuantas
excepciones resaltantes. Esto quiere decir que los organismos Gram positivos son ms
susceptibles a la accin de estos colorantes que las bacterias Gram negativas.
El cristal violeta es un colorante derivado del trifenilmetano que posee un excelente efecto
bacteriosttico, en dilucin del 1:100,000 inhibe el crecimiento tanto del escherichia coli(Gram-) como del bacillus subtilis (Gram+) en dilucin del 1:100,000 no crece. En dilucin
del 1:1000,000 no tiene ningn efecto sobre ninguno de los dos organismos y el
crecimiento se lleva a cabo como si no hubiera colorante en el medio agar.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Algunos metales en diluciones muy altas son capaces de ejercer una accin toxica sobre
las bacterias.
Si se coloca una laminilla de plata o de cobre debidamente preparada dentro de una placa
de Petri y se cubre con agar fundido, previamente inoculado con un organismo, se puede
observar con claridad varias zonas diferentes de desarrollo, despus de un periodo de 24
horas de incubacin. Inmediatamente alrededor de la laminilla se ver una zona
despejada en la cual no aparecen colonias. Esta es conoce como el nombre de zona
olegodinmica. Mas al exterior de esta zona habr otra zona ms angosta en la que se
presenta un crecimiento abundante. Esta se denominada zona de estimulacin.
Cantidades diminutas de iones txicos estimula el crecimiento. En todo el resto del agar
ocurre un crecimiento normal.

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Este ejercicio se demuestra el efecto del metal plata o cobre sobre el crecimiento del
escherichia coli.

3. PROCEDIMIENTO

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

1. Mantener 4 tubos con agar nutritivo fundido en el bao maria a 45C.
2. Transferir 1ml de la solucin acuosa de crista violeta de 1:1000 auno de los tubos
con 9ml de agua. Esto da una dilucin de 1:10,000.
3. Usando la misma pipeta, transferir 1ml de la solucin 1:10,000 a una placa Petri y
1ml al segundo tubo con 9ml de agua. Esto da una dilucin de 1:100,000.
4. transferir 1ml de la solucin 1:100,000 a una placa Petri y 1ml al segundo tubo
con 9ml de agua. Esto da una dilucin de 1:1000,000.
5. transferir 1ml de la solucin 1:1000,000 a una placa Petri.
6. Verter el agar fundido en las tres placas de Petri y mezclar bien con el colorante
con el agar rotando suavemente la placa, para obtener una distribucin uniforme
de colorante.
7. Verter el contenido del ultimo tubo de agar en la placa de Petri sin colorante para
que sirva de control.
8. Cuando se ha solidificado el agar, invertir las placas y dividir cada una en dos
partes iguales con lpiz de cera.
9. Marcar cada mitad con el nombre del organismo con el que se va a sembrar por el
mtodo de estras.
10. Rayar en estras la mitad de una placa de Petri con una gota, tomasa con el asa
de inoculador, del cultivo de B.subtillis y la otra mitad igualmete con una gotita del
cultivo de E.coli.
11. Proceder en igual forma con los dems placas Petri.
12. Invertir las placas e incubarlas a 37C por 48 horas.
13. Anotar los resultados.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Limpiar la laminilla sumergindola dentro de una solucin 10% de cido ntrico.

Lavar bien las laminillas con agua para quitarle todo el cido.
Colocar la laminilla en el centro de una placa Petri
Tomar un tubo con agar con una gotita del cultivo de escherichia coli.
Verter el agar inoculado dentro de la placa de Petri que contiene la laminilla.
Dejar que solidifique el agar.
Invertir la placa e incubarla a 37C por 48 horas.

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8. Presentar un informe explicando qu se debe esta accin y qu aplicacin prctica

puede tener.

4. RESULTADOS
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADO

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5. DISCUSIONES
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADO

6. CONCLUSIONES
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Una de nuestras conclusiones a la que podamos llegar es como varia la cantidad de
microorganismos en las diluciones utilizadas

Tambin llegamos a la conclusin de algo que ya sabamos por medio de la teora, por
ejemplo que en 1/10000 no bamos a notar ninguna de las dos bacteria (Escherichia Coli y
Bacillus Subtilis), en cambio que en 1/100000 bamos a notar solo el crecimiento de la
Escherichia Coli y que en 1/1000000 iba haber crecimiento de ambos.

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ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADO

la accin oligodinmica de los metales pesados, es afectado por la presencia de metales
pesados. por lo que se logra diferenciar tres zonas: la zona oligodinmica, zona de
estimulacin y de crecimiento normal.

Se diferencian tres zonas: la zona oligodinmica (que es una zona despejada donde no
aparecen colonias), zona de estimulacin (zona angosta donde se presenta un crecimiento
abundante) y la zona de crecimiento normal (se presenta en todo el resto del agar).debido a
eso las cantidades diminutas de iones metlicos estimulan el crecimiento mientras que
concentraciones mayores producen inhibicin.

7. RECOMENDACIONES
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

Se debe esterilizar correctamente el inoculador antes de usarlo para extraer el cultivo.

Tener cuidado cuando se utiliza el acido ntrico en la limpieza de la moneda, evitar el
contacto directo con este, haciendo uso de instrumentos adecuados como guantes,
mascarillas para no respirara el gas del acido , ya que este puede causar quemaduras o
irritaciones en los ojos,etc.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADO

Cuando se desinfecta la moneda se hizo falta la seguridad de que en el momento de que
nosotros pongamos en las placas petri siga estando estril ya que en el trayecto estuvo
expuesto al aire.

Otro tambin fue lavar las manos, las cuales no estaban desinfectadas y as cogimos la
moneda, es por eso que notamos un leve crecimiento de microorganismos.

8. BIBLIOGRAFA