INTRODUCCIN

U no de los m ayores avances

de la m edicina actual es la com -
prensin de la base m olecular de
un gran nm ero de enferm eda-
des genticas. El uso de esta in-
form acin m ejora los m todos de
diagnstico y abre una nueva va
para su tratam iento potencial.
LA INFORMACIN
GENTICA
El A D N (cido desoxirribo-
nucleico) contiene la inform a-
cin que determ ina la com po-
sicin de las protenas estruc-
turales, reguladoras, as com o
de factores que intervienen en
el crecim iento, desarrollo y di-
ferenciacin celular. En las c-
lulas eucariotas, el A D N se en-
cuentra m ayoritariam ente en el
ncleo, d entro d e los crom o-
som as. En las clulas som ti-
cas, se encuentran 46 crom o-
som as en form a de 23 pares de
hom logos (dotacin diploide
2n); 22 pares son autosom as y
un par de crom osom as sexua-
les. En las clulas germ inales
slo existe un crom osom a de
cada par (dotacin haploide n).
C ada par de crom osom as ho-
m logos posee caractersticas
m orfolgicas parecidas y sus
g enes contienen inform acin
p ara los m ism os caracteres,
aunque esta inform acin pue-
de ser distinta, ya que uno tie-
ne origen paterno y otro m ater-
no.
Estructura del ADN
787
Bases moleculares de las enfermedades genticas.
Aproximacin a la patologa molecular
El poder actual de las tcnicas m oleculares est proporcionando un flujo casi constante de
nueva inform acin, lo que perm ite el conocim iento progresivo de las bases m oleculares de la
variabilidad gentica y la enferm edad. El propsito de este artculo es la revisin del
conocim iento actual de las bases m oleculares de las enferm edades genticas
(crom osm icas, m onognicas y m ultifactoriales). Se describe la naturaleza de las
m utaciones y sus consecuencias, con especial nfasis en las enferm edades m onognicas.
Se enum eran los tipos de estudios genticos disponibles y se exponen sus caractersticas y
aplicaciones. El uso progresivo de estos estudios en la clnica diaria hace necesario para el
pediatra el conocim iento de sus im plicaciones diagnsticas y lim itaciones.
B ase m olecular de la enferm edad; M utacin; Estudio gentico.
C O N C EPT A N D M ETH O D S FO R TH E D IA G N O SIS O F PA TIEN TS W ITH C O N G EN ITA L
M A LFO R M A TIO N S
The pow er of current m olecular techniques is providing a vast am ount of new inform ation w hich
allow s the progressive understanding of the m olecular bases of genetic variation and disease.
The purpose of this review is to provide inform ation about the current know ledge of the
m olecular bases of hum an genetic diseases (chrom osom al, m onogenic and m ultifactorial). The
nature of m utations and their consequences are described, focusing on single-gene disorders.
A vailable genetic tests are review ed, describing their characteristics and applications. Since
these testing m ethods are increasing used in the daily clinical practice, it is necessary for the
pediatrician the know ledge of their diagnostic im plications and lim itations.
M olecular basis of disease; M utation; G enetic test.
E. G uilln N avarro
Servicio de Pediatra. H ospital U niversitario Virgen de la Arrixaca. M urcia.
Resumen
El AD N , m olcula que con-
tiene la inform acin gentica,
se encuentra m ayoritariam en-
te en los crom osom as del n-
cleo de las clulas.
Palabras clave
Abstract
Key words
Pediatr Integral 2002;6(9):787-794.
El A D N est form ado por
dos cadenas com plem entarias
de nucletidos con estructura
en doble hlice.
El ADN es una m olcula for-
m ada por dos cadenas de de-
soxirribonucletidos (base ni-
trogenada, pentosa y cido fos-
frico) unidos covalentem ente,
orientadas en sentido opuesto y
enrolladas alrededor de un eje.
Esta estructura en hlice fue des-
crita en 1953 por W atson y C rick.
Existen cuatro tipos de desoxi-
rribonucletidos, que difieren en-
tre s por la base nitrogenada.
Las bases caractersticas del
A D N son las purinas: adenina
(A) y guanina (G); y las pirim id-
nicas: citosina (C) y tim ina (T).
