PRINCIPIO Y RESUMEN

En 1886 Jaffe
1
describe un mtodo para la determinacin de
creatinina haciendo reaccionar un filtrado libre de protenas
con cido pcrico en una solucin alcalina. Aunque desde
entonces se han descrito muchos mtodos, la reaccin clsica
de Jaffe es la ms utilizada.
Esta reaccin est sujeta a interferencias a causa de varias
sustancias como protenas y glucosa
2,3,4
.
Para combatir esta desventaja, se han desarrollado algunas
modificaciones
5
. Los mtodos cinticos son los ms utilizados
por ser ms rpidos, simples y sin interferencias. El presente
mtodo se basa en una modificacin de reaccin de Fabinay
y Eringshausen
6
.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO INCLUIDOS
- Espectrofotmetro capaz de realizar lecturas de absor-
bancia a 510 nm con 1 cm de paso de luz.
- Pipetas serolgicas o automticas
- Cubetas o tubos de ensayo
- Agitador (tipo Vortex)
- Cronmetro.
RECOLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA
Suero: Separar rpidamente el suero del cogulo para preve-
nir la hemlisis.
Orina: Recolecte la orina de 24 horas, diluya la muestra 1:20
con agua destilada y mezcle bien.
ESTABILIDAD DE LA MUESTRA
La creatinina srica es estable durante 24 horas si se
almacena a 2-8C y por varios meses a -20C en recipientes
bien cerrados que eviten la evaporacin y la contaminacin
de la muestra. La muestra de orina debe conservarse
aadiendo 15 g de cido brico. La orina es estable de 4 a 7
das a temperatura ambiente (15-25C).
SUSTANCIAS INTERFERENTES
Varias sustancias afectan la exactitud de la determinacin de
Creatinina. Ver lista completa en Young et al.
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PARMETROS DE PRUEBA
Longitud de onda 510 nm
Tipo de reaccin Cintica
Direccin de reaccin Creciente
Temperatura de reaccin 37C
Relacin muestra/reactivo 1:20
Tiempo de equilibrio 20 seg
Tiempo de lectura 60 seg
Lmite de absorbancia del Blanco > 0.200 A
Absorbancia mxima 0.625 A
Valor Normal bajo 0.7 mg/dL
Valor Normal alto 1.5 mg/dL
Linealidad 20 mg/dL
pH 12.4 1.0
Absorbancia inicial < 0.500
Estndar 5 mg/dL
Los parmetros antes mencionados deben ser empleados
en la programacin de los analizadores automatizados para
Colesterol Total. Consulte su manual del usuario para pro-
gramar las instrucciones.
PROCEDIMIENTO MANUAL
1. Coloque las celdillas del espectrofotmetro a 37C.
2. Lleve a cero el espectrofotmetro con un blanco de agua
a 510 nm.
3. Pipetee 1 mL del reactivo en cada tubo de ensayo y
preincube por 3 minutos a 37C.
4. Transfiera 0.05 mL (50 L) del estndar en el tubo de
Stanbio Creatinina LiquiColor

