UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIAPAS CENTRO DE BIOCIENCIENCIAS CAMPUS IV

BIORREACTORES

MATERIA BIOINGENIERA 5 SEMESTRE DE LA CARRERA DE INGENIERO BIOTECNLOGO

INTRODUCCIN Desde hace miles de aos el hombre ha utilizado mtodos biolgicos para producir y conservar sus alimentos, para obtener productos que ayuden a mejorar su salud o le procuren un gusto. En la actualidad, todos estos procesos empricos de antao, se realizan con microorganismos seleccionados y mejorados, medios de cultivo que les proporcionan los nutrientes necesarios y bajo condiciones controladas. Fermentacin es.........

LOTE

MICROORGANISMOS + NUTRIENTES + T, PH, Esterilidad, CONDICIONES

etc.

CONTINUA AEROBIA

ANAEROBIA

Figura 1 Un biorreactor es un aparato en el que son tratados materiales para facilitar las transformaciones bioqumicas por la accin de las clulas vivas o por componentes celulares, como enzimas, in vitro o como parte principal de cualquier proceso biotecnolgico (ver pgina siguiente) en el que se emplean sistemas microbianos o sistemas celulares mamferos o plantas para la obtencin de una gran variedad de productos biolgicos tiles. (Ver pgina con algunos productos de la fermentacin). Aunque los sistemas basados en los cultivos de clulas de plantas o de animales son normalmente mencionados en la literatura como cultivos de tejido mientras que los basados en cultivos dispersos de microorganismos, que no forman tejidos (bacterias,

levaduras y hongos), son conocidos vagamente como reactores microbianos (biorreactores o fermentadores). El biorreactor debe ser concebido en funcin del proceso que se debe realizar adems debe permitir un contacto tan bueno como sea posible entre las dos fases, bitica abitica del sistema propiciando de sta manera la transferencia entre las clulas y el medio de cultivo. En el caso de los procesos aerobios, una caracterstica muy importante del biorreactor es su capacidad para transferir a la biomasa microbiana que contiene, la porcin de oxgeno que necesita.(Fig. 2). nicamente el oxgeno disuelto es utilizado por las clulas y debido a que este gas es poco soluble en agua hace difcil mezclar tres fases o mas: una fase acuosa (medio de cultivo), una fase gaseosa (aire comnmente) y la fase bitica constituida por la biomasa microbiana.

RECIPIENTE AGITADOR MEDIO DE CULTIVO MICROORGANISMOS AIRE

Figura 2 Biorreactor El buen funcionamiento de un biorreactor depende de:

Concentracin de biomasa (alta) Condiciones estriles Distribucin efectiva de substrato y microorganismos 3

Disipacin de calor Condiciones adecuadas de velocidad

Aunque algunas fermentaciones se efectan anaerbicamente, muchos procesos son aerobios (Fig. 3), que requieren grandes volmenes de aire estril, en los cules es el gas de oxigenacin el que crea la turbulencia que permite la suspensin homognea de las clulas. La agitacin ya sea producida por un elemento externo (agitador) o no, permite adems de mejorar la transferencia de oxgeno, evitar que las clulas creen reas estancadas con bajos niveles de oxgeno y nutrientes. TIPOS DE BIORREACTORES Los biorreactores pueden ser ms o menos complejos en su diseo, segn el tipo de cultivo al cual se destinan. Ciertas fermentaciones tradicionales, como la alcohlica, se llevan a cabo en cubas rectangulares o cilndricas descubiertas, donde la homogeneidad en la cuba se obtiene por el desprendimiento gaseoso debido al proceso mismo. Aparecieron despus cubas cubiertas, que permiten la recuperacin del gas y reducen los riesgos de contaminacin. BIORREACTORES DE PRODUCCIN INDUSTRIAL No agitados sin aereacin No agitados con aereacin Agitados con aereacin 86% 11% 13%

La mayora de los procesos de fermentacin requieren de recipientes cerrados capaces de operar en condiciones de cultivo puro. Debido a los avances tecnolgicos la geometra de la cuba ha ido evolucionando. A nivel de laboratorio y de planta piloto existen muchos tipos de biorreactores, pero a escala industrial, existen cuatro tipos principalmente para fermentaciones aerobias: Tanque agitado 4

 Columna burbujeadora Air-lift Waldhof

Biorreactor de Tanque Agitado

Los biorreactores de tanque agitado han sido los mas estudiados y su configuracin se ha estandarizado, para que en funcin de sus relaciones, se lleve acabo su diseo y escalamiento.

