El reactivo de Shiff

Fucsina bsica tratada con exceso de cido

sulfuroso lo que la decolora y en presencia
de un aldehdo da color rojo violeta
Se forma cido 4, 4
AMINOSULFINICOTRIFENIL METANO
SULFNICO


Fucsina bsica

Formula: C20-H20-Cl-N3.
color index 42510

Tambien llamada:
1. violeta bsica.
2. Magenta I.
3. alfa4-(p-aminofenil)-alfa4(imi... clorhidrato.
4. Fucsina diamante




El cido leucosulfnico es inestable y pierde cido sulfuroso cuando
se trata con aldehdo
produciendo un colorante quinoideo de color violeta-prpura.
cido 4, 4 AMINOSULFINICOTRIFENIL METANO SULFNICO
cido leucosulfnico
Metabisulfito de potasio
Fucsina bsica
Identificacin de carbohidratos por accin del
CIDO PERYDICO
Se produce aldehidos en grupos
Glucosidos : hexosas neutras,
azcares
Galactsidos
Mansidos
Fucsidos
cido silico

el acido perydico rompe los enlaces C - C

en diversas estructuras en las que estn presentes grupos


1:2-glicol (CHOH-CHOH)

convirtindolos en dialdehdos (CHO.CHO)
acido perydico

que lo hace inmensamente superior a los reactivos
corrientemente utilizados para la oxidacin de los enlaces C-C,
no oxida despus a los aldehdos resultantes,
pudiendo estos, ser localizados mediante reactivo de Schiff
para dar un colorante sustituido de color rojo.

la reaccin del cido perydico
con el residuo deshidroglucosa de una molcula de polisacrido.
Puede observarse el colorante rojo formado por la unin de la
leucofucsina con el dialdehdo, un nuevo compuesto.

Accin de la oxidacin por cido
perydico


R-CH CH-R R-CH HC-R+ H2O

OH OH O O

aldehdo aldehdo
HIO
4
glicol
1
Bases qumicas de la reaccin P.A.S.
Reacciones que producen al menos un radical aldehdo
glicol frmula
Producto de oxidacin

HIDROXIAMINO
primario




OH NH
2

-CH- CH-

O O

-CH CH-


+ NH
3




HIO4
Accin de la oxidacin por cido perydico
2
Bases qumicas de la reaccin P.A.S.
Reacciones que producen al menos un radical aldehdo
glicol
frmula Producto de oxidacin

HIDROXIAMINO
secundario



O O

-CH CH-
-OH NH-R


-CH CH-





+ NH
2
R




HIO4
3
Bases qumicas de la reaccin P.A.S.
Reacciones que producen al menos un radical aldehdo
glicol
f r m u l a

HIDROXICETONA








OH O

-CH - C








+H
2
O





O O

-CH COH

Producto de oxidacin frmula
HIO4
4
Bases qumicas de la reaccin P.A.S.
Reacciones que producen al menos un radical aldehdo
glicol
frmula
HIDROXIALDEHIDO



- OH O O

- CH CH - CH CO
2
+ H
2
O
Producto de oxidacin
HIO4
Frmula del reactivo de Shiff
Reactivo de Schiff
Usar fucsina bsica pura ( fucsina diamante)
Color index
Metabisulfito de potasio o sodio
Agregar cido clorhdrico normal o 3 ml de HCl
(Estos forman cido sulfuroso)
Preferible guardar por 24 horas
agregar carbn activado, filtrar
Debe quedar transparente o de color oro plido
PREPARACIN DEL REACTIVO DE SHIFF

Se puede usar a las 4-6 horas
Preferible guardar por 24 horas a T ambiente en
oscuridad
Debe quedar transparente o de color oro plido
si da color rosa debe descartarse
para su uso debe estar a T ambiente
PREPARACIN DEL REACTIVO DE SHIFF
Dura no ms de de 1 mes

Se debe guardar en frasco oscuro y en refrigerador

Se puede usar a las 4-6 horas
Preferible guardar por 24 horas a T ambiente en
oscuridad
Debe quedar transparente o de color oro plido
si da color rosa debe descartarse
para su uso debe estar a T ambiente
PREPARACIN DEL REACTIVO DE SHIFF
Dura no ms de de 1 mes

Se debe guardar en frasco oscuro y en refrigerador
Sustancias P.A.S. Positivas

Estmago: epitelio, glndulas fndicas, cardiales y
pilricas
tero : glndulas del cervix, vagina

Tiroides : coloide

Hipfisis anterior
Secreciones : prstata, vesculas seminales,
folculos ovricos, cuerpos amilceos del cervix,
Sustancias P.A.S. positivas

Pigmentos : ceroide, lipofucsina de las suprarrenales

Membranas basales epiteliales y vasculares

Mucus : glndulas salivales, gl.
traqueobronquiales,
cls caliciformes de intestino

Bordes ciliados de rin e intestino

Tejido conjuntivo: colgeno de esclertica,
sustancia fundamental de cartlago

Lpidos : bastones de la retina


La reaccin tiene una gran especificidad si:


La oxidacin es corta
Se realiza a temperatura adecuada
Se efecta lavado con agua sulfurosa

H.E
P.A.S
Cls. Caliciformes
estmago
HIPOTLAMO
ADENOCARCINOMA
Diagnstico diferencial :
Qu es?
Ssutancias P.A.S positivas
24
IDENTIFICACIN DE HONGOS
UTILIZANDO REACTIVO DE SHIFF


@
IDENTIFICACIN DE HONGOS
Qu sustancia nos permite identificarlas?


@
IDENTIFICACIN DE HONGOS
RICOS EN POLISACRIDOS
P.A.S.
MEMBRANA BASAL - CPSULA DE BOWMAN
GLICOPROTENAS
Tejido muscular GLICGENO
Escasas fibras PAS
posivas
Clulas caliciformes
MUCOPOLISACRIDOS NEUTROS
GLUCOGENOSIS TIPO IV
causada por la deficiencia de la enzima ramificante amilo
a-1,4-1,6-glucotransferasa
Fijadores recomendados

MUCOPLISACRIDOS
Formol tamponado
Solucin de Zenker
Solucin de Bouin

GLICGENO
Carnoy
Lquido de Zenker
Formol alcohlico cido

Fijacin no recomendada

Glutaraldehido

Puede usarse si tratamos el
tejido con hidroborato de sodio
mtodo
1. Desparafinar hasta agua destilada
2. Oxidacin en cido perydico
3. Reactivo de Shiff
4. Lavar en agua sulfurosa
5. Lavar en agua destilada
6. Tincin nuclear

TCNICAS MIXTAS
PAS - ALCIAN BLUE
MUCOPLISACRIDOS NEUTROS
MUCOPOLISACRIDOS CIDOS
Identificacin de cido silico:
o Presentan enlace glicosdico
o Usar cido perydico diludo
o Tiempo corto
o Slo identificamos residuos de cido silico.
Oxidacin selectiva
Se utiliza para diferenciar mucina de tumores colnicos
Precauciones
Corrosivo
Txico
Trabajar con guantes
Frasco oscuro
Refrigerar 2 a 8 C
Almacenamiento