Las bases se enfrentan espec-
ficam ente en las cadenas opues-
tas; una A se enfrenta siem pre
con una T y una G siem pre con
una C . A este par especfico se
le llam a par de bases (pb) de
A D N . La secuencia de nucleti-
dos de una cadena determ ina la
secuencia de la otra (secuencias
com plem entarias).
U na m olcula de A D N se re-
plica tras la separacin de sus
dos cadenas y la sntesis, por
una serie de enzim as, de dos
nuevas cadenas com plem enta-
rias a partir de las cadenas ori-
ginales que sirven de m olde. La
com plem entariedad de las ba-
ses tam bin perm ite la repara-
cin correcta y eficiente de las
m olculas de A D N daadas.
Flujo de informacin
gentica
La secuencia de bases de un
fragm ento de A D N o gen deter-
m ina la secuencia de am inoci-
dos de una protena. Para tradu-
cir la inform acin gentica en una
protena, la cadena reversa de un
fragm ento de AD N se transcribe,
de form a com plem entaria, en una
cadena de A R N (cido ribonu-
cleico) m ensajero (A R N m ). Los
genes presentan regiones codi-
ficantes (exones) interrum pidas
por regiones no codificantes (in-
trones). La transcripcin origina
una m olcula precursora de
A R N m que corresponde al gen
entero (incluye intrones y exones).
Todava en el interior del ncleo
se elim inan los intrones de la m o-
lcula de A R N m original y se re-
ligan los exones dando lugar a la
m olcula de A R N m m aduro que
sale al citoplasm a y sirve com o
m olde para la sntesis proteca
(traduccin). Los cuatro tipos de
bases del A R N se ordenan en
grupos de tres, dando lugar a 64
tripletes diferentes o codones.
C ada codn es especfico para
un am inocido. Pero slo existen
20 am inocidos diferentes, por
tanto, la m ayora de am inocidos
son codificados por m s de un
codn (degeneracin del cdigo
gentico). La traduccin com ienza
siem pre a partir de un codn que
especifica el am inocido m etio-
nina (A TG ) y finaliza al encontrar
un codn de parada o stop (TG A,
TA A o TA G ).
Organizacin del genoma
humano
El genom a hum ano, en su for-
m a diploide, consiste aproxim a-
dam ente en 6 billones de pa-
res de bases de A D N organiza-
do en 23 pares de crom osom as.
Se calcula que m enos del 5%
del AD N est constituido por ge-
nes, un 50% o m s correspon-
dera a secuencias repetitivas y
el resto a prom otores, regula-
dores de la transcripcin y otros
elem entos por determ inar. Se-
gn las estim aciones m s re-
cientes del International H um an
G enom e Sequencing C onsortium
existen de 30.000 a 40.000 ge-
nes en el A D N nuclear hum ano,
cuya secuencia inicial se ha pu-
blicado a principios de este ao
2001. C ada gen est com pues-
to de dos copias alternativas o
alelos, una procedente del cro-
m osom a m aterno y otra del pa-
terno, que ocupan su corres-
pondiente locus gentico en cro-
m osom as hom logos. El tam a-
o de un gen es variable, pue-
de ser pequeo, com o el gen de
la globina que m ide 1,5 kiloba-
ses (1 kilobase equivale a 1.000
pares de bases), o grande, co-
m o el gen de la distrofina (2.000
kilobases o kb). La caracteriza-
cin com pleta de todos los ge-
nes y el conocim iento de su or-
ganizacin en el genom a ten-
drn un enorm e im pacto en la
com prensin de los procesos fi-
siolgicos del cuerpo hum ano,
en la salud y en la enferm edad
y, consecuentem ente, en la prc-
tica de la m edicina en general.
Genoma mitocondrial
A unque la gran m ayora de
genes estn localizados en el
ncleo, una pequea proporcin
residen en el citoplasm a, en la
m itocondria. La m olcula de AD N
m itocondrial es una doble ca-
dena circular de 16.569 pares
de bases, ya secuenciada en
1981 y que codifica, entre otras,
algunas de las protenas esen-
ciales para la fosforilacin oxi-
dativa. Existe una gran variedad
en el nm ero de m itocondrias
por clula y en el nm ero de m o-
lculas de A D N por m itocondria 788
AD N ARN Protena
Se estim a que m enos del
5% del AD N nuclear est cons-
tituido por genes (30.000 a
40.000 genes), el resto co-
rresponde a secuencias repe-
titivas y otros elem entos.
