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1. TITULO
MICROPROPAGACION IN VITRO DE PLANTULAS DE PAPAS
NATIVAS (Solanum andigenum L.) EN EL LABORATORIO DE
BIOTECNOLOGIA DE LA CARRERA PROFESIONAL DE
AGRONOMIA UTEA- ABANCAY.
2. INTRODUCCION.
El presente informe de Prcticas Pre-profesionales describe las actividades
realizadas en el laboratorio de Biotecnologa de la Universidad Tecnolgica
de los Andes, realizado desde el 7de octubre del 2013 al 31 de febrero del
2014 para cumplir un requisito acadmico y optar el grado de bachiller en
Agronoma.
Habiendo participado en tareas y actividades propias de la especialidad, tales
como. La micro propagacin in vitro de plntulas, especficamente en la
micro propagacin de plntulas de diferentes variedades de papas nativas,
aspecto que ha permitido aplicar las capacidades asimiladas durante nuestra
formacin en la universidad, bajo condiciones reales de trabajo. Capacidades
que se han afianzado y en algunos casos se han mejorado.
Las prcticas se realizaron mediante la programacin de actividades por
parte del personal encargado del laboratorio de biotecnologa, para que las
ejecute el practicante, con supervisin y gua del mismo.
Se espera que el presente informe de prctica de a conocer en forma clara y
dinmica las experiencias vividas y logros alcanzados.





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3. UBICACIN
3.1.Ubicacin Poltica:
Regin : Apurmac
Provincia : Abancay
Distrito : Abancay
Centro poblado : Las Amricas.
Direccin : Av. Per N 700
3.2.Ubicacin Hidrogrfica.
Cuenca : Apurmac
Sub Cuenca : Mario
3.3.Ubicacin Geogrfica.
Latitud : 133756s
Longitud : 725314w
Altitud : 2414 m.s.n.m.
3.4. Institucin.
La institucin en la que se realiz las prcticas es, en la Universidad
Tecnolgica de los Andes, Carrera Profesional de Agronoma. Entidad a
la que pertenece el laboratorio de Biotecnologa.







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4. OBJETIVOS.
4.1.OBJETIVO GENERAL.
Micropropagar plntulas in vitro de papas nativas (Solanum
andigenum L.) en el laboratorio de biotecnologa de la UTEA.
4.2.OBJETIVOS ESPECIFICOS
Micropropagar plntulas de papa nativas de las variedades Qeqorani,
Yanasuytu, Qachunwaqachi, Amarillo Tumbay, Moro huayro,
Camotillo, Duraznillo.
Reforzar habilidades y destrezas en el manejo de equipos e
instrumental de laboratorio en la micropropagacion invitro de
plntulas de papa.
Adquirir conocimientos adecuados de Biotecnologa Agricola para
utilizarlas en el campo de accin del Ingeniero Agrnomo.
5. METAS.
Las metas planteadas por el periodo de permanencia en el laboratorio de
biotecnologa fueron las que se mencionan a continuacin.
Propagar 1200 plntulas in vitro de variedades nativas las cuales se
conservan como material biolgico dentro del laboratorio.
Mantener los equipos e instrumentos de trabajos limpios y
esterilizados para su uso constante en el laboratorio.
6. REVISION BIBLIOGRAFICA.
6.1.Historia de la Biotecnologa:
Segn, Garca (2002). La biotecnologa no es nueva, sus orgenes se
remontan a los albores de la historia de la humanidad. Nuestros ancestros
primitivos iniciaron, hace miles de aos durante la Edad de Piedra, la
prctica de utilizar organismos vivos y sus productos.
La biotecnologa es un trmino que se ha dado a la evolucin y recientes
avances de la ciencia de la gentica. Esta ciencia se origin hacia finales
del siglo XX con el trabajo de Gregor Johan Mendel.
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"La historia realmente se inicia con las investigaciones de Charles
Darwin, considerado como el padre de la biologa moderna, que
concluy que las especies no son fijas e inalterables, sino que son
capaces de evolucionar a lo largo del tiempo, para producir nuevas
especies. La explicacin de esta evolucin, segn sus observaciones, se
basaba en que los miembros de una determinada especie presentaban
grandes variaciones entre ellos, unos estaban ms acondicionados al
ambiente en que se encontraban que otros, lo que significaba que los ms
aptos produciran ms descendencia que los menos aptos. Este proceso es
conocido como seleccin natural, y supona la modificacin de las
caractersticas de la poblacin, de manera que los rasgos ms fuertes se
mantendran y propagaran, mientras que los menos favorables se haran
menos comunes y acabaran desapareciendo."
6.2.La papa y su conservacin en el Per:
www.peruecologico.com.pe (2012). Refiere que el Per es el pas con
mayor diversidad de papas en el mundo, al contar con 8 especies nativas
domesticadas y 2,301 de las ms de 4,000 variedades que existen en
Latinoamrica. Adems, nuestro pas posee 91 de las 200 especies que
crecen en forma silvestre en casi todo nuestro continente (y que
generalmente no son comestibles).
Segn, lvarez y Repo (1999), el Centro Internacional de la Papa (CIP)
es la institucin encargada de la conservacin cientfica de la papa, y al
mismo tiempo lo hace con otros tubrculos y algunas races. Su labor se
inici en 1,971 y tiene como objetivos reducir la pobreza, aumentar la
sostenibilidad ambiental y ayudar a garantizar la seguridad alimentaria
en las zonas ms pobres y marginadas.
Por ello, con el fin de lograr sus objetivos, el CIP viene desarrollando
tres formas de conservacin in situ de dicho tubrculo:
1) A travs de plantaciones en el campo
2) Con tcnicas de cultivo in vitro
3) Por medio de la conservacin de semillas
El Centro Internacional de la Papa posee el banco gentico de papa ms
grande del mundo, con ms de 5,000 tipos diferentes, entre cultivadas y
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silvestres, y a partir de ellas desarrolla formas mejoradas para un manejo
ms ptimo del recurso, sobre todo, en las regiones de montaa y,
principalmente, en los Andes. En resumen, el CIP cuenta con muestras
de todas las papas cultivadas del mundo y al menos con el 75% de las
especies silvestres.