Para obtener mejor contacto lquido gas se requiere frecuentemente de la agitacin mecnica, por lo que este tipo de biorreactores son muy utilizados, en fermentaciones en las que, el esfuerzo cortante no daa la fase bitica. Este tipo de biorreactor est equipado con un sistema de agitacin central o algunas veces en otra posicin, en cuyo eje van instalados uno o ms rodetes. Existen rodetes de diferentes tipos, los cules generan diferentes flujos dentro de la cuba, los ms utilizados en fermentacin son los de tipo turbina, que generan flujos radiales. Debido a la forma de este tipo de biorreactor (normalmente cilndrica), con la agitacin se provoca la formacin de un vrtice, que se evita con la adaptacin de deflectores o contra-palas verticales instalados en las paredes del recipiente.

La figura anterior utiliza la siguiente nomenclatura: 6

Dt = Dimetro del biorreactor Di = Dimetro del agitador Hb = Altura del fondo al agitador Hl = Altura del lquido Ab = ancho de la contrapala Li y Ai = Ancho y alto de las paletas del rodete El volumen de lquido ( Dt2 Hl)/4 o volumen de operacin es igual a 0.75 a 0.60 del volumen total [Vt = (Dt2 Ht)/4], en una configuracin estandar Dt /Hl = 1 y por lo tanto Vl = Dt3/4, a medida que la escala aumenta la relacin se hace mayor que 1 (aunque se siga utilizando el mismo % del Vt). Tipos de Agitadores La finalidad de la agitacin en un birreactor es: 1. 2. 3. 4. Dispersar el aire en la solucin de nutrientes Obtener una temperatura y una concentracin de nutrientes en todo el recipiente Suspender los microorganismos y nutrientes slidos dispersar cualesquiera de los lquidos inmiscibles presentes

De acuerdo al tipo de agitador sern los flujos que se originaran dentro del biorreactor,

Los agitadores se dividen en dos clases: los que generan corrientes paralelas al eje del agitador y los que dan origen a corrientes en direccin tangencial o radial. Los primeros se llaman agitadores de flujo axial (ver fig.5-9) y los segundos, agitadores de flujo radial. Los tres tipos principales de agitadores son, de hlice, de paleta, y de turbina. El agitador de hlice o propulsor usualmente tiene tres paletas genera un flujo axial, opera a velocidad elevada y se emplea para lquidos poco viscosos. Las palas de la hlice cortan o friccionan vigorosamente el lquido, El tipo de turbina Rushton consta de varias paletas o palas sujetas a un eje central, el dimetro de una turbina est normalmente entre 30 y 50 % del dimetro del tanque y por lo general tiene entre cuatro y seis paletas, cuando se encuentran slidos presentes como en una fermentacin se encuentra que es til un componente axial para mantener los slidos en suspensin por lo que se usa una turbina de paletas con un ngulo de paleta de 45.

Biorreactor de Columna Burbujeadora Los biorreactores de columna burbujeadora o de torre son agitados

pneumticamente. Estos pueden mostrar amplias variaciones en el comportamiento con la relacin altura-dimetro. En este tipo de biorreactor la fase gaseosa sube a travs de la fase lquida en flujo tapn bajo la accin de la gravedad. Han aparecido varios biorreactores de este tipo que incluyen elementos internos para aumentar la velocidad de transferencia de masa. Estos incluyen placas perforadas, empaques etc., instalados a lo largo de la columna.