Existe A D N m itocondrial
que se hereda a travs del vu-
lo m aterno siguiendo un patrn
vertical no m endeliano.
(generalm ente de 2 a 10), de m a-
nera que cada clula contiene
m iles de copias de A D N m ito-
condrial. El contenido de m ito-
condrias en el esperm atozoide
es insignificante. En cada vulo
existen de 200.000 a 300.000 co-
pias y eso significa que cada in-
dividuo hereda el genom a m ito-
condrial de su m adre. Esto su-
pone un patrn de herencia ver-
tical m aterno no m endeliano. M u-
taciones de los genes m itocon-
driales se han im plicado en di-
versas enferm edades com o neu-
ropatia ptica hereditaria de Le-
ber, m iopatas, epilepsia m io-
clnica o sndrom e de K earns-
Sayre, entre otras.
BASE MOLECULAR
DE LAS ENFERMEDADES
GENTICAS
Tipos de enfermedades
genticas
1. Enfermedades cromosmi-
cas. Son secundarias a la ca-
rencia, el exceso o la confi-
guracin anorm al de uno o
m s crom osom as, produ-
ciendo m aterial gentico de-
ficiente o excesivo que afec-
ta a m uchos genes. Son re-
lativam ente frecuentes. La
prevalencia de alteraciones
crom osm icas en los carioti-
pos de neonatos estudiados
al azar es de 0,5% . En 50-
60% de los abortos espont-
neos del prim er trim estre se
detectan anom alas crom o-
sm icas. En la m ayora de
ocasiones estas anom alas
ocurren de novosalvo en
translocaciones desequili-
bradas en donde en 1/3 de
los casos se detecta translo-
cacin equilibrada en uno de
los progenitores. Las ano-
m alas crom osm icas tam -
bin se dan con extraordina-
ria frecuencia en procesos
m alignos, com o el crom oso-
m a Filadelfia (translocacin
del brazo largo del crom o-
som a 22 al brazo largo de
otro crom osom a, frecuente-
m ente el 9) en la leucem ia
m ieloide crnica u otras trans-
locaciones que se encuen-
tran con relativa especifici-
dad en determ inados tum o-
res. Las anom alas se suelen
detectar en las clulas tu-
m orales y, en ocasiones, una
alteracin constitucional pue-
de representar el prim er pa-
so en el proceso tum oral, co-
m o en el retinoblastom a o el
tum or de W ilm s.
2. Enfermedades monogni-
cas o mendelianas. Se pro-
ducen por la m utacin de un
nico gen. Su prevalencia
global al nacim iento es de
1% . Estas enferm edades pre-
sentan un patrn de heren-
cia sim ple o m endeliano que
se clasifica en autosm ico
dom inante (acondroplasia,
neurofibrom atosis I, esclero-
sis tuberosa, entre otras), au-
tosm ico recesivo (fibrosis
qustica, fenilcetonuria, atro-
fia m uscular espinal, etc.) y
ligado a X (com o distrofia
m uscular de D uchenne o he-
m ofilia A ). La alteracin bio-
qum ica bsica de estas en-
ferm edades reside en de-
fectos de una gran variedad
de protenas, com o: enzim as,
receptores, protenas de
transporte, horm onas, inm u-
noglobulinas, factores de co-
agulacin, de transcripcin
o colgeno. El concepto tra-
dicional de enferm edad m o-
nognica asum e la estabili-
dad de las m utaciones, la
transm isin de un alelo de ca-
da progenitor para un deter-
m inado locus autosm ico, la
m ism a expresin de am bos
alelos en un locus autosm i-
co y la transm isin al azar de
cualquier alelo a la descen-
dencia. Sin em bargo, existen
excepciones a esas reglas
com o las m utaciones din-
m icas, la disom a uniparen-
tal o el im printing genm ico
que son objeto de revisin en
otro captulo.