6.2.1. Clasificacin taxonmica de la papa
Segn, Hawkes, (1990). La papa tiene la clasificacin
taxonmica que se describe a continuacin
Reino : Plantae
Tipo : Spermatophyta
Clase : Angiosperma
Subclase : Dicotiledoneas
Orden : Tubiflorineas
Familia : Solanaceae
Gnero : Solanum
Especie : tuberosum
Nombre Cientfico : Solanum tuberosum
Nombre Vulgar : Papa, patata, etc.
6.2.2. Descripcin botnica:
Harris, (1978) sostiene que la papa, pertenece a la familia
Solanaceae, cuyo nombre cientfico es Solanum tuberosum. Es
una planta herbcea, vivaz, dicotilednea, provista de un sistema
areo y otro subterrneo de naturaleza rizomatosa del cual se
originan los tubrculos.
-Races: son fibrosas, muy ramificadas, finas y largas. Las races
tienen un dbil poder de penetracin y slo adquieren un buen
desarrollo en un suelo mullido.
-Tallos: son areos, gruesos, fuertes y angulosos, siendo a los
principios erguidos y con el tiempo se van extendiendo hacia el
suelo. Los tallos se originan en la yerma del tubrculo, siendo su
altura variable entre 0.5 y 1 metro. Son de color verde pardo
debido a los pigmentos antocimicos asociados a la clorofila,
estando presentes en todo el tallo.
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-Rizomas: son tallos subterrneos de los que surgen las races
adventicias. Los rizomas producen unos hinchamientos
denominados tubrculos, siendo stos ovales o redondeados.
-Tubrculos: son los rganos comestibles de la patata. Estn
formados por tejido parenquimtico, donde se acumulan las
reservas de almidn. En las axilas del tubrculo se sitan las
yemas de crecimiento llamadas ojos, dispuestas en espiral
sobre la superficie del tubrculo.
-Hojas: son compuestas, imparipinnadas y con foliolos
primarios, secundarios e intercalares. La nerviacin de las hojas
es reticulada, con una densidad mayor en los nervios y en los
bordes del limbo.
-Inflorescencias: son cimosas, estn situadas en la extremidad
del tallo y sostenidas por un escapo floral. Es una planta
autgama, siendo su androesterilidad muy frecuente, a causa del
aborto de los estambres o del polen segn las condiciones
climticas. Las flores tienen la corola rotcea gamoptala de
color blanco, rosado, violeta, etc.
-Frutos: en forma de baya redondeada de color verde de 1 a 3 cm
de dimetro, que se tornan amarillos al madurar.
6.3. Introduccin al cultivo in vitro
6.3.1. Generalidades
Segn, Jimenez-Gonzalez (1998a). El cultivo de tejidos vegetales o
cultivo in vitro de tejidos vegetales, es una tcnica de reproduccin en
condiciones totalmente aspticas, en la que a partir de un pequeo
segmento inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles
o millones de plantas genticamente iguales a la planta madre,
cuando a este tejido le es aplicado un estmulo por medio de
variables fsicas y qumicas controladas en un medio de cultivo.
A diferencia de las tcnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa
herramienta permite la propagacin de grandes volmenes de plantas en
menor tiempo; as como el manejo de las mismas en espacios reducidos.
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Por otro lado, la tcnica es de gran utilidad en la obtencin de plantas
libres de patgenos; plantas homocigotos, en la produccin de plantas
en peligro de extincin, en estudios de ingeniera gentica, etc. El
enorme potencial que posee esta metodologa ha propiciado que en los
ltimos 25 aos se haya incrementado el nmero de laboratorios de
cultivo de tejidos en el pas para la produccin comercial de plantas
ornamentales y frutales al lo que ha motivado que algunos floricultores
la estn utilizando como una alternativa viable en sus programas de
produccin.
El cultivo in vitro (trmino que literalmente significa en vidrio), incluye
muchas tcnicas destinadas a introducir, multiplicar y regenerar, entre
otros recursos, material vegetal o animal en condiciones controladas y
aspticas. El cultivo in vitro, constituye un paso fundamental en la
obtencin y regeneracin de plantas genticamente modificadas o
transgnicas, mediante tcnicas de ingeniera gentica. Es decir que
existe una estrecha relacin entre el cultivo de tejidos vegetales y la
biotecnologa moderna. Normalmente se utilizan cultivos de tejidos,
seguido de la regeneracin de la planta completa, y la subsiguiente
expresin de los genes introducidos o transgenes.
6.3.2. Cultivo in vitro de material vegetal
Muoz (2003). Menciona que el cultivo de tejidos vegetales, es una
descripcin genrica que involucra diferentes tcnicas de cultivo de
material vegetal diverso, incluyendo las de protoplastos (clulas
desprovistas de su pared celular), clulas, tejidos, rganos y plantas
completas. Mediante stas y otras tcnicas de cultivo es posible obtener
plantas libres de microbios en un medio nutritivo asptico (estril) en
condiciones ambientales controladas.
Las primeras experiencias relacionadas al cultivo de tejidos vegetales se
remontan a 1902, pero recin en 1922 se logr el primer experimento
exitoso: germinacin in vitro de semillas de orqudeas. Luego de la
germinacin, las plntulas obtenidas se transfirieron a un medio de
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cultivo en condiciones aspticas y as se mantuvieron protegidas del
ataque de patgenos (hongos, virus y bacterias).
Esta tcnica tiene numerosas aplicaciones:
- Propagacin masiva de plantas, especialmente beneficiosa para
especies de difcil propagacin por otros mtodos, o en vas de
extincin.Clonacin de individuos de caractersticas agronmicas
muy deseables durante todo el ao
- Obtencin de plantas libres de virus.
- Produccin de semillas sintticas.
- Conservacin de germoplasma: material de un conjunto de
individuos que representa la variabilidad gentica de una poblacin
vegetal.
- Obtencin de metabolitos secundarios.
- Produccin de nuevos hbridos.
- Mejora gentica de plantas, incluyendo obtencin de plantas
transgnicas.
- Germinacin de semillas.
- Produccin de haploides.
- Estudios fisiolgicos diversos.
6.3.3. Bases biolgicas del cultivo de tejidos, totipotencialidad
celular
Thorpe (1995) afirma respecto del proceso de transformacin vegetal,
existen distintas tcnicas para la transferencia de genes a las clulas
vegetales, siendo las principales la interaccin con bacterias del gnero
Agrobacterium y el mtodo de Biobalstica. Una vez realizada la
transformacin gentica por alguno de estos dos mtodos, el paso
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siguiente es el cultivo in vitro, con el fin de regenerar plntulas a partir
del explanto inicial transformado, proceso que se sustenta en el
principio de totipotencialidad celular. De aqu la importancia del
cultivo in vitro como paso fundamental para la obtencin y
regeneracin de plantas genticamente modificadas.
La reproduccin asexual de plantas por cultivo de tejidos es posible
gracias a que, en general, las clulas de un individuo vegetal poseen
la capacidad necesaria para permitir el crecimiento y el desarrollo de
un nuevo individuo, sin que medie ningn tipo de fusin de clulas
sexuales o gametos.
Esta capacidad se denomina totipotencialidad celular y es
caracterstica de un grupo de clulas vegetales conocidas como clulas
meristemticas, presentes en distintos rganos de la planta.
Bsicamente, la reproduccin asexual se puede realizar debido a que
las clulas vegetales poseen un mecanismo de divisin mittico, al
igual que las clulas animales, mediante el cual cumplen sucesivas
etapas de crecimiento y desarrollo. La divisin celular mittica implica
una replicacin de los cromosomas de las clulas hijas, por lo que las
mismas poseen un genotipo idntico al de la clula madre. La
potencialidad de una clula diferenciada (una clula de conduccin,
epidrmica, etc.) para generar tejidos nuevos y eventualmente un
organismo completo, disminuye con el grado de diferenciacin
alcanzado por esa clula, pero puede revertirse parcial o
completamente segn las condiciones de cultivo a las que se la someta.
As, las clulas vegetales crecidas en condiciones aspticas sobre
medios de cultivo adicionados con hormonas vegetales, pueden
dividirse dando dos tipos de respuesta:
- Una desdiferenciacin celular acompaada de crecimiento
tumoral, que da lugar a una masa de clulas indiferenciadas
denominada callo, la cual bajo las condiciones adecuadas
es capaz de generar rganos o embriones somticos
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(llamados as porque son estructuras similares a un
embrin pero que no se originaron por unin de gametos).
- Una respuesta morfogentica por la cual se forman
directamente rganos (organognesis) o embriones (embriones
somticos).
La primera respuesta se conoce como rgano gnesis o
embriognesis indirecta (mediada por un estado de callo), mientras
que la segunda respuesta se considera organognesis o embriognesis
directa.
Como se coment previamente, el cultivo in vitro consiste en tomar
una porcin de una planta (a la que se denomina explanto, como por
ejemplo el pice, una hoja o segmento de ella, segmento de tallo,
meristemo, embrin, nudo, semilla, antera, etc.) y colocarla en un
medio nutritivo estril (usualmente gelificado, semislido) donde se
regenerar una o muchas plantas.
La formulacin del medio cambia segn se quiera obtener un tejido
desdiferenciado (callo), crecer yemas y races u obtener embriones
somticos para producir semillas artificiales.
Segn, Villalobos y Thorpe (1991). El xito en la propagacin de una
planta depender de lograr la expresin de la potencialidad celular
total, es decir, que algunas clulas recuperen su condicin
meristemtica. Para lograrlo debe inducirse primero la
desdiferenciacin y luego la rediferenciacin celular. Un proceso de
este carcter sucede durante la formacin de las races adventicias en
el enraizamiento de estacas, la formacin de yemas adventicias o
cuando se busca la propagacin de begonias, violeta africana o
peperonias mediante porciones de hojas.
Entre los factores ms importantes a tener en cuenta para lograr la
respuesta morfogentica deseada, es la composicin del medio de
cultivo.
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En todo intento de propagacin vegetal, ya sea in vitro o in vivo, el
carcter del proceso de diferenciacin depende del genoma de la
especie y est regulado por el balance hormonal propio y por el
estado fisiolgico del rgano, tejido o clula puesta en cultivo. Sin
embargo, tambin se sabe que ese balance puede ser modificado por el
agregado de compuestos que imiten la accin de las hormonas
vegetales. Esos compuestos, denominados reguladores del
crecimiento, son los que se emplean en los medios de cultivo para
conseguir la micropropagacin de una planta.
6.3.4. Pasos para generar plantas a partir de explantos
aislados.
Haddad (1994) sostiene que para su aplicacin es necesario ubicar e
identificar las yemas presentes en la planta madre, lo cual permitir que
el sistema sea altamente eficiente. A continuacin se describe de forma
general los pasos a seguir para su aplicacin.
Este proceso incluye varias fases:
FASE 0: Preparacin de la planta madre
FASE I: Establecimiento del cultivo en condiciones de asepsia
FASE II: Multiplicacin de brotes
FASE III: Enraizamiento
FASE IV: Aclimatacin
FASE 0: Preparacin de la planta madre
Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben
obtener explantos con un nivel nutricional y un grado de desarrollo
adecuado.
Para obtener estos explantes es recomendable mantener a las plantas
madre un perodo de tiempo que puede oscilar entre unas semanas o
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varios meses, en un invernadero, en que se va a intentar cultivar la planta
en condiciones sanitarias ptimas y con un control de la nutricin, del
fotoperodo y de la irradiancia recibida.
FASE I: Establecimiento del cultivo en condiciones de asepsia
Una vez escogida la planta madre, se extraern los fragmentos a partir de
los cuales se obtendrn los explantos.
Antes de extraer los explantes se har una desinfeccin de los
fragmentos de planta madre para eliminar los contaminantes externos.
Una vez desinfectado el material vegetal, se debe mantener en
condiciones de asepsia.
Ya en condiciones de asepsia (se trabajar en cabinas de flujo laminar)
se extraern los explantes del material vegetal y se pondrn en cultivo en
un medio de iniciacin dentro de un bote de cultivo, para poder controlar
la sanidad y la viabilidad de los explantes.
FASE II: Multiplicacin de los brotes
Durante esta fase se espera que los explantes que sobre vivieron de la
FASE I originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varios
entrenudos. Peridicamente estos nuevos brotes se deben subcultivar en
un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u
otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la cmara
de flujo laminar.
FASE III: Eleccin de un medio de enraizamiento de los explantos
Para enraizar los explantes se utilizan principalmente dos mtodos:
Enraizamiento in vitro
Se transfieren los brotes obtenidos durante la fase de multiplicacin a un
medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga auxinas.
Esta operacin se realiza en la cmara de flujo laminar. Este mtodo
permite ser mas flexible a la hora de escoger los brotes, ya que stos
obtienen del medio la fuente de energa para enraizar, y por tanto no es
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necesario que tengan las hojas muy bien desarrolladas para realizar la
fotosntesis.
Enraizamiento ex vitro
Los explantes se deben transferir a un sustrato limpio, aunque no
necesariamente estril, que puede ser una mezcla de turba con perlita o
vermiculita.
Con este mtodo es necesario que el medio de enraizamiento est libre
de organismos patgenos y que los brotes tengan las hojas bien
desarrolladas, ya que deben realizar fotosntesis para que la planta tenga
una fuente de energa para enraizar y desarrollarse.
Los explantes deben de plantarse en contenedores cubiertos por un
plstico, para mantener la humedad relativa elevada, y hacerlos enraizar
en el laboratorio, o ponerlos en 'multipots' dentro de un invernadero en
un rea sombreada con "fog-system" o "mist- system".
FASE IV: Aclimatacin de los explantos enraizados
Los explantes recin enraizados son muy sensibles a los cambios
ambientales, de manera que el xito o el fracaso de todo el proceso
dependen de la aclimatacin.
Tanto si los explantes fueron enraizados in vitro como ex vitro, en el
momento en que se extraen los explantes de los recipientes de
enraizamiento estn poco adaptados a crecer en un invernadero, ya que
estos explantes han enraizado y crecido en ambientes con una humedad
relativa muy elevada y generalmente tienen estomas perezosos para
responder al descenso de la humedad relativa, demasiado lentos para
evitar la desecacin del explante.
Los explantes deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del
invernadero disminuyendo progresivamente la humedad relativa e
incrementando progresivamente la intensidad de luz.
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6.3.5. Elementos necesarios para hacer cultivo de tejidos
vegetales
Albarracn (2008), mesiona que para llevar adelante este trabajo se
necesitan equipamientos que generen las condiciones necesarias de
esterilidad como los flujos laminares, que son estaciones de trabajo
que hacen circular aire filtrado y estril, protegiendo as a la muestra
con la que se desea trabajar.
Figura 1. Flujos laminares para el cultivo de
tejidos. Se observa uno de los modelos de flujo
laminar que puede usarse para preservar la
esterilidad de las muestras.