Biorreactor Air-Lift Los biorreactores Air-lift operan con menos energa y son capaces de suministrar ms oxgeno, aunque su uso es aun limitado. Las dimensiones y las relaciones geomtricas para un fermentador tipo Air-lift son:

L1/D1 = 10-15 L2 L1 L2/L1 = 0.9-0.6 D1/ D2 = 2-1.8 D2 D1 Biorreactor Waldohof Los biorreactores Waldohof pretenden mejorar la circulacin en el interior de la cuba, para ello cuentan con un cilindro o tubo de circulacin que cuenta con una turbina de agitacin colocada en la base del tubo, pero arriba del dispositivo de introduccin de gas de aireacin, que rompe las burbujas, lo que provoca una disminucin de la densidad aparente del medio de fermentacin en la parte perifrica de la cuba. El medio de fermentacin es entonces arrastrado de abajo hacia arriba en esta parte de la cuba y cae en el cilindro. La masa de fluido en movimiento arrastra las burbujas de gas. Esto permite aumentar el tiempo de residencia en la masa lquida y por lo tanto mejora la transferencia de oxigeno.

Los biorreactores pueden ser utilizados en lote (un solo biorreactor) o en forma continua (biorreactores conectados en serie). La mayora de las fermentaciones industriales se llevan a cabo en lote, se inocula el medio, el cultivo se multiplica, se recoge el producto y las clulas se desechan al final del proceso. 10

DETERMINACIN EXPERIMENTAL DE LA TRANSFERENCIA DE OXGENO EN UN BIORREACTOR La medicin de KL a coeficiente volumtrico de transferencia en un biorreactor permite evaluar su capacidad de transferencia de oxgeno o su productividad, dependiendo este coeficiente de las caractersticas fsicas y operacin del biorreactor. Todos los mtodo se basan en un balance de oxgeno ya sea en todo el sistema o de la fermentacin en particular. dC/dt = KL a (C*- CL) - QO2X donde: dC/dt = Tasa de la concentracin de oxgeno disuelto (mMO2/L h) C* = Concentracin de saturacin de oxgeno disuelto (mMO2/L) CL = Concentracin de oxgeno disuelto en el tiempo t (mMO2/L) KL a = Coeficiente de transferencia de masa (h-1) QO2X = Demanda de oxgeno (mMO2/L h) QO2 = Demanda especfica de oxgeno (mMO2/g clulas h) X = Concentracin celular (g clulas/L) MTODOS INDIRECTOS Se denominan as porque se llevan acabo en sistemas donde no se esta efectuando una fermentacin: dC/dt = KL a (C*- CL) 1. 2. 3. 4. Oxidacin de sulfito Tcnica de Eliminacin de gas mtodo esttico Microbiolgico Glucosa-Oxidasa MTODOS DIRECTOS Se realizan con fermentaciones reales, tanto en batch lote como continuas, siendo un instrumento muy til tanto en la operacin como en el escalamiento de un biorreactor. 1. Tcnica Dinmica 2. Balance Gaseoso

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Mtodos Indirectos Mtodo de Oxidacin del Sulfito: La capacidad de un biorreactor para absorber oxgeno burbujeando aire a travs de una solucin acuosa de algn agente reductor como el sulfito de sodio es comnmente utilizado para este propsito. Como este mtodo es una simulacin y no se disuelve oxgeno sino que reacciona (CL = 0), adems de que no existen clulas (QO2X = 0) porque es un mtodo indirecto, la ecuacin de flujo de oxgeno queda: dC/dt = KL a C* donde: dC/dt = Velocidad de oxidacin del sulfito = m A N/ Vm m = Pendiente de la recta (mL de titulante contra tiempo) (mL de tiosulfato/h) A = Factor de conversin 0.25 (m moles de oxgeno/m eq) N = Normalidad del titulante (m eq./mL de tiosulfato) Vm = Volumen de la muestra (mL)
Cu++