3. Enfermedades multifacto-
riales, resultado de la inte-
raccin de m ltiples genes y
factores exgenos am bien-
tales. Los defectos congni-
tos (labio leporino, fisura pa-
latina, espina bfida, cardio-
pata congnita) y las tpicas
enferm edades crnicas (dia-
betes m ellitus, enferm edad
coronaria, hipertensin esen-
cial) estn en este grupo. La
existencia de una gran pro-
porcin de genes con alelos
polim ficos sugiere una res-
puesta diferente de cada uno
de ellos a distintos factores
am bientales. H asta ahora, el
com plejo m ayor de histo-
com patibilidad o H LA , situa-
do en el brazo corto del cro-
m osom a 6 y form ado por dis-
tintos loci (A , B , D R , D Q , y
D P), es el que est m s fre-
cuentem ente asociado a la
predisposicin a ciertas en-
ferm edades. Existen diver-
sas estrategias com plejas
(anlisis de genes candida-
tos con estudios de asocia-
cin, anlisis de herm anos,
etc.) para el estudio de la ba-
se m olecular de estas enfer-
m edades y su clarificacin
es uno de los grandes retos
actuales de la ciencia. 789
C lsicam ente, las enfer-
m edades genticas se dividen
en crom osm icas, m onogni-
cas y m ultifactoriales.
Esta clasificacin, aunque til
para aproxim arnos a la etiopa-
togenia, diagnstico y consejo
gentico de cada uno de los ti-
pos de enferm edad, es una sim -
plificacin de la realidad. Por
ejem plo, existen deleciones cro-
m osm icas pequeas que cau-
san sndrom es de genes conti-
guos con la presencia sim ult-
nea de m ltiples enferm edades
m onognicas, com o los varones
con delecin del brazo corto del
crom osom a X que asocian dis-
trofia m uscular de D uchenne, en-
ferm edad granulom atosa crni-
ca, retinitis pigm entosa fenotipo
M cLeod. Tam bin, los fenotipos
de m uchas enferm edades m o-
nognicas se m odifican con la
accin de factores am bientales
o genes en otros loci. Por tan-
to, el lm ite entre los tipos de en-
ferm edades puede, en algunos
casos, estar difum inado.
Cambios en el ADN:
origen de la diversidad
y la enfermedad gentica
Se considera m utacin a
cualquier cam bio perm anente
del A D N . N o todos los cam bios
en el A D N son necesariam ente
patognicos. Existen cam bios
que no provocan efecto fenot-
pico (polim orfism os) o que alte-
ran el fenotipo sin afectar la su-
ceptibilidad a la enferm edad (di-
ferencias en la talla, el color del
pelo, etc.). O tros, sin em bargo,
pueden contribuir de form a m e-
nor en el proceso de la enfer-
m edad (com o en las enferm e-
dades m ultifactoriales) o ser cau-
santes directos de la m ism a (co-
m o en las enferm edades m ono-
gnicas).
1. Diversidad gentica. C om -
parando dos genom as hu-
m anos escogidos al azar,
existe una enorm e variacin
norm al entre sus secuencias
de A D N . Se producen cam -
bios en una de cada 100-200
pares de bases del genom a.
Estos cam bios pueden pro-
ducirse en las regiones co-
dificantes (exones) dando lu-
gar a variaciones m ltiples
de un gen (alelos) en un lo-
cus determ inado que origi-
nan varias form as de la m is-
m a protena. Los diferentes
alelos derivan de los cam bios
producidos durante la evolu-
cin, generalm ente de una
sla base, a partir de un ni-
co alelo precursor. En la m a-
yora de casos, suele ser un
cam bio neutral, que no afec-
ta al am inocido y, por tanto,
no altera la protena. El con-
cepto de polim orfism o gen-
tico se refiere a la existencia
de m ltiples alelos en un lo-
cus, donde al m enos dos ale-
los se presentan con una fre-
cuencia m ayor del 1% . Los
polim orfism os del A D N ocu-
rren con m ayor frecuencia
fuera de las regiones codifi-
cantes y en regiones del ge-
nom a con efecto nulo o es-
caso en la expresin gnica.