Adems, se necesita un soporte para el explanto, que puede ser
slido o lquido y que est conformado por algn agente
gelificante inerte (agar, gelrite, etc.), macro y micronutrientes
esenciales para la supervivencia de la planta, nutrientes (hidratos de
carbono, vitaminas), agentes reguladores del crecimiento y hormonas
vegetales (ver Tabla 1), que ayudarn a obtener una planta completa o
un rgano vegetal en particular, a partir del explanto elegido (en
condiciones de esterilidad).
Algunos de los elementos mencionados pueden ser reemplazados por
mezclas poco definidas en su composicin (jugo de tomate, agua de
coco, etc.), que pueden dar buenos resultados y generalmente resultan
ms econmicas. La acidez de los medios de cultivo para plantas suele
variar entre pH de 5 y 6.5.
Luego, se regulan las condiciones de temperatura y de fotoperodo
(relacin de horas luz y horas oscuridad).
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Segn sea el balance hormonal y otras condiciones de cultivo se puede
propiciar la regeneracin de distintos rganos o formaciones vegetales.
Por ejemplo, si el balance de citoquininas/auxinas (ver Tabla 1) es
mayor a 1, se favorece la generacin de brotes, si es menor a 1, la
generacin de races, si es igual a 1, la formacin de callos.
Tabla 1. Composicin de medios de cultivo para clulas vegetales.
COMPONENTES CARACTERSTICAS Y EJEMPLOS

