Universidad Mayor de San Simn. Facultad de Ciencias y Tecnologa. Carrera: Ingeniera de Alimentos Materia: Microbiologa.

Docente: Abraham Flores. Estudiante: Katherine Garca Fecha: 02/10/2012.

INVESTIGACION Y RECUENTO DE ENTEROBACTERIACEAE LACTOSAS-POSITIVAS 1. INTRODUCCION: Las enterobacteriaceae lactosas-positivas o grupo coli-aerogenes constituyen un grupo de bacterias que se definen mas por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios taxonmicos. Pertenecen a la familia entero bacteria y se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con produccin de acido y gas m{as o menos rpidamente en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubacin{on comprendida entre 30- 37C. Son bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no esporulados. Del grupo coliformes forman parte varios gneros: Escherichia Enterobacter Kolesiella Citrobacter

Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales, pero tambin en otros ambientes: suelo, plantas, cscara de huevo, etc. Aunque su especificidad como indicadores no es buena. Se suelen usar como ndice de contaminacin fecal por : Su frecuencia en heces. Su fcil deteccin en el laboratorio. Sus caractersticas semejantes, en algn aspecto, a las de algunos miembros patgenos de la familia Enterobacteriaceae. Dentro de este grupo, son los coliformes fecales los que tienen significado sanitario y, por consiguiente, los que ms interesan en el anlisis microbiolgico de alimentos. Se considera a los coliformes fecales como presuntos Escherichia coli. Sus principales caractersticas son: Aptitud par desarrollarse entre 43,5-45,5C. Capacidad para crecer en presencia de sales biliares. Facultades para producir indol en agua de peptona.

Universidad Mayor de San Simn. Docente: Abraham Flores. Facultad de Ciencias y Tecnologa. Estudiante: Katherine Garca Carrera: Ingeniera de Alimentos Fecha: 02/10/2012. Materia: Microbiologa. En general, niveles altos de Enterobacteriaceae lactosa-positivas (coliformes) indican manipulacin y elaboracin deficientes de los alimentos. Investigacin y recuento en medio solido En la tcnica que se describe a continuacin se utiliza el medio selectivo agur biliado rojo neutro cristal violeta (Violet Red Bile Agar:VRBA). Material Placas de Petri estriles, de 90 mm de dimetro. Pipetas estriles de 1 ml. Estufa de cultivo. Cuenta colonias.

Medio de cultivo Agar biliado-rojo neutro cristal violeta (Violet Red Bile Agar: VRBA) Composicin: Extracto de levadura 3 g Peptona 7g Cloruro sdico 5g Sales biliares 10 g Lactosa 5g Rojo neutro 0,03 g Cristal violeta 0,02 g Agar 15 g Agua destilada 1.000 ml Disolver los ingredientes por calentamiento, Mantener en ebullicin dos minutos. Ajustar el pH a 7,4 NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Para preparar placas de Petri, se enfriar a 45C. Tcnica A partir de la serie de diluciones decimales y por duplicado, se aade 1 ml de cada dilucin en placas de Petri estriles, a continuacin se vierten unos 15 ml de agar VRBA (vase apartado anterior) atemperado a 47C. Mezclar cuidadosamente. Una vez solidificado el medio en una superficie horizontal, se vierten 3-4 ml del mismo medio estril sobre cada placa, formando una capa que evita el excesivo crecimiento y la extensin de las colonias, lo que facilita su recuento. Incubar las placas en posicin invertida a 31+1 C durante 24 horas. Las sales biliares y el cristal violeta del medio inhiben la flora acompaante grampositiva. La fermentacin de la lactosa hace que vire el indicador rojo neutro a un color rojo purpura. Tambin produce una precipitacin de las sales biliares. La lectura consiste en contar las colonias rojo purpura rodeadas de una zona de precipitacin de las sales biliares color violeta. Para el encuentro se eligen en contar las colonias rojo prpura rodeada de una zona de precipitacin de las sales biliares color violeta.

