Tecnologa Mdica 2013

Informe de Laboratorio: Microbiota humana y ambiental

Integrantes: Nicol Cruces Nathaly Isla Gloria Mancilla Yaela Osorio Mariela Riquelme Docentes: ngelo Baeza Franklin Vidal Asignatura: Microbiologa General Carrera: Tecnologa Mdica

Introduccin Durante mucho tiempo los seres humanos hemos desarrollado una estrecha y compleja relacin con los microorganismos. Desde el nacimiento hasta la muerte, nuestro cuerpo est habitado por cientos de bacterias y hongos. Algunos hacen del cuerpo humano un hogar permanente y otros residen en l temporalmente, aunque sean inocuos. Los microorganismos que mantienen la relacin estable con los seres humanos constituyen nuestra biota normal. Estos microorganismos crecen y se multiplican debido a que estn adaptados a vivir en el cuerpo humano. En la mayora de los casos no causan enfermedades. La microbiota normal solo habita en superficies del cuerpo. Pero, anatmicamente existen superficies externas e internas. Las superficies externas, como la piel, estn en contacto directo con el ambiente y, por lo tanto, con los organismos. Las superficies internas estn expuestas indirectamente al medio ambiente. Por ejemplo, los intestinos albergan los microorganismos que penetran en el cuerpo por la boca. La microbiota residente, son aquellos que se encuentran en el cuerpo humano a lo largo de toda su vida, mientras que la microbiota transitoria no est suficientemente adaptada a vivir en el cuerpo humano como para permanecer indefinidamente, y no forma parte de la biota normal. Los oportunistas son aquellos que causan enfermedad cuando se presenta una buena oportunidad, lo cual normalmente es un desequilibrio del sistema inmune. Los microorganismos que habitan en nuestro cuerpo, al igual que el resto de los microorganismos, sobreviven porque estn adaptados a su ambiente. Pero, Por qu algunos microorganismos estn en determinadas partes de nuestro cuerpo?, esto es por dos factores: el propio ambiente (tejido vivo) y en modo en que estos se ambientan. La cavidad nasal tambin est colonizada por microorganismos por ser superficies externas en contacto con el medio ambiente, y estos normalmente no se encuentran en la piel, Lactobacilus spp es muy comn encontrarlo en la cavidad nasal.1

John L.Ingraham, C. A. (1998). Introduccin a la microbiologa. Barcelona: Revert.S.A.

Medios de transporte.

Medio de Transporte de Stuart Es utilizado para la recoleccin, transporte y preservacin de muestras microbiolgicas. El Medio de Transporte de Stuart es un medio cuya frmula permite mantener la viabilidad de los microorganismos presentes en la muestra sin que exista un crecimiento significativo. Actualmente este medio es recomendado para exudados farngeos, vaginales y muestras de heridas. En este medio el cloruro de calcio proporciona iones esenciales para mantener el balance osmtico. El tioglicolato de sodio evita los cambios oxidativos y provee una atmsfera reducida. El glicerofosfato de sodio acta como buffer. El azul de metileno es un colorante indicador del estado de xido-reduccin2. Componentes: Tioglicolato de Sodio 1.0 Cloruro de Calcio 0.1 Glicerofosfato de Sodio 10.0 Azul de Metileno 0.002 Agar Bacteriolgico 3.0 PH 7.40.2 Almacenamiento: 2-30C. Caducidad: 4 aos en frasco cerrado. Presentacin: Frasco con 450 g Caja con 20 sobres para un litro

Medio de Transporte AMIES Medio semislido para la recoleccin y transporte de microorganismos a partir de diversas muestras. Puede ser usado para la recuperacin de microorganismos patgenos como Neisserias, Vibrios, Haemophilus, Streptococcus, Salmonellas, Shigellas , etc. Se sugiere el medio de transporte de AMIES en tubo de plstico3.

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

Agar Carbn vegetal Cloruro de calcio Cloruro de magnesio Cloruro de potasio

7.5

Cloruro de sodio

3.0

10.0 0.1 0.1 0.2

Fosfato disdico Fosfato monopotsico Tioglicolato de sodio

1.15 0.2 1.0

Frmula en Gramos por Litro de agua destilada.

