El cultivo in vitro de plantas: ventajas y aplicaciones

Alejandro Atars Grupo de Cultivo in vitro y Mejora Vegetal I.B.M.C.P. Departamento de Biotecnologa Universidad Politcnica de Valencia

El cultivo in vitro de plantas: ventajas y aplicaciones

Introduccin al cultivo in vitro de plantas Definicin Mtodos y aparatos Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas La multiplicacin de plantas La mejora sanitaria La mejora gentica El mtodo haplo-diploide El aprovechamiento de la variacin intraespecfica y extraespecfica La transformacin gentica Ventajas del cultivo in vitro

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Definicin de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de tcnicas que permiten el cultivo de las clulas y tejidos vegetales en condiciones axnicas y el aprovechamiento de su totipotencia, as como de su aptitud para la variacin y capacidad de modificacin gentica

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Definicin de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de tcnicas que permiten el cultivo de las clulas y tejidos vegetales en condiciones axnicas y el aprovechamiento de su totipotencia, as como de su aptitud para la variacin y capacidad de modificacin gentica

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Cultivo de clulas y tejidos vegetales

Requerimientos para el crecimiento de clulas y tejidos vegetales

Aire Luz Agua Nutrientes

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Definicin de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de tcnicas que permiten el cultivo de las clulas y tejidos vegetales en condiciones axnicas y el aprovechamiento de su totipotencia, as como de su aptitud para la variacin y capacidad de modificacin gentica

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Cultivo axnico

Desarrollado en un ambiente donde no hay ningn otro organismo vivo

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Condiciones axnicas
Mtodos de esterilizacin

P T

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Condiciones axnicas
Esterilizacin del material vegetal

NaOCl (0,25-1%) + 7X (gotas)

Agua desionizada estril

5 minutos 10 minutos 10-30 minutos Agitacin 15 minutos

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Condiciones axnicas
Trabajo sin contaminacin

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Condiciones axnicas
Diseo del laboratorio
Almacenamiento (temperatura ambiente y fro) Lavado (puede estar junto a la de esterilizacin) Otras (despachos, salas de reunin, recepcin, etc) Preparacin-esterilizacin de los medios de cultivo Transferencia (condiciones de esterilidad) Incubacin de los cultivos (condiciones controladas)
Transferencia

reas externas

reas protegidas
Incubacin

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Definicin de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de tcnicas que permiten el cultivo de las clulas y tejidos vegetales en condiciones axnicas y el aprovechamiento de su totipotencia, as como de su aptitud para la variacin y capacidad de modificacin gentica

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Totipotencia
Capacidad de regeneracin de una planta entera a partir de una clula o un grupo de clulas

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Totipotencia
Clulas vegetales totipotentes

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Totipotencia
Organognesis adventicia

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Totipotencia
Embriognesis somtica

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Definicin de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de tcnicas que permiten el cultivo de las clulas y tejidos vegetales en condiciones axnicas y el aprovechamiento de su totipotencia, as como de su aptitud para la variacin y capacidad de modificacin gentica

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Aptitud para la variacin gentica

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Aptitud para la variacin gentica

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Definicin de cultivo in vitro de plantas

Conjunto de tcnicas que permiten el cultivo de las clulas y tejidos vegetales en condiciones axnicas y el aprovechamiento de su totipotencia, as como de su aptitud para la variacin y capacidad de modificacin gentica

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Capacidad para la modificacin gentica

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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicacin de plantas: Micropropagacin La mejora sanitaria: Microinjerto La mejora gentica: Incremento de variabilidad gentica Mtodo haplodiploide Transformacin gentica

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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicacin de plantas: Micropropagacin La mejora sanitaria: Microinjerto La mejora gentica: Incremento de variabilidad gentica Mtodo haplodiploide Transformacin gentica

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Micropropagacin

Multiplication

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Micropropagacin

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Micropropagacin

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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicacin de plantas: Micropropagacin La mejora sanitaria: Microinjerto La mejora gentica: Incremento de variabilidad gentica Mtodo haplodiploide Transformacin gentica

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Microinjerto en ctricos

Variedad Patrn

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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicacin de plantas: Micropropagacin La mejora sanitaria: Microinjerto La mejora gentica: Incremento de variabilidad gentica Mtodo haplodiploide Transformacin gentica

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Incremento de la variabilidad gentica

Variacin somaclonal: alternativa a otros agentes mutagnicos

Ficus benjamina

SC-Fb-Green snow

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Incremento de la variabilidad gentica