Agua destilada

Representa el 95% del medio nutriente


Fuente de carbono

Generalmente se usa sacarosa. La fuente de carbono se necesita
porque los explantos no son completamente auttrofos y no pueden
cubrir sus necesidades con la fotosntesis que pueden realizar in vitro.


Sustancias
inorgnicas

Macroelementos (N, P, K, Ca, Mg, S) y microelementos (Fe, Co, zn, Ni,
B, Al, Mn, Mo, Cu, I), en una proporcin adecuada para la planta
elegida.


Vitaminas

Vitaminas B1, B2, B6, vitamina H, vitamina E, cido flico,
cido nicotnico, entre otras.



Hormonas y
reguladores del
crecimiento

Auxinas: promueven la elongacin celular, la formacin de callos y
races adventicias, inhiben la formacin de brotes axilares adventicios
y, a veces, inhiben la embriognesis.
Citoquininas: promueven la divisin celular, regulan el crecimiento y el
desarrollo de los tejidos vegetales
Otras: giberalinas, cido abscico,
etileno.

Mezclas de sustancias poco
definidas

Ejemplos: extracto de levadura, extractos vegetales.


Materiales inertes

Usados como soporte. Incluyen agar, azarosa, otros polisacridos,
lana de vidrio, papel de filtro, arena.
Adaptada del Libro Biotecnologa, UNQ 2006.



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6.3.6. RELACIN DEL CULTIVO IN VITRO CON LA
BIOTECNOLOGA
6.3.6.1. La Micropropagacin
Segn, Villalobos y Thorpe (1991). La propagacin de plantas in
vitro es una tcnica de la biotecnologa muy utilizada en
cultivos de importancia econmica. Como fue mencionado
anteriormente permite cultivar clulas, tejidos, rganos,
semillas, embriones y obtener individuos selectos en forma
rpida. Los cultivos son realizados por personal especializado,
con agentes especficos (hormonas, minerales, vitaminas, fuente
de carbono, agente gelificante, agua, etc.) y en condiciones
ambientales controladas (temperatura, humedad y luz) (figura 6).
Una vez ajustados los protocolos para la especie o cultivo de
inters, es posible automatizar el proceso de modo de llevarlo a
escala industrial.
La micropropagacin (propagacin clonal por cultivo in vitro)
constituye uno de los mtodos biotecnolgicos que mayores
logros ha aportado al desarrollo de la agricultura. Se aplica en la
produccin masiva de especies hortcolas, aromticas,
medicinales, frutcolas, ornamentales y forestales.
6.3.6.2.Ventajas de la micropropagacin
Meja (1994). Mensiona las siguientes ventajas:
- Posibilita incrementar rpidamente nuevos materiales.
- Permite controlar las condiciones ambientales.
- Permite estudiar diversos procesos fisiolgicos.
- Evita el riesgo de que proliferen agentes patgenos (se
realiza en medios esterilizados).
- Se pueden obtener gran cantidad de individuos en espacios
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reducidos.
- Permite la obtencin de individuos uniformes.
- Facilita el transporte del material.
Figura 2. La micropropagacin vegetal. A
partir de una planta madre se obtienen
numerosos explantos que sujetos a condiciones
y medios de cultivo adecuados, darn lugar a
nuevas plantas iguales o similares a la planta
original, permitiendo su multiplicacin.
Adaptado de Biotecnologa, UNQ 2006.

6.3.6.3.Desventajas del cultivo invitro.
Meja (1994) indica que se requiere de personal especializado, se
requiere infraestructura y equipos especiales, La adquisicin de
productos qumicos es costosa y difcil especialmente en pases con
pocos recursos, Difcil de instalar laboratorios in vitro donde no
exista fluido elctrico, la escasa literatura relacionada al cultivo in
vitro de especies forestales, difcil respuesta inicial de algunas
especies o genotipos.
Gonzales, (1998). Afirma que generalmente se requiere de 1 a 1.5
aos para adecuar las condiciones a cada especie o genotipo. Los
problemas que presenta el cultivo in vitro es: la contaminacin es
grave y vitrificacin es una reaccin de las plantas que las hace
adquirir apariencia de vidrio. La nica solucin es hacer un
subcultivo de material sano, es decir, se saca y se cortan los trocitos
que estn bien.