Medio de transporte Cary Blair. Medio recomendado para la recoleccin, transporte y conservacin de muestras aptas para estudios microbiolgicos. Es especialmente til para la bsqueda de Vibrio spp. fecales y rectales. A partir de muestras

Frmula (en gramos por litro) Tioglicolato de sodio Fosfato disdico Cloruro de sodio Agar

Instrucciones Suspender 12,6 g del polvo en 991 ml de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Enfriar a 50C y agregar 9 ml de una sol. de CaCl2 al 1% preparada 5.0 recientemente. Ajustar el pH si es necesario. Distribuir y esterilizar 15 minutos a vapor fluente. pH final: 8.4 0.2 1.5 1.1 5.0

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C. Medio preparado: a 2-8 C.4

Medio de transporte suero fisiolgico: Composicin: Cada 100 mL contienen:

Cloruro de sodio Agua para inyeccin c.s. Osmolaridad: 308 mOsmol/L. 0,9 g

Dosis y vas de administracin: La dosis y el promedio administrado va intramuscular o endovenosa son dependientes de las necesidades individuales de cada paciente; pero debern ser controlados para prevenir un rpido incremento de los niveles de sodio en el plasma. La cantidad a ser usada deber ser determinada por prescripcin mdica en cada situacin particular. Formas de presentacin: Frascos por 500 y 1000 mL. Caja x 24 frascos x 500 mL. Caja x 12 frascos x 1000 mL. Condiciones de conservacin y almacenamiento: Almacenar entre 15 y 30 C5.

2 3

Medio de transporte de Stuart: http://www.mcd.com.mx/pdfs/medio_stuart.pdf Medio de transporte Amieshttp://www.lablinsan.cl/pdf/VariedadAmies.pdf 4Medio de transporte Cary Blain: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/caryblairmedtransp.htm 5 Medio de transporte suero fisiolgico: http://bvs.minsa.gob.pe/local/biblio/plm/src/productos/35563_91.htm

Objetivos generales Identificar y analizar los microorganismos que forman parte de nuestra microbiota humana y ambiental. Objetivos especficos

Identificar a travs de la tincin Gram las bacterias encontradas en las personas y el medio ambiente. Reconocer los efectos que producen algunas bacterias ya sean con los que vivimos normalmente como tambin los patgenos o que nos puedan causar alguna enfermedad.

Materiales y mtodos Medios de transporte: Suero fisiolgico. Guantes. Placas de agar sangre. Placas de agar Sabouraud. Asas de cultivo. Gradillas. Fsforos. Mechero. Lpiz dermatogrfico. Plumones para vidrio. Papel kraft cortado. Portaobjetos. Tincin de Gram. Aceite de inmersin. Microscopio. Timer. Alcohol ter. 3 Trulas con medio de transporte. Pinza de madera. Recipiente para desperdicios (de vidrios y basura comn).

Microbiota humana. Realizar toma de muestras de secrecin nasal y pabelln auricular siguiendo la pauta a continuacin. o Utilizar 2 Trulas estriles con medio de transporte. o Rotular cada trula (indicando nombre, fecha y especificando el tipo de muestra).

o La toma de muestra de secrecin nasal se realiza de la siguiente manera: Rotar la trula por el vestbulo de ambas fosas nasales (tabique, cara interna de aletas nasales), tocando las paredes de la mucosa. Repetir procedimiento en la otra fosa nasal con la misma trula y ponerla en el medio de transporte.

o La toma de muestra de pabelln auricular se realiza de la siguiente manera: Rotar la trula por el canal auditivo hasta topar fondo y girar suavemente y ponerla en el medio de transporte. Sembrar las muestras en agar sangre y agar Sabouraud, utilizando la mitad de cada placa para secrecin nasal y la otra mitad para pabelln auricular.

Incubarlas en la estufa de cultivo por 24 a 48 horas. Una vez lista las muestras, realizar tincin Gram de la siembra realizada en la placa de agar sangre y observarla en el microscopio.

Microbiota ambiental. Recolectar una muestra del suelo del laboratorio, pasando una trula estril en un sitio especfico escogido por el grupo.

Sembrar la muestra en agar sangre y agar Sabouraud e incubarlas en la estufa de cultivo por 24 a 48 horas.

Una vez lista las muestras, realizar tincin Gram de la siembra realizada en la placa de agar sangre y observarla en el microscopio.

Resultados

Secrecin nasal
Agar sangre - Crecimiento incontable de colonias. - Tamao: medianas, grandes y pequeas. - Color: crema - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevacin: chata - Borde: entero Agar Sabouraud - Crecimiento incontable de colonias. - Tamao: pequeas. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevacin: chata - Borde: entero

Pabelln Auricular
Agar sangre
- Crecimiento incontable de colonias. - Tamao: medianas y grandes. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevacin: convexa - Borde: entero

- Crecimiento de 1 colonia. - Tamao: grande - Color: amarilla - Presencia de olor: si - Superficie: lisa - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevacin: convexa - Borde: entero - Crecimiento de 1 colonia. - Tamao: grande - Color: caf y en sus bordes rojo - Presencia de olor: si - Superficie: lisa - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevacin: umbonada - Borde: entero

Agar Sabouraud - Crecimiento incontable de colonias. - Tamao: pequeas. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevacin: chata y umbonadas - Borde: entero

Muestra de suelo
Agar sangre - Crecimiento de 15 colonias. - Tamao: grandes - Color: verde musgo - Presencia de olor: si - Superficie: granular - Densidad: opaca - Forma: circular-irregular - Elevacin: chata-elevada - Borde: ondulado Agar Sabouraud - Crecimiento de seis colonias. - Tamao: medianas - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevacin: umbilicada - Borde: entero

Tincin Gram
Muestra de suelo Se observan bacilos Gram (+) a travs del microscopio. Muestra secrecin nasal Se observan cocaceas Gram (+) a travs del microscopio.