A dem s de los cam bios de
una sla base, los polim or-
fism os pueden consistir en
inserciones, deleciones y va-
riaciones en el nm ero de se-
cuencias repetitivas en tan-
dem . stos ltim os se llam an
VN TR (variable num ber of ta-
dem repeats), si el nm ero
de repeticiones es grande
(10-60 nucletidos), o STR
(short tandem repeats), si el
nm ero de repeticiones es
pequeo (1-4 nucletidos).
Estos polim orfism os son m uy
tiles en estudios de liga-
m iento y de identidad.
2. Mutaciones. Las enferm e-
dades genticas son secun-
darias a m utaciones del AD N .
Las m utaciones pueden ocu-
rrir en cualquier clula, tanto
en clulas germ inales (trans-
m isibles y responsables de
las enferm edades heredita-
rias) com o en clulas som -
ticas (relacionadas con el
cncer y el envejecim iento).
En el m s am plio sentido, las
m utaciones se pueden clasi-
ficar en tres categoras:
Mutaciones genmicas, las
m s frecuentes, que provo-
can aneuploidias com o tri-
ploidia (donde existe una ter-
cera copia de la constitucin
crom osm ica com pleta) o tri-
som as. Se producen por m a-
la segregacin crom osm i-
ca durante la divisin celular
y aum enta su frecuencia a
m edida que avanza la edad
m aterna. Se calcula un su-
ceso de m ala segregacin
por cada 25-50 divisiones
m eiticas, aunque la fre-
cuencia puede ser m ayor y
no registrarse por ser in-
com patible con la vida en fa-
ses precoces tras la con-
cepcin.
Mutaciones cromosmicas,
incluyen grandes alteracio-
nes del tipo de deleciones,
duplicaciones o transloca-
ciones de una porcin de un
crom osom a a otro. Son m e-
nos frecuentes y se estim a
una m utacin de este tipo por
cada 1.700 divisiones celu-
lares.
Mutaciones gnicas. H ere-
ditarias; en su m ayora son
com patibles con la vida y con
una reproduccin norm al. Se 790
N o todos los cam bios del
AD N son patognicos. Las en-
ferm edades genticas estn
producidas por m utaciones ge-
nm icas, crom osm icas o g-
nicas.
originan por errores en el pro-
ceso norm al de la replicacin
del AD N o por m utgenos que
inducen cam bios de bases.
El proceso de la replicacin
es enorm em ente seguro, con
sistem as de correccin de
errores m uy eficientes que ha-
cen que la tasa de m utacio-
nes por este m ecanism o sea
baja, m enor de un nuevo par
de bases en el genom a por
divisin celular. Las m utacio-
nes gnicas pueden ser de
varios tipos (Tabla I): a) C am -
bios de base o m utaciones
puntuales. C uando se produ-
ce un cam bio de base en una
determ inada posicin, es po-
sible que se cam bie el codn
pero codificando el m ism o
am inocido (m utacin silen-
te, que ocurre en el 23% de
los casos), que se incorpore
un am inocido distinto del ori-
ginal (m utacin de sentido
equivocado, com prende el
73% de los cam bios en las re-
giones codificantes) o que es-
te cam bio codifique un codn
de parada o stop (m utaciones
sin sentido, que acontecen en
el 4% de los casos aproxi-
m adam ente). En ocasiones,
la sustitucin de una base
puede ocasionar alteracin
en el proceso de m aduracin
del ARN , afectando al corte y
religam iento de los exones. b)
D eleciones/Inserciones. Si es-
tas alteraciones son m ltiplo
de tres bases (cada tres nu-
cletidos codifican para un
am inocido) la protena re-
sultante tendr un nm ero de
residuos m enor en el caso de
deleciones o m ayor en el de
inserciones. Si no es m ltiplo
de tres, la pauta de lectura
cam biar y los am inocidos
variarn a partir de ese pun-
to. c) Inversiones /D uplica-
ciones. La m ayora de inver-
siones se dan en las clulas
germ inales m asculinas. Las
duplicaciones pueden ser de
todo el gen o slo exones y se
suelen producir por entrecru-
zam iento desigual entre ho-
m logos en la divisin celu-
lar. d) M utaciones por ex-
pansin de repeticiones de tri-
nucletidos. La inestabilidad
de ciertas repeticiones de tri-
nucletidos y su expansin en
determ inados genes puede
causar enferm edades here-
ditarias, com o: sndrom e de
X frgil, distrofia m iotnica,
atrofia m uscular espinobulbar,
enferm edad de H untington
o ataxia espinocerebelosa, en-
tre otras. La repeticin de tri-
pletes es polim rfica en la po-
blacin. A s, por ejem plo, en
los individuos norm ales, el n-
m ero de repeticiones C G G en
el extrem o 5del prim er exn
del gen FM R -1 es m enor de
60. Si el nm ero de repeticio-
nes se encuentra entre 60 y
200, est en el rango de pre-
m utacin para el sndrom e de
X frgil y puede pasar a m u-
tacin com pleta (> 200 repe-
ticiones) al transm itirla a la des-
cendencia. Se les llam a m u-
taciones dinm icas. En ge-
neral, el tam ao m ayor de las
repeticiones de nucletidos
se correlaciona con m ayor
gravedad de la enferm edad
o su aparicin m s precoz.