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6.3.6.4.Cultivo de meristemos
Segun, Jimenez-Gonzales (1998b). En la yema apical se
encuentra un grupo de clulas que conforman el meristemo
apical (con un tamao entre 0.01 y 0.3 mm). Es un tejido
embrionario que tiene la capacidad de formar todos los tejidos de la
planta y regenerar plantas completas.




Figura 3. Cultivo de meristemos. A partir de un meristemo aislado se
puede obtener una planta completa. Adaptado de Biotecnologa, UNQ
2006.
El cultivo de meristemos tiene numerosas aplicaciones. Una de las
ms importantes es la obtencin de plantas libres de virus, ya que
esta pequea zona de tejido generalmente no est afectada por estos
patgenos vegetales. Otra aplicacin es la multiplicacin vegetal de
enorme potencial. A partir de una yema apical se pueden obtener 4
millones de claveles en un ao.
La tcnica permite multiplicar especies de plantas con reproduccin
lenta o dificultosa (como las orqudeas) o acelerar la produccin de
plantas bianuales.





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6.3.7. CULTIVO DE CLULAS Y RGANOS
VEGETALES EN BIORREACTORES
Radice, Silva (2004), sostiene que una vez obtenidos los callos a partir
de algn explanto, los mismos pueden disgregarse para obtener una
suspensin de clulas. La misma puede utilizarse para generar
embriones somticos (la base de las semillas sintticas) o puede
directamente cultivarse para producir metabolitos secundarios, que son
compuestos qumicos sintetizados por las clulas vegetales en
determinadas condiciones, con gran utilidad para las industrias
farmacutica y alimenticia, entre otras. Por ejemplo, son metabolitos
secundarios el mentol y las drogas anticancergenos vincristina y taxol,
algunos edulcorantes, entre otros. Los cultivos celulares se llevan a
cabo en biorreactores, que son recipientes de distinta capacidad (de
unos pocos a miles de litros) diseados para propiciar el
crecimiento y/o la multiplicacin de distinto tipo de clulas y/u rganos
.Figura 4. Cultivo de clulas y rganos vegetales. A partir de un explanto se pueden
establecer cultivos de clulas para producir compuestos de inters o para obtener
embriones somticos y semillas artificiales, entre mltiples aplicaciones. Adaptado de
Biotecnologa-UNQ, 2006.
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Las races vegetales tambin pueden ser cultivadas en biorreactores,
especialmente aquellas transformadas por Agrobacterium rhizogenes,
que producen un aumento abrupto en el tamao y ramificacin de la
raz, aumentando as la biomasa, y por ende la cantidad de producto
deseado. Un ejemplo de compuesto farmacolgico producido por
cultivo de races es el paclitaxel o taxol, que es utilizado como
anticancergeno.
6.3.8. ASPECTOS RELEVANTES EN EL CULTIVO IN
VITRO
Segn, Meja (1994). El cultivo in vitro es muy costoso, entre otros
detalles porque no se puede mecanizar. Slo son rentables aquellos
laboratorios grandes y con mercado.
La planta ya desarrollada en el cultivo in vitro necesita una primera
aclimatacin en el laboratorio; en el invernadero y despus una segunda
aclimatacin en el campo. Los viveros grandes realizan ambas
operaciones; otros slo se encargan del primer paso.

Figura 5. Fase de
aclimatacin en
invernadero


6.3.8.1.Aplicaciones prcticas en el cultivo in vitro
Hurtado (1994). Mensiona que:
Propagacin vegetativa. Esto es lo ms prctico. Dos tcnicas:
- Micropropagacin de estaquillas
- Organognesis de callos
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Produccin de plantas libres de virus mediante dos tcnicas:
- Cultivo de meristemos
- Microinjerto in vitro
Permite hacer germinar semillas que son muy difcil de hacer
en condiciones normales.
Ejemplo: algunas Orqudeas tienen en los campos unos
parsitos obligados y en viveros no se pueden reproducir; se
inoculan esos parsitos o in vitro.
Eliminar la inhibicin de germinacin de las semillas. El
cultivo in vitro es lo ms eficaz porque tiene determinados
inhibidores y algunos huesos de frutales no son capaces de
germinar ya que no tiene desarrollado el embrin.
Prevencin del aborto embrionario como resultado de
incompatibilidad. Se da en cruces de inters cientfico o
intergenticos, sobre todo en plantas herbceas. Los cruces
incompatibles dan abortos.
Aplicacin en mejora gentica para obtener hbridos, para
introducir material gentico, etc.
Acortar los ciclos de mejora gentica. No hay que esperar
que pase el periodo juvenil del rbol para ver resultados.
Produccin de haploides. Cruzamientos o cultivo de polen
(anteras). Teniendo ventajas como la obtencin rpida
de homocigotos y produccin de hbridos.
6.3.9. Equipo y material necesario empleado en el cultivo in
vitro
- Autoclave
- Cmara de flujo laminar
- Medio de cultivo
22

- Planta
- Cmara de cultivo
Figura 6. Autoclave
Para esterilizar todo lo que vamos a
utilizar: agua, algunos nutrientes,
material, etc. se utiliza la olla
autoclave. No se pueden meter
proteinas. Es como una olla a presin,
pero de mayor tamao, donde se controla la presin y la temperatura
(hasta 120).
Figura 7. Cmara de flujo
laminar.
La cmara de flujo
laminar es donde se
realizan todas las
manipulaciones con la planta. Es un habitculo con un operario en un
ambiente estril. Se usan rayos ultravioletas para esterilizar el aire.
Figura 8. Medio de cultivo.
Se verte agua y nutrientes (hormonas) en un
tubo de ensayo, que se tapa con un tapn.
Dependiendo del material que se va a propagar, el
tubo se pone vertical o un poco inclinado.
Figura 9. Planta.
El material vegetal de partida puede ser del
campo, pero esto conlleva un alto riesgo de
enfermedades y contaminacin, aunque se lave mucho y bien. Lo ms
corriente es utilizar brotes que crecen en condiciones controlada para
que haya menos infecciones.

23

Figura 10. Cmara de cultivo.
La cmara de cultivo es una habitacin de
dimensiones muy variables, en la que se
controlan las condiciones de luz, temperatura,
humedad, variacin da-noche, etc.