Discusin

De acuerdo a lo obtenido en las muestras procedentes de superficies mucocutneas en este caso de pabelln auricular y secrecin nasal, se observ crecimiento en las placas de cultivo en lo que evidenciamos la presencia de una flora existente en nuestro cuerpo. Constatamos crecimiento incontable de variadas formas y tamaos de colonias en ambos cultivos en los diferentes agares donde cabe mencionar el excesivo tiempo de incubacin a lo que estas fueron sometidas, atribuyndole las evidentes discrepancias de las formas de las colonias resultantes; le practicamos tincin Gram a la muestra de secrecin nasal en el que result bacilos Gram positivos, se esperaba este resultado ya que segn el marco terico forma parte de la microbiota humana normal. Lo obtenido de las muestras de superficies inanimadas precedente del suelo del laboratorio de microbiologa en nuestro grupo, figura variadas colonias con diversas formas y presencia de olor y beta hemolisis caracterstico de bacterias patgenas6 , la tincin Gram practicado a una colonia al azar, dio Cocaceas Gram positivas, estas pudieron haber llegado a ese lugar por el arrastre que se hace al lavarse las manos, ya que la muestra fue obtenida en el rea de lavado de manos, en el cual ciertamente es un ambiente propicio para que estas pudieran vivir un tiempo hasta la desinfeccin del suelo.

Diccionario Mosby - Medicina, Enfermera y Ciencias de la Salud, Ediciones Hancourt, S.A. 1999.

Conclusin.

En la cavidad nasal de nuestra compaera pudimos demostrar fehacientemente mediante los cultivos, la presencia de una flora bacteriana a la que atribuimos a la microbiota normal que se posee, y esta se define como el conjunto de microorganismos que habitan habitualmente la piel y las mucosas de las personas sanas7, a la cual le hicimos tincin Gram, resultando Bacilos Gram positivos, perteneciente a la microbiota normal segn la teora, esto nos lleva a pensar en la interaccin entre la microbiota y el ser humano, aun siendo bacterias, estas pueden ser beneficiosas un claro ejemplo es que forman parte de nuestro sistema inmunolgico, pero igualmente podra darse algn cambio en el equilibrio que las mantiene as y se transformaran en agentes oportunistas resultando en alguna patologa. La siguiente muestra, de superficie inanimada, la extrajimos del suelo en la zona de lavado de manos del laboratorio de microbiologa, en la que corroboramos que en los cultivos hubo un crecimiento moderado de colonias, adems hicimos tincin Gram a la muestra en la placa de agar sangre previamente incubada y se obtuvo como resultado bacterias Cocaceas Gram positivas, lo cual nos lleva a pensar que lo ms probable es que hayan llegado por arrastre debido a la alta concurrencia de personas (profesores, alumnos, auxiliares), lo que nos demuestra una proliferacin y dinamismo de microorganismos siendo lo mas probable que parte de carga bacteriana sea proveniente de nuestra propia microbiota. Es por esto que la Higiene es muy importante; a pesar de que a diario transportamos y convivimos con microorganismos que de cierta manera nos protegen pero as mismo tambin estamos propensos a infecciones por contaminaciones de espacios o por agentes patgenos provenientes del aire que entran por las cavidades que estn en contacto con el medio ambiente.

MICROBIOTA. (2013) Gua de Microbiologa General Trabajos Prcticos Tecnologa Mdica.

Bibliografa.

John L.Ingraham, C. A. (1998). Introduccin a la microbiologa. Barcelona: Revert.S.A. Diccionario Mosby - Medicina, Enfermera y Ciencias de la Salud, Ediciones Hancourt, S.A. 1999. MICROBIOTA (2013). Gua de Microbiologa General Trabajos Prcticos Tecnologa Mdica. Medio Cary Blair: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/caryblairmedtransp.htm Medio AMIES: http://www.lablinsan.cl/pdf/VariedadAmies.pdf Medio Stuart: http://www.mcd.com.mx/pdfs/medio_stuart.pdf Medio Suero Fisiolgico: http://bvs.minsa.gob.pe/local/biblio/plm/src/productos/35563_91.htm