2 Na2SO3 + O2 2Na2SO4
Co++

Na2SO3 + I2 + H 2O Na2SO4 + 2HI

Almidn

2Na2S2O3 + I2 Na2S4O6 + 2NaI

como catalizador

La tcnica usual es la siguiente: Se coloca en el biorreactor una solucin de sulfito de sodio, entre 0.1 y 1 N, con una concentracin de Cu SO4 mayor de 1 mM: se ajusta el flujo de aire y la velocidad del impulsor y se empiezan a tomar muestras peridicamente. Las muestras deben de guardarse en botellas llenas y bien selladas o combinarse con yodo en exceso, titulndose el yodo en exceso con tiosulfato de sodio. Factores que afectan esta medicin: 1. 2. 3. 4. Pureza y [ ] del sulfito Catalizador y su [ ] El pH Tipo de equipo utilizado Desventajas Los valores obtenidos por esta tcnica son en general mayores que los medidos por otros mtodos. Costos muy altos para biorreactores grandes

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Tcnica de Eliminacin de gas mtodo esttico

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T DO2 T DO2 T DO2 T DO2 T (C) (PPM) (C) (PPM) (C) (PPM) (C) (PPM) (C) 0 14.57 1 14.17 11 10.99 21 8.88 31 7.42 41 2 13.79 12 10.74 22 8.71 32 7.30 42 3 13.43 13 10.50 23 8.55 33 7.18 43 4 13.08 14 10.27 24 8.39 34 7.07 44 5 12.74 15 10.05 25 8.24 35 6.95 45 6 12.42 16 9.83 26 8.09 36 6.84 46 7 12.11 17 9.63 27 7.95 37 6.73 47 8 11.81 18 9.43 28 7.81 38 6.63 48 9 11.53 19 9.24 29 7.68 39 6.52 49 10 11.26 20 9.06 30 7.55 40 6.42 50

DO2 (PPM) 6.32 6.22 6.13 6.03 5.94 5.84 5.75 5.66 5.57 5.48

Tabla 1. Correspondiente a la cantidad de oxgeno disuelto en agua (DO2 (PPM) mg/L) al 100 % de saturacin a diferentes temperaturas.

Ha x 10-4, atm/fraccin molar T (C) O2 CO H2 NO N2 CO2 0 2.55 3.52 5.79 1.69 5.29 0.0728 10 3.27 4.42 6.36 2.18 6.68 0.104 20 4.01 5.36 6.83 2.64 8.04 0.142 30 4.75 6.20 7.29 3.10 9.24 0.186 40 5.35 6.96 7.51 3.52 10.4 0.233 50 5.88 7.61 7.65 3.90 11.3 0.283 60 6.29 8.21 7.65 4.18 12.0 0.341 70 6.63 8.45 7.61 4.38 12.5 80 6.87 8.45 7.55 4.48 12.6 90 6.99 8.46 7.51 4.52 12.6 100 7.01 8.46 7.45 4.54 12.6

Aire 4.32 5,49 6.64 7.71 8.70 9.46 10.1 10.5 10.7 10.8 10.7

Tabla 2 Constantes de la Ley de Henry para varios gases en el agua Pa = Ha Xa en donde: Pa = Presin parcial de soluto a en la fase gaseosa en atm Xa = Fraccin molar del soluto a en la fase lquida Ha = Constante de la ley de Henry atm/fraccin molar