Universidad Mayor de San Simn. Docente: Abraham Flores. Facultad de Ciencias y Tecnologa. Estudiante: Katherine Garca Carrera: Ingeniera de Alimentos Fecha: 02/10/2012. Materia: Microbiologa. Pata el recuento se elige placas que contengan entre 30 y 150 colonias tpicas. El nmero de colonias contadas, multiplicado por el factor de dilucin de la placa elegido, da como resultado el nmero total de Enterobacteriaceae lactosa- positivas (coliformes) por grama o mililitro de muestra 1. OBJETIVOS: Realizar el recuento de enterobacteriacea lactosa-positiva en la muestra de leche cruda

2. MATERIALES Y REACTIVOS: 2.1 Equipos: Gradilla Mechero. 4 tubos de ensayo 2 pipetas de 10ml 4 pipetas de 2mL 6 cajas petrie 4 tubos de ensayo 2.2 Reactivos: Alcohol al 70% Muestra de leche cruda Agua de peptona

2.3 Medios de cultivo 3. Agar biliado-rojo neutro-crsital violeta (VRBA) PCA. Caldo verde bilis brillante (BGBL) EC PROCEDIMIENTO: Preparamos 225mL de peptona mas 36mL de peptona para los 4 tubos Marcamos los tubos de ensayo a -2, -3, -4, -5 y depositamos 9mL de peptona a cada tubo los 225mL depositamos los 25mL de la muestra de leche cruda con la pipeta de 10mL homogeneizar. Marcamos las cajas petrie a 2 cajas en -1, y 2 cajas -3, -5 2 cajas para agar VRBA Y PCA respectivamente Con la ayuda de las pipeta ya flameada sacar 2mL de la solucin madre, depositar 1mL en la caja petrie -1 de VRBA Y PCA , depositar 1mL en el tubo -2 (flamear antes y despus de depositar el tubo)

Universidad Mayor de San Simn. Docente: Abraham Flores. Facultad de Ciencias y Tecnologa. Estudiante: Katherine Garca Carrera: Ingeniera de Alimentos Fecha: 02/10/2012. Materia: Microbiologa. Con otra pipeta del tubo -2 sacar 1mL y depositar al tubo -3 (flamear antes y despus de depositar el tubo) Con otra pipeta sacar 2mL depositar 1mL en la caja petrie -3 de VRBA Y PCA , depositar 1mL en el tubo -4 (flamear antes y despus de depositar el tubo) Con otra pipeta del tubo -4 sacar 1mL y depositar al tubo -5 (flamear antes y despus de depositar el tubo) Con otra pipeta sacar 2mL depositar 1mL en la caja petrie -5 de VRBA Y PCA , depositar 1mL en el tubo -5 (flamear antes y despus de depositar el tubo) . Homogeneizar cada tubo despus de aadir. Incubar de 24-48 horas a 37C. Luego de las 24 horas en dos tubos tomar la colonia (1) y la sembramos en caldo verde bilis brillante, y de otra colonia (2) tambin sembramos al caldo bilis brillante. En otros 2 tubos tomar la colonia (1) y la sembramos en EC, y de otra colonia (2) tambin sembramos al EC. Verificar en 24 y 48 horas CALCULOS Y RESULTADOS Tuvimos un problema no creci nada en las cajas petrie de VRBA Y PCA porque nuestra leche debi estar pasteurizada, as que tomamos otra muestra del grupo 3. En nuestras muestras de CVBB a las 24 horas observamos la formacin de gas y turbidez Tanto de la toma de muestra de la colonia 1 y la colonia 2

Para el EC a las 24 horas no haba ningn cambio Tanto en de la toma de muestra de la colonia 1 y la colonia 2

Universidad Mayor de San Simn. Facultad de Ciencias y Tecnologa. Carrera: Ingeniera de Alimentos Materia: Microbiologa.

Docente: Abraham Flores. Estudiante: Katherine Garca Fecha: 02/10/2012.

A las 48 horas en coliformes fecales en la colonia 1 se pudo observar la presencia de gases pero en el otro tubo no haba nada. REPORTE CVBB MUESTRA DE QUESILLO CT= 4*2/2*105 =4*105UFC/1mL CF=4*1/2*105 = 2*105 UFC/1ml

CT<CF

Universidad Mayor de San Simn. Facultad de Ciencias y Tecnologa. Carrera: Ingeniera de Alimentos Materia: Microbiologa.

Docente: Abraham Flores. Estudiante: Katherine Garca Fecha: 02/10/2012.