M uestran fenm eno de anti-
cipacin, en el cual el fenoti-
po de la enferm edad em peo-
ra en generaciones sucesivas
de una m ism a fam ilia.
La frecuencia de las diferen-
tes m utaciones no es la m ism a
para cada gen. En cada gen pre-
dom ina un tipo de defecto y sue-
le depender de la secuencia de
AD N (presencia de repeticiones,
secuencias hom logas) y de la
funcin de la protena codificada.
A dem s, determ inados loci, co-
m o acondroplasia o esclerosis tu-
berosa, m uestran una alta tasa
de m utaciones de novo, algu-
nas de estas m utaciones ocurren
con m ayor frecuencia en relacin
con la edad paterna avanzada.
MTODOS DE ESTUDIO
DE LAS ENFERMEDADES
GENTICAS
C om o en cualquier tipo de
diagnstico clnico, una anam -
nesis detallada (recogiendo cui-
dadosam ente los antecedentes
fam iliares en form a de rbol ge-
nealgico) y el exam en fsico, su-
plem entado con anlisis bioqu-
m icos especficos, en caso ne- 791
Tipo Ejem plo
Mutaciones Silente Fibrosis qustica (FQ )
puntuales D e sentido equivocado A condroplasia/FQ
Sin sentido N eurofibrom atosis/FQ
Mutaciones D elecin D istrofia de D uchenne
grandes Insercin H em ofilia A
D uplicacin C harcot-M arie-Tooth
Inversin H em ofilia A
Expansin de tripletes X frgil/H untington
TABLA I.
Tipos de mutaciones
gnicas.
Las enferm edades crom o-
sm icas se analizan m ediante
los estudios citogenticos y las
m onognicas m ediante estu-
dios m oleculares indirectos (li-
gam iento) o directos.
cesario, constituyen el punto de
partida para establecer el diag-
nstico clnico gentico de sos-
pecha. A partir de ah, y en fun-
cin de la presuncin diagns-
tica, se indicar un tipo u otro de
estudio gentico.
1. Estudios citogenticos. Si
se sospecha una enferm edad
crom osm ica se realizar un
cariotipo y ser necesario apli-
car tcnicas especiales de hi-
bridacin in situ fluorescente
(FISH ), aplicando la sonda es-
pecfica, en el caso que haya
indicios de un sndrom e de
m icrodelecin en el pacien-
te u otra alteracin que pue-
da identificarse de esta for-
m a. A este tipo de estudios se
le ha dedicado un captulo in-
dependiente.
2. Estudios moleculares. El n-
m ero de anlisis m oleculares
disponibles para el estudio de
enferm edades m onognicas
se est am pliado progresiva-
m ente gracias al progreso de
la tecnologa m olecular. La apli-
cacin del conocim iento de la
hibridacin de los cidos nu-
cleicos, las enzim as de res-
triccin (endonucleasas bac-
terianas que cortan el AD N en
puntos especficos de su se-
cuencia), tcnicas com o la re-
accin en cadena de la poli-
m erasa o PC R (am plifica se-
lectivam ente secuencias de
A D N ) y Southern Blot(trans-
ferencia de A D N am plificado
a papeles de filtro para su hi-
bridacin con sondas espe-
cficas) constituyen las herra-
m ientas bsicas de la genti-
ca m olecular.