Para la determinacin cuantitativa colorimtrica

cintica de creatinina en suero u orina
La creatinina reacciona con el cido pcrico en un medio
alcalino para formar un complejo de color el cual absorbe a
510 nm. La velocidad de formacin del color es proporcional
a la concentracin de creatinina en la muestra.
REACTIVOS
Creatinina cida:
Solucin acuosa de cido pcrico, 3.6 mmol/L..
Creatinina Base:
Solucin acuosa de hidrxido de sodio, 240 mmol/L.
Estndar de creatinina - 5 mg/dL:
Solucin acuosa de creatinina con cloruro de zinc, 5.0 mg/dL.
Presentacin: Equipo para 100 pruebas.
Precauciones. Unicamente para uso diagnstico in vitro. El
hidrxido de sodio debe manejarse con cuidado por ser
custico. El cido pcrico es un agente oxidante fuerte. Evite
el contacto con la piel. Limpie cualquier salpicadura ya que el
cido pcrico seco es explosivo.
Preparacin del reactivo: Mezcle una parte del cido pcrico
y una parte del reactivo Base para preparar el Reactivo de
Trabajo. El estndar y el reactivo de trabajo estn listos para
su uso
ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO
Los frascos de reactivo sin abrir son estables a temperatura
ambiente (15-30C) hasta su fecha de caducidad. El reactivo
de trabajo es estable durante 30 das almacenado entre 15c
Y 30 C. El estndar de creatinina es estable hasta su fecha
de caducidad indicada en la etiqueta cuando se conserva a
15-30C. No utilice los reactivos si estos estn turbios.
Creatinina + Acido Pcrico Complejo de creatinina-picrato
(amarillo-naranja)
Alcali
ensayo, mezcle inmediatamente y pase a una celdilla
de lectura.
5. Transcurridos exactamente 20 segundos, lea y registre
la absorbancia (A
1
).
6. Exactamente 60 segundos despus de la lectura inicial
lea y registre la absorbancia final (A
2
).
7. Calcule el cambio de absorbancias A restando (A
2
A
1
).
8. Corra los controles y las muestras de los pacientes
como se indica en los pasos del 1 al 7.
NOTA: Los volmenes pueden ser incrementados al doble si
el instrumento requiere un volumen mayor a 1.0 mL para
realizar la lectura.
CONTROL DE CALIDAD
Incluya en cada corrida de muestras un suero y/o orina
controles con valores conocidos analizados por este mtodo.
RESULTADOS
Los valores resultan de comparar el cambio de absorbancia
(A) de la muestra (M) con el estndar (S) tratado de forma
idntica.
A(M) de la muestra
Creatinina srica (mg/dL) = x 5
A(S) del estndar
donde A(M) y A(S) son los cambios de absorbancia (incre-
mentos) de la muestra y del estndar respectivamente, y 5
es la concentracin del estndar (mg/dL).
Au
Creatinina urinaria (mg/dL) = x 5 x 20 (Factor de Dilucin)
As
Creatinina urinaria (mg/L) = Creatinina Urinaria (mg/dL) x 10
24 h (mL)
Creatinina urin. (mg/L/24 h) = Creatinina urin. (mg/L) x
1000
VALORES ESPERADOS
Hombres: (Suero) 0.9 - 1.5 mg/dL
(Orina) 1000 - 2 000 mg/24 horas.
Mujeres: (Suero) 0.7 - 1.4 mg/dL
(Orina) 600 - 1 500 mg/24 horas.
CARACTERSTICAS
Correlacin: Muestras de suero y control (n = 38) con valores
de creatinina entre 0.6-25 mg/dL fueron analizados por el
mtodo aqu descrito y por otro procedimiento cintico similar.
El anlisis estadstico revel un coeficiente de correlacin
( r ) de 0.998, con una ecuacin de regresin de y = 0.96
x + 0.046.
Linealidad: Hasta 20 mg/dL. Muestras que excedan de estos
valores debern diluirse al doble con solucin salina, repetir
el ensayo y multiplicar el resultado por 2.
Precisin:
Intraensayo
Media (mg/dL) SD CV%
0.9 0.08 4.0
8.6 0.09 2.1
Interensayo
Media (mg/dL) SD CV%
1.1 0.08 4.8
8.4 0.16 2.6
Exactitud: Se analizaron muestras de suero y/o control con
valores de creatinina entre 0.6 y 2.0 mg/dL por el mtodo
descrito y por el procedimiento cintico.
Sensibilidad: Basada en la resolucin del instrumento de
A = 0.001, el mtodo presentado muestra una sensibilidad de
0.16 mg/dL.
REFERENCIAS
1. Jaffe M.Z. Physiol. Chem. 10:391, 1886.
2. Digiorgio L., In Clinical Chemistry . Principles and Technis,
R.J. et al., Eds. Harper and Row, Hagerstown, MD. 1974,
pp 549 - 550.
3. Cook JGH, Ann clin. Biochem 12:219, 1975
4. Tausky HH, In Estndar Methods of Clinical Chemistry vol.
3, D. Seligson, Ed. Academic Press, New York, 1966, pp
99.
5. Heinegard D. Tiederstrom G. Clin. Chem. Acta 43:305,
1973.
6. Fabiny DL, Ertinghausen G. Clin. Chem. 17: 696, 1971.
7. Young DS et al. Clin. Chem. 21:286 D 1975 (Speccial Issue)
8. Larse K. Clin. Chem. Acta 41:209, 1972.
9. Stanbio Laboratory Data.
Fabricado en EUA por:
Stanbio Laboratory
1261 North Main Street
Boerne TX; 78006.
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Laboratorios Licon S.A.
Viveros del Roco No. 33
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