Rescate de embriones: solucin de incompatibilidad sexual
Polen Especie A
Polinizacin

Esterilizacin

Fruto inmaduro

Pistilo Especie B

Aislamiento de semillas inmaduras con proembriones

Semilla inmadura con embrin hbrido

Hbrido interespecfico

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Incremento de la variabilidad gentica

Rescate de embriones: solucin de incompatibilidad sexual

Lilium auratum

Lilium henry

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Incremento de la variabilidad gentica

Hibridacin somtica
Permite la unin de dos materiales con incompatibilidad sexual

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Incremento de la variabilidad gentica

Hibridacin somtica

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Incremento de la variabilidad gentica

Hibridacin somtica
En funcin de la informacin gentica que se combina de ambos parentales se habla de: - hibridacin simtrica - hibridacin asimtrica - cibridacin

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Incremento de la variabilidad gentica

Hibridacin somtica
Hay distintos mtodos de fusin de protoplastos: - qumicos - elctricos - combinados

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Incremento de la variabilidad gentica

Hibridacin somtica

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Incremento de la variabilidad gentica

Hibridacin somtica

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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicacin de plantas: Micropropagacin La mejora sanitaria: Microinjerto La mejora gentica: Incremento de variabilidad gentica Mtodo haplodiploide Transformacin gentica

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El mtodo haplo-diploide
Obtencin de plantas haploides

Estadios florales

Cultivo de anteras

Regeneracin plantas haploides

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El mtodo haplo-diploide
Ejemplo de mejora del arroz

Oryza sativa x O. glaberrima

Obtencin de dobles haploides

Seleccin

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Aplicaciones del cultivo in vitro de plantas

La multiplicacin de plantas: Micropropagacin La mejora sanitaria: Microinjerto La mejora gentica: Incremento de variabilidad gentica Mtodo haplodiploide Transformacin gentica

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La transformacin gentica
Cocultivo de explantes con Agrobacterium

(+)

Plntula de tomate

Precultivo

A. tumefaciens

Infeccin

Co-cultivo

Cultivo sin PS (2-3 das)

Seleccin

Desarrollo

TG1

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La transformacin gentica

Soja

Algodn

Maz

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La transformacin gentica
Informe anual del I. S. A. A. A. (INTERNATIONAL SERVICE FOR THE ACQUISITION OF AGRI-BIOTECH APPLICATIONS)

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La transformacin gentica
Presente y futuro

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagacin

Uniformidad y reproducibilidad

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagacin

Uniformidad y reproducibilidad Obtencin de un producto superior

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagacin

Uniformidad y reproducibilidad Obtencin de un producto superior Mayor control sanitario

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagacin

Uniformidad y reproducibilidad Obtencin de un producto superior Mayor control sanitario Aplicable a un amplio espectro de especies

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagacin

Uniformidad y reproducibilidad Obtencin de un producto superior Mayor control sanitario Aplicable a un amplio espectro de especies Mejor planificacin durante el ao

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagacin

Uniformidad y reproducibilidad Obtencin de un producto superior Mayor control sanitario Aplicable a un amplio espectro de especies Mejor planificacin durante el ao Ahorro de espacio

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagacin

Uniformidad y reproducibilidad Obtencin de un producto superior Mayor control sanitario Aplicable a un amplio espectro de especies Mejor planificacin durante el ao Ahorro de espacio Alta tasa de multiplicacin

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Micropropagacin

Uniformidad y reproducibilidad Obtencin de un producto superior Mayor control sanitario Aplicable a un amplio espectro de especies Mejor planificacin durante el ao Ahorro de espacio Alta tasa de multiplicacin Disminucin de costes

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora sanitaria
Saneamiento del material cultivado

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora sanitaria
Saneamiento del material cultivado Eliminacin de enfermedades de origen vrico

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora sanitaria
Saneamiento del material cultivado Eliminacin de enfermedades de origen vrico Aumenta la seguridad en el intercambio de germoplasma

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora gentica
Mayor rapidez en la obtencin de ciertos logros

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora gentica
Mayor rapidez en la obtencin de ciertos logros Objetivos difciles de conseguir por los mtodos clsicos

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Ventajas del cultivo in vitro de plantas

Mejora gentica
Mayor rapidez en la obtencin de ciertos logros Objetivos difciles de conseguir por los mtodos clsicos Objetivos inabordables por los mtodos convencionales