Indicaciones. U n estudio m o-
lecular puede estar indicado
cuando se sospeche una en-
ferm edad m onognica, m ito-
condrial o cncer hereditario,
ocasionalm ente en enferm e-
dades m ultifactoriales. Pue-
de servir para: a) confirm a-
cin de un diagnstico (co-
rrelacin genotipo-fenotipo);
b) identificacin de portado-
res; c) diagnstico prenatal.
d) diagnstico preim planta-
cin; e) diagnstico presin-
tom tico en enferm edades de
aparicin tarda; f) estim acin
del riesgo de padecim iento
de ciertas enferm edades
com plejas, com o las neuro-
degenerativas o el cncer en 792
Tipos de estudio Tipos de cam bios identificados
Polim orfism os: Variaciones no patolgicas
*FR LP Estudio de un fragm ento de A D N
**VN TR (tam ao/ secuencia), no
***STR necesariam ente el gen
N o identifica m utaciones del gen
*Fragm entos de restriccin de longitud polim rfica. **N m ero variable
de repeticiones en tandem . ***Repeticiones cortas en tandem
(m icrosatlites).
TABLA II.
Tipos de estudios
genticos moleculares
indirectos.
Tipos de estudio Tipos de cam bios identificados
Screening de m utaciones 90% de cualquier m utacin/
(*SSC P, **D G G E, ***PTT) delecin pequea
Estudio de m utaciones
especficas (ensayos con
enzim as de restriccin, ****A SO ) Slo una m utacin concreta
Southern Blot R eestructuraciones gnicas de
gran tam ao
Secuenciacin C ualquier m utacin
*Polim orfism os de conform acin de cadena nica. **Electroforesis en
gel de gradiente desnaturalizante. ***Test de la protena truncada.
****PC R alelo especfica.
TABLA III.
Tipos de estudios
genticos moleculares
directos.
FIGURA 1.
Mutacin (Gly380Arg)
en el gen del receptor
3 del factor de
crecimiento de los
fibroblastos,
responsable de un
cuadro clnico de
acondroplasia.
G ly
C C A C C C C G T A G C T G
C C A C C C T G T A G C T G
A rg
G ly380A rg
GG G AG G
A condroplasia
Secuencia gen FG FR 3 (sentido reverso)
C ortesa de las D ras. Trujillo y Ayudo. Servicio de G entica. Fundacin Jim nez
D az. M adrid.
individuos sanos; g) scree-
ning poblacional.
D ada la heterogeneidad ge-
ntica de algunas enferm e-
dades, as com o la com pleji-
dad de sus anlisis, es nece-
sario referir los casos a U ni-
dades de G entica C lnica
que puedan orientarlos ade-
cuadam ente y rem itir las
m uestras a los laboratorios es-
pecializados para su estudio.
Muestra. Los estudios m ole-
culares se realizan habitual-
m ente en el ADN del pa-
ciente. Se suele extraer de
m uestras de sangre (5-10 m L)
que se guardan en tubos de
ED TA . El A D N tam bin se
puede obtener de cualquier
tejido, m ucosa oral, pelo, se-
m en, vellosidad corial, clu-
las em brionarias, m uestras
de anatom a patolgica o in-
cluso de las tarjetas del scre-
ening neonatal. Es im portan-
te, en ocasiones, obtener el
A D N de un paciente y guar-
darlo para uso posterior, so-
bre todo en el caso de pa-
cientes fallecidos con sos-
pecha de enferm edad gen-
tica. C uando los genes tie-
nen m uchos exones o se sos-
pecha un determ inado tipo
de m utaciones que truncan
el producto proteco, es pre-
ferible utilizar ARN. Su ex-
traccin es m s com plicada,
requiriendo un procesam iento
especial de las m uestras.
Tipos de estudios molecu-
lares. El estudio m olecular se
puede abordar m ediante el
estudio gentico indirecto o
directo, segn el estado de
conocim iento del gen o ge-
nes im plicados en la enfer-
m edad sospechada.