6.3.10. Condiciones del cultivo in vitro
Gonzales y Vilca (1998). Sostienen que:
- En la cmara de flujo laminar no puede entrar material
contaminado. El problema ms importante en todo el proceso del
cultivo in vitro son las contaminaciones.
- En el autoclave no se pueden meter determinadas sustancias,
como vitaminas, antibiticos, cido giberlico, sacarosa,
encimas, extractos vegetales, etc., ni tampoco recipientes que no
soporten altas temperaturas.
- El vidrio ha de ser de muy buena calidad para que no suministre
al medio sustancias contaminantes para la planta. Normalmente
se prepara el medio y se filtra directamente. El problema es que
se absorben en el filtro determinadas sustancias.
- Los reguladores de crecimiento (hormonas) son imprescindibles,
ya que sin ellos no se puede hacer el medio de cultivo.
- El pH ideal es 6, pero puede oscilar entre 5.5 y 6.5.
- Se necesita agar y medio slido 0.6 0.9%.
- El medio de cultivo realmente slo tiene que llevar agua, fuente
de energa (azcares) y reguladores de crecimiento.
- El medio de cultivo es secreto, y se pueden tardar dos aos en
prepararlo.
24

- En la cmara de cultivo se aplican cantidades variables de luz
(16-20 horas). Tambin existen plantas que se desarrollan en la
oscuridad. Las temperaturas tambin varan. Lo normal son 22-
26C, aunque en ocasiones se exigen fros de 4C y tambin 28-
30C para plantas tropicales.
- Igualmente, en el xito de esta tcnica de propagacin tambin
influyen determinadas caractersticas de la planta, como el tipo,
gentica e incluso el tipo de implante, parte ms juvenil o ms
adulta.
- En cuanto a los recipientes, deben permitir el intercambio de
gases, pero evitar la prdida de agua, lo que provocara un
aumento de la concentracin de sales, y por tanto la muerte de la
planta. De ah la importancia del cierre.
6.3.11. Subcultivos o replicado
Gonzales y Vilca (1998). Refieren que cuando sembramos
microestaquillas en cultivo in vitro, no nos interesa que se emitan races
ni hojas, sino que se produzca una proliferacin (crecimiento) para
obtener nuevas microestaquillas. Son lo que se denominan subcultivos.
No se pueden hacer infinitamente ya que se agota el material vegetal; tan
slo se hace 8-10 veces.
Ocurre entonces lo siguiente:
- El medio nutritivo se agota y se seca.
- El material vegetal ocupa todo el tubo.
- Se produce un cambio de olor en el medio (sustancias txicas).
- El medio se hace lquido.
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6.3.12. Fases del cultivo de meristemos
Segn, Gonzales y Vilca (1998). Consta de las siguientes fases:
1. Toma un pice meristemtico (0,2-1 mm).
2. Siembra en el medio de la magenta.
3. Fase de proliferacin: crecimiento de brotes. Subcultivos.
4. Fase de enraizamiento (cambiar el medio).
5. Primera fase de aclimatacin. Es muy importante el que la planta pueda
llegar o no al campo. Invernaderos, bolsas de plstico, bandejas de vidrio,
etc.
6. Segunda fase de aclimatacin. Siempre en invernadero.
7. Plantacin en el campo.
6.3.13. Fases del cultivo de embriones
Se utiliza mucho en manzano.
1. Se desinfecta el fruto en alcohol. Se flamea.
2. Se coge el embrin de la semilla.
3. Se inocula en el tubo.
4. A las 1-2 semanas, la planta est ms o menos reconocible.
5. Se deja crecer y se pasa por las fases de aclimatacin.




26

6.3.14. Micropropagacin
Figura 11. Se parte de una yema, brctea o axilar y se empieza a desarrollar
en el medio de cultivo.
Entre la fase de proliferacin y de enraizamiento hay muchos
subcultivos (para obtener ms plantas).
El nmero de subcultivos depende del material vegetal:
Ejemplo de micropropagacin de Kiwi.
- Se parte de un trozo de tallo.
- Al cabo de 4 semanas se obtiene una yema y crece un brote.
- En la fase de proliferacin intentamos obtener gran cantidad de brotes.
- Sacamos microestaquillas del primer brote, haciendo subcultivos cada 6-8
semanas hasta llenar el vidrio.
- Al aumentar la concentracin de auxinas se obtienen plantas enraizadas.
- Puede hacerse de forma industrial y la fase de enraizamiento se hace en vivo.
6.3.15. Cultivo de callo in vitro
Segn, Liu (1981). Se parte de un trozo de hoja o de tallo, bien de una planta
madre de maceta o de una planta que viene de cultivo in vitro. El medio puede
ser slido o lquido.
Se forma entonces una estructura de callo, de la que parten brotes, o tambin
proembriones, que al unirse forman una estructura similar al embrin. A partir de
entonces se desarrolla normalmente.
6.3.16. Obtencin de plantas haploides
Albarracn, (2008). Refiere que normalmente se trabaja con la antera en su
totalidad, no con granos de polen en particular. No se riega nunca por aspersin
(riesgo de patgenos), siempre con regadera.
De una yema de flor se coge una antera antes de que se abra y se hace un
27

cultivo; bien por embriognesis u organognesis.
- Embriognesis: se forman clulas (poliembriones).
- Organognesis: se forma una estructura de callo que puede venir o bien
de tejidos de la antera (diploide), o bien del grano de polen (haploide).
6.3.17. Problemas en el cultivo in vitro
Figura 16. Contaminacin grave.
Gonzales y Vilca (1998). Sostiene que la vitrificacin, es una
reaccin de las plantas que las hace adquirir apariencia de
vidrio. La nica solucin es hacer un subcultivo de material
sano, es decir, se saca y se cortan los trocitos que estn bien.
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7. MATERIALES y EQUIPOS
1. Material Vegetal
Plntulas de papa in vitro de 1 - 3 meses de edad, entre ellas tenemos
las variedades como: qeqorani, yanasuytu, qachunwaqachi, amarillo
tumbay, moro huayro, camotillo, duraznillo.
2. Material de laboratorio.
Magentas, mecheros, bandejas de plstico, pinzas, bistur, tubos de
ensayo, servilletas desechables de papel, placas Petri, cintas plsticas,
marcador permanente, papel alumino.
3. Equipos
Agitador magntico, autoclave, balanza analtica, cmara de flujo
laminar, cmara de cultivo, cmara fotogrfica, destilador, termmetro
de mxima y mnima, pH-metro.
4. Reactivos
Medio basal Murashige & Skoog mixture (MS), agar ash2 -4%, agua
destilada, alcohol al 96C, cloro comercial, hidrxido de sodio, etanol.

