PROBLEMARIO DE BIOINGENIERA
Biorreactores de tanque agitado

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1.- Un tanque de 1.2 m de dimetro y 1.8 m de altura se llena a una altura de 1.2 m con un medio de cultivo que tiene una viscosidad de 1000 cp y una densidad de 750 kg/m 3 . El tanque no posee placas deflectoras. Se instala en el mismo un rodete de 30 cm de dimetro de tres palas y a una distancia de 30 cm del fondo. El paso de hlice es 1:1 (paso de hlice igual al dimetro). El motor de que se dispone desarrolla una potencia de 10 hp. a) Determinar si este motor es adecuado para accionar el agitador con una velocidad de giro de 1000 rpm. b) Calcular la velocidad mxima de giro con que puede accionarse el agitador, si el lquido se remplaza por otro que tiene una viscosidad de 100 cp y la misma densidad. c) Calcular la potencia necesaria para la operacin de mezcla, si se utiliza un rodete de 30 cm de dimetro con un paso de hlice 2:1 (paso de hlice igual a dos veces el dimetro) y se instalan cuatro placas deflectoras, cada una de 12 cm de ancho. d) Si se sustituye el agitador de hlice por una turbina de 6 palas, y el lquido que se ha de agitar es un lquido pseudoplstico que sigue la ley de la potencia cuya viscosidad aparente es de 1500 cp cuando el gradiente de velocidad es de 10 s -1. Calcular la velocidad de giro de la turbina de forma que suministre 5 hp por cada 4000 L de lquido. 2.- Disee un fermentador piloto de 550 L para los siguientes requerimientos: Viscosidad de 0.01 a 100 cp Densidad de 50 a 75 lb/ft3 Geometra estndar 20% de prdida de potencia del motor en sellos, conexiones, etc. El motor deber operar de 0 a 300 rpm Volumen de operacin, aproximadamente 70% Indique las relaciones geomtricas y el tamao del motor elctrico requerido. 3.- Un tanque de 100 000 L (volumen total) con un motor de 200 kW opera a 76 rpm, se desea emplear inicialmente un sustrato cuya viscosidad es 100 000 cp; el motor no es de velocidad variable. Es posible emplearlo? Por qu? Qu cambios pueden sugerirse para que sirva? 4.- Se desea agitar un lquido que tiene una viscosidad de 1.5 X 10 -3 Pa.s y densidad de 969 kg/m3 en un tanque de 0.91 m de dimetro. El agitador ser una turbina abierta de seis aspas con un dimetro de 0.305 m, que opera a 180 rpm. El tanque tiene cuatro deflectores verticales, todos ellos con una anchura J = 0.076 m. Calclense los kW necesarios. 5.- En un tanque agitado se instala un agitador de turbina de aspas planas. El dimetro del tanque mide 1.83 m el dimetro de la turbina 0.61 m, y el ancho del aspa de 0.112 m. El tanque tiene cuatro deflectores, todos ellos con un ancho w = 0.15 m. La turbina opera a 90 rpm y el lquido en el tanque tiene una viscosidad de 10 cp y densidad de 929 kg/m3. a) Calclense los kW requeridos para el mezclador

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b) Con las mismas condiciones(excepto que la solucin tiene ahora una viscosidad de 100 000 cp), vulvase a calcular la potencia requerida. 6.- Un fermentador de 30 000 L (volumen de operacin 20 000 L) se emplea para la produccin de levadura. El sistema tiene dos impulsores, y la relacin altura/dimetro del tanque es 2. Se usan turbinas de seis aspas planas con relaciones estndar. Los agitadores operan a 50, 70 y 85 rpm y las velocidades de aireacin son 200 y 300 m3/h. a) Calcule la potencia (sin aireacin) requerida a diferentes velocidades de agitacin. Exprese su respuesta en hp/1000 galones, y diga cul es el tamao de motor requerido. b) Calcule la potencia con aireacin usando la correlacin del nmero de aireacin, Na, as como la de Michel y Miller. Cul puede ser una causa de las diferencias? 7.- En un biorreactor de tanque agitado de 1.83 m de dimetro se instala un agitador de turbina de disco con seis aspas de 0.61 m de dimetro y 0.122 m de ancho de aspa (w). El tanque tiene cuatro deflectores, todos ellos con un ancho de J = 0.15 m. La turbina opera a 90 rpm y el lquido en el tanque tiene una viscosidad de 10 cp y densidad de 929 Kg/m3.
a) Calclense los Kw. requeridos para el mezclador b) Con las mismas condiciones (excepto que la solucin tiene ahora una viscosidad de