Indirecto o de ligamiento:
se puede realizar cuando el
gen est localizado, aunque
no est secuenciado e iden-
tificado (Tabla II). Se analiza
el ligam iento de la enferm e-
dad a m arcadores polim rfi-
cos cercanos al gen. Puede
darse error en la interpreta-
cin en las ocasiones en que
exista recom binacin. Es im -
prescindible estudiar a toda
la fam ilia, incluyendo indivi-
duos de diagnstico conoci-
do, tanto sanos com o afec-
tos, de varias generaciones.
Directo: se utiliza cuando el
gen se ha identificado y se-
cuenciado. Es de eleccin
siem pre que sea posible. N o
precisa el estudio de otros
m iem bros de la fam ilia (Tabla
III). Se puede realizar en en-
ferm edades com o acondro-
plasia, X frgil, D uchenne, atro-
fia m edular espinal, fibrosis
qustica, etc. En la acondro-
plasia, donde m s del 90%
presentan el m ism o cam bio
de nucletido, se suele se-
cuenciar directam ente el frag-
m ento de A D N que lo contie-
ne (Figura 1). En caso de he-
terogeneidad allica (num e-
rosas m utaciones distintas en
un gen) se em plean tcnicas
de screening de m utaciones
inicialm ente, seguido de se-
cuenciacin. Es im portante re-
saltar que un resultado positi-
vo confirm a el diagnstico cl-
nico, pero en la m ayora de ca-
sos un resultado negativo pue-
de no descartar la enferm e-
dad. Por ello, es m uy im por-
tante conocer el rendim iento
de cada tcnica para inter-
pretarla adecuadam ente.
BIBLIOGRAFA
Los asteriscos reflejan el inters del ar-
tculo a juicio delautor.
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Este captulo expone los tipos de m uta-
ciones en los genes hum anos y sus con-
secuencias. H ace consideraciones m uy
interesantes acerca de la correlacin ge-
notipo-fenotipo.
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Im portante revisin actualizada sobre
las bases m oleculares de las enferm e-
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estudio m olecular disponibles para su
estudio, ilustradas con ejem plos m uy de-
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tone, 1997. p. 67-86.
R epasa las principales tcnicas m ole-
culares para el diagnstico gentico par-
tiendo de las herram ientas bsicas. 793
794
ALGORITMO:
APROXIMACIN
DIAGNSTICA A LA
PATOLOGA
MOLECULAR.
D iagnstico
m olecular no
posible:
guardar A D N
A nlisis de
ligam ento con
m arcadores
polim rficos
Si no se encuentra la m utacin se realizar ligam iento si es posible
G en m apeado y
clonado
Sospecha de un
diagnstico
D iagnstico
clnico definitivo
G en m apeado
pero no clonado
A nlisis de
ligam iento
A nlisis de
m utaciones
M iem bros de la
fam ilia no
disponibles
M utaciones
m uy
heterogneas
M iem bros de la
fam ilia
disponibles
A lteraciones
m oleculares
grandes
M utaciones
com unes
conocidas
M todos de
screening de
m utaciones
Southern, FISH ,
PC R m ltiple
A SO : PC R
alelo-especfica
R ecin nacida que ingresa
para estudio por acortam ien-
to de extrem idades. Es la ter-
cera hija de padres sanos y no
consanguneos (edad m ater-
na: 37 aos; edad paterna: 48
aos), sin otros antecedentes
fam iliares de inters. Em bara-
zo sin incidencias. Parto eu-
tcico, a trm ino. Perodo neo-
natal: A PG A R : 9/10. Som ato-
m etra: Peso: 3.080 g; longi-
tud: 44 cm ; PC : 36 cm . Explo-
racin: im presiona de m ega-
cefalia con frente prom inente,
hipoplasia m ediofacial, acor-
tam iento proxim al de extrem i-
dades con m anos en tridente
e hipotona axial. M apa seo:
acortam iento proxim al de ex-
trem idades con ligera incur-
vacin y ensancham iento m e-
tafisario. Estudio m olecular del
gen FG FR 3: G ly380A rg.
Caso clnico
A nlisis
poblacional
BASES MOLECULARES DE LAS ENFERMEDADES GENTICAS
FISH : hibridacin in situ fluorescente; PC R: reaccin en cadena de la polim erasa; ASO : PC R alelo-
especfica.