29

8. METODO.
Para la micropropagacion se us el mtodo de crecimiento mnimo in vitro,
que es uno de los ms utilizados y constituye una alternativa de las tcnicas
del cultivo de tejidos para mantener plntulas en mejores condiciones
sanitarias.
Mediante esta tcnica se obtiene un estricto control sobre plagas y
enfermedades al encontrarse el material confinado en un microambiente
asptico, tambin el sistema ocupa muy poco espacio y al propagarse
clonalmente permite el mantenimiento del genotipo.
9. LABORES REALIZADAS.
9.1.RECONOCIMIENTO DE MATERIALES DE LABORATORIO.
MATERIALES
Lapicero
Hojas
Cuaderno
Lapiz
PROCEDIMIENTOS
Se observo a los siguientes materiales:
Autoclave.
Balanza Analtica.
Pipetas.
Buretas.
Vasos de precipitacin
Probetas 25 y 50 ml.
Cepillos de lavado de tubos.
Agitador magntico para disolver medios de cultivo.
Magentas de vidrio.
Tubos de ensayo.
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Botellas con tapa rosca.
Refrigerador.
pH - metro.
Autoclave de presin para la esterilizacin a vapor.
Camara de flujo laminar.
Mechero bunsen para flamear las pinzas y bisturs.
Pinzas de puntas finas para la sujeccin de los tejidos en el corte con el
bistur.
Bisturs para el corte del tejido.
Agujas finas para separas meristemas.
Microscopio binocular.
9.2. LAVADO DE MATERIALES DE VIDRIO Y PLASTICO DEL
LABORATORIO.
MATERIALES.
Para realizar el lavado de los materiales de vidrio en el laboratorio debemos
contar con detergente, jabn, rascabuches o cepillo de tubos de ensayo, agua,
etc.
PROCEDIMIENTO.
El lavado de los materiales se realiz usando la esponja con jabn o
detergente, siendo necesaria la utilizacin de una corriente de agua y un
balde para el enjuague. Se lavaron los materiales de vidrio, las Magentas,
Tubos de ensayo, Vasos de precipitacin, Erlenmeyer, etc.
9.3. ASEPSIA DEL LABORATORIO MATERIALES
Hipoclorito de sodio
Alcohol
Algodn.
Detergente y jabn.
Agua.
Etc.
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En el laboratorio de cultivos In vitro, la asepsia es muy importante y se
realiz de la siguiente manera:
PROCEDIMIENTO
Se realizo una limpieza general de las salas de esterilizacin, sala de
micropropagacion y sala de crecimiento, con el uso del detergente en agua,
jabn en agua, y el uso final de hipoclorito de sodio.
Se realiz la limpieza de las repisas, pisos, ventanas, estantes, etc.
La importancia de este mtodo radica en que:
Una buena asepsia conlleva al xito del crecimiento de las plntulas.
La asepsia reside principalmente en mantener el ambiente libre de
microorganismos patogenos.
Al ingresar al laboratorio se debe de usar guardapolvo para as evitar que
contaminemos el medio o la sala.
La limpieza de mesas y repisas se realiza utilizando algodn empapado con
alcohol e hipoclorito de sodio para as dejar el medio libre de contaminantes
en la repisa.
9.4. ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO, PLACAS
PETRI, MAGENTAS, PINZAS, BISTURI, AGUA.
La esterilizacin tanto del material de vidrio, material de plstico y medios
de cultivo es un proceso esencial en todo laboratorio de cultivo In vitro.
MATERIALES
Autoclave.
PROCEDIMIENTO
Los materiales se ponen dentro del autoclave en bolsas de polipropileno y
dejamos que se incremente la temperatura hasta llegar a los 300 grados
centgrados durante 15 min. Esta olla autoclave cuenta con un termostato
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que regulara la temperatura y un reloj que indicara la presin a la que se
encuentra en el interior.
EL AUTOCLAVE
Es un instrumento habitual en los laboratorios, En esencia el autoclave es un
recipiente en el cual se consigue exponer a los materiales a una alta
temperatura, superiores a la de la ebullicin del agua gracias al aumento de
la presin.
Debemos recordar que para la esterilizacin debemos de mantener un nivel
con agua destilada dentro del autoclave antes de llenar los materiales y
medios de esterilizacin y luego asegurar el equipo para no dejar salir el
vapor de agua. Siendo esta prctica necesaria solo cuando la temperatura
sobrepasa la adecuada. Entonces haremos necesaria la utilizacin de la
vlvula del purgado.
FUNCIONAMIENTO
FASE DE PURGADO: A medida que la energa calienta el agua del fondo
del cardern, se va produciendo vapor que desplaza el aire, haciendo salir por
la vlvula de purgado este vapor caliente. Esta fase termina cuando alcanza
la temperatura adecuada de esterilizacin,
FASE DE ESTERILIZACION: Una ves cerrada la vlvula de purgado y
alcanzada la temperatura adecuada se inicia el proceso de esterilizacin,
FASE DE DESCARGA: Llegado la temperatura de esterilizacin
controlamos 15 minutos para luego apagar el autoclave. Dejamos durante
dos horas para luego abrir la tapa y sacar todo el material del recipiente
autoclave y llevarlos al cuarto de micropropagacion.
9.5. ASEPSIA DE LA CAMARA DE FLUJO LAMINAR
MATERIALES
Buena parte de las manipulaciones propias del cultivo In vitro debe
realizarse en condiciones de esterilidad total para as evitar la contaminacin
33

de los materiales propagadas. Y para evitar esto haremos uso de la cmara de
flujo laminar.
PROCEDIMIENTO
La esterilidad de la cmara de flujo laminar se consigue por que circula en su
interior, aire puro y no deja ingresar aire de afuera de la cmara, para la total
esterilizacin se logro con una desinfeccin previa con papel toalla
empapada con alcohol.
9.6. DESTILACION DE AGUA
MATERIALES
Destilador de agua.
PROCEDIMIENTO
La destilacin del agua se lleva a cabo gracias a un destilador de agua que
viene equipado con todo lo necesario que calienta el agua contaminada y
deja salir solo el vapor de agua libre de todo contaminante. Que al pasar por
al destilador se enfria y deja caer gotas de agua destilada a un frasco
definitivo.
9.7. MICROPROPAGACION DE PAPA
MATERIALES
Placas petri esterilizadas.
Bisturs.
Pinzas,
Cmara de flujo laminar
Magentas con plantitas de papa en crecimiento
Materiales de desinfeccin.
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PROCEDIMIENTO DE MICROPROPAGACION
Esterilizar placas Petri (colocadas en bolsas) y preparar la cmara de
flojo laminar desinfectando con alcohol las superficies internas.
Esterilizar los instrumentos con la ayuda del mechero y colocarlos
sobre una placa Petri.
Destapar la magenta, extraer la planta y colocarla sobre la placa Petri
con la ayuda de una pinza y el bistur.
Extraer las hojas y cortar los nudos.
Destapar una magenta con medio fresco esteril y colocar los nudos en
su interior, tratando de hundirlo ligeramente en el medio y con la
yema hacia arriba.
Tapar el frasco.
Sellar la magenta con cintas plsticas y rotularlo correctamente.
trasladar los frascos a la sala de de incubacin.
Siguiendo los mismos pasos se micropropag 1200 plantas de papa entre las
variendades Qeqorani, Yanasuytu, Qachunwaqachi, Amarillo Tumbay, Moro
Huayro, Camotillo y Duraznillo.
Esquema del proceso de la micropropagacion de plntulas de papa.
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9.8. EVALUACION VISUAL DE CONTAMINACION DE MEDIOS
DE CULTIVO Y PLANTAS IN VITRO
MATERIALES
Papel
Lapicero
PROCEDIMIENTO
Con la ayuda visula se realiz la evaluacin de los medios y plntulas de
papa micropropagadas, encontrndose muy pocos magentas contaminados
pero un alto porcentaje de magentas con plntulas sanas y con crecimiento
rpido de las yemas.













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10. RESULTADOS.
Se propago 1200 plantulas de papas nativas entre las variedades
(qeqorani, yanasuytu, qachunwaqachi, amarillo tumbay, moro
huayro, camotillo, duraznillo), que servir como material biolgico
para la conservacin y propagacin de estas variedades, que se
muestran en el cuadro con sus cantidades correspondientes.

VARIEDADES CANTIDADES MICROPROPAGADAS
Qeqorani
200 plantulas
Yanasuytu
250 plantulas
Qachunwaqachi
200 plantulas
Amarillo tumbay
100 plantulas
Morohuayro
300 plantulas
Camotillo
100 plantulas
Duraznillo
50 plantulas
Total
1200 plantulas

se logro mantener en optimas condiciones de asepsia tanto el
ambiente del laboratorio como de los equipos y materiales, para lo
cual se realizaba la desinfeccin y/o esterilizacin inmediatamente
despus de su uso.




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11. CONCLUSIONES.
Las prcticas realizadas en el laboratorio de Biotecnologa de la
UTEA, me permitieron reforzar conocimientos, habilidades y
destrezas en el manejo de equipos, instrumentos y principalmente
conocer y aplicar mtodos de micropropagacion in vitro de papas
nativas que servirn como material de conservacin y propagacin de
las diferentes variedades micropropagadas.
El cultivo in vitro es una tecnologa que nos brinda muchas
oportunidades en la micropropagacin de plantas, en especial en
producir plantas madres optimas para su propagacin, ya que cuenta
con un control estricto para su propagacin.























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12. RECOMENDACIONES.
Se recomienda a los alumnos de Agronoma realizar prcticas en el
Laboratorio de Biotecnologa de la UTEA, ya que es importante tener
una visin integral de la carrera para llegar a ser mejores
profesionales.
La UTEA debiera destinar un mayor presupuesto al Laboratorio de
Biotecnologia ya que es fundamental ampliar el laboratorio e
implementarlo con el material necesario para poder recibir mayor
cantidad de alumnos de todas las carreras.

























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13. BIBLIOGRAFIA.
1. Albarracn, H. 2008. Mdulo de Trabajo Mtodos Biotecnolgicos.
UNIVERSIDAD PRIVADA JOSE CARLOS MARIATEGUI,
Moquegua-Per. 73 pp.
2. Alvarez, M. y Repo, C., 1999. Desarrollo de Productos de Papas
Nativas. Centro Internacional de la Papa. Lima, Per.
3. Garca Noguera, N. (2002), Biotecnologa. Especialista Derecho
Nuevas Tecnologas.
4. Gonzales C. y Vilca J. 1998. Micropropacin Vegetativa In Vitro De
Aliso (Alnus acuminata). Edicin Graficas de ADEFOR. Cajamarca
Per. Pginas 6-13.
5. Haddad O. (1994). CIEN BTA-03: a new somaclonal variant
resistant to yellow sigatoka. Biochemical, genetic and molecular
characterization and agronomic studies. INFOMUSA, Vol 10: 12-13.
6. Harris, P. M., ed 1978. El cultivo de la papa. Londres: Chapmam y
Hall.
7. Hawkes, J. G., 1990 La papa: Evolucin, la biodiversidad y los
recursos genticos. Belhaven Press, Oxford, Inglaterra / Smithsonian
Institution Press, Washington, DC 259 pp
8. Hurtado, M. D. V. y Merino, M. 1994. Cultivo de Tejidos Vegetales.
3 reimpresin 232 p. Editorial Trillas. Mexico, Argentina, Espaa,
Colombia, Puerto Rico, Venezuela.
9. Jimnez-Gonzalez, A. E., 1998a. generalidades del cultivo invitro.
In: Perz Ponce, JN. (Ed.) Propagacin y Mejora gentica de plantas
por biotecnologa. Instituto de Biotecnologa de las Plantas, Cuba.
12-42 pp.
10. Jimnez-Gonzalez, AE. 1998b. Cultivo de pices y Meristemos. In:
Perz Ponce, JN. (Ed.) Propagacin y Mejora gentica de plantas por
biotecnologa. Instituto de Biotecnologa de las Plantas, Cuba. 45-65
pp.
11. Liu, M. C. 1981. In vitro methods applied to sugar cane
improvement. In plant tissue culture methods and application in
agriculture. Ed. By T. A. Thorpe. New York. Academic Press. P.
299-323.
40

12. Meja, R. y Vittorelli, C. 1988. Manual de Laboratorio - Cultivo in
vitro. INIAA (Sector Agrario).
13. Muoz, S. 2003. Embriognesis somtica en cedro (Cedrela odorata
Linnaeus) a partir de cotiledones. Tesis de pre-grado, Universidad
Nacional Agraria La Molina, Facultad de Ciencias, La Molina,
departamento de Lima, Per. 111 pp.
14. Radice, Silva (2004) Morfognesis in vitro. Parte II Herramientas
Bsicas de la Biotecnologa y Mejoramiento Vegetal. En: Echenique,
V; Rubinstein C y Mroginski L (eds.). Biotecnologa y Mejoramiento
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16. Villalobos, V y Thorpe T (1991) Micropropagacin: conceptos,
metodologas y resultados. En: Cultivo de tejidos en la agricultura.
Fundamentos y aplicaciones. (Ed): Centro Internacional de
Agricultura Tropical (CIAT), Cali, Colombia, pp. 128 - 141.
17. www.peruecologico.com.pe/tub_papa.htm 2012.










41

14. ANEXOS.
FOTOGRAFIAS.
LABORES REALIZADAS EN EL LABORATORIO DE
BIOTECNOLOGA.
Fot. 01 Extraccion de plntulas de la magenta a la placa Petri para su diseccion.
Fot. 02. diseccion de nudos e introduccin en el medio de cultivo solido.


42

Fot. 03. Introduccin de nudos al medio de cultivo.

Fot. 04 y 05. Evaluacin de los cultivos in vitro de papa

43

Fot. 06 y 07 Esterilizacin de medios de cultivo