100 000 cp), vulvase a calcular la potencia requerida. 8.- Se desea agitar un lquido que tiene una viscosidad de 1.5 Pa s y densidad de 969 Kg/m 3 en un tanque de 0.91 m de dimetro. El agitador ser una turbina abierta de seis aspas con un dimetro de 0,305 m. que opera 180 rpm. El tanque tiene 4 deflectores verticales, todos ellos con una anchura de 0.076 m. Calcula los kw necesarios. (Np = 2.5, potencia = 0.17 kw o 0.23 hp) 9.- Se considera un tanque de fermentacin de un metro de dimetro, equipado con una turbina de disco. El tanque dispone de pantallas deflectoras y las proporciones geomtricas son los estndares. Para un proceso concreto se establece la utilizacin de un medio de cultivo con una densidad de 1100 Kg. /m 3, y una viscosidad de 0.01 Kg. /m s. Las condiciones de operacin vienen fijadas por un caudal de aeracin de 0.7 vvm y una velocidad de agitacin de 250 rpm. Calcular los requerimientos de potencia del sistema sin aeracin, la potencia para el sistema con aire y la retencin de gas (g). Clculo de KLa 1.- En un fermentador de 5 L se hizo la prueba del sulfito para determinar el K la. El experimento se realiz a las siguientes condiciones: Temperatura del aire Temperatura del agua del fermentador Flujo de aire Volumen del lquido Velocidad de agitacin 29 C 30 C 1 VVM 3L 300 rpm 16

Normalidad del tiosulfato usado En la titulacin

0.5 N

Las muestras se tomaron de 5 mL cada 5 minutos, y se obtuvieron los siguientes resultados: Muestra nmero 1 tiosulfato usado mL 2 1 Cul es el valor de KLa? 2.- Usando un electrodo de oxgeno disuelto en un fermentador con levadura, se obtuvieron los siguientes resultados con la tcnica dinmica: t(s) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 10 110 12 13 14 15 160 0 0 0 0 0 5.2^ 4. 4. 3. 3. 2. 2. 1.5 0.9^^ 2.8 3.8 4.2 4.4 4.5 7 2 7 1 6 0 2 20. 7 3 20.3 5 4 2 0 5 19. 7 6 19. 3 7 19. 0 8 18. 7 9 18. 7 10 18.7

O2 5. 5. 5. disuelto 2 2 2 (PPM) ^ Se cort aire ^^ Se reinici la aireacin Encuentre usted: KLa, QO2 X, Cg*

3.- Se carga un fermentador de 500 L con un medio de cultivo y se le empieza a introducir aire; la temperatura es de 30 C y el pH de 5. Para determinar K La se emplea la tcnica de eliminacin de gas con nitrgeno, en donde se obtuvieron los siguientes resultados:

t (s)

20 30 40 50 60

70 80 90 100

O2 3. 3. 3. 3. 3. 3.7^ 3. 1. 0. disuelto(PPM) 7 7 7 7 7 2 8 8 ^ Se cierra aire y se abre N2 ^^ Se cierra N2 y se abre aire nuevamente Cul es el KLa?

11 120 13 14 15 160 170 180 190 0 0 0 0 0.15^^ 1.7 2.4 2.9 3.2 3.3 3.4 3.5 3.5 3.61 1 1 2 9

4.- Usando el mtodo del balance de O2 en un fermentador de 9 L, a 29 C que opera a 120 rpm se obtuvieron los siguientes para 0.5 VVM. Tiempo de 0 fermentaci n Oxgeno disuelto ppm O2 en el aire 2 1 5.90 20.9 2 5.85 20.9 3 5.70 20.8 4 5.42 20.7 5 5.00 20.5 6 4.40 20.4 7 3.72 20.1 8 2.80 19.6 9 1.65 18.9 10 1.28 18.5 11 1.35 18.7 17 12 1.92 19.3

de salida

Determine el valor de kL.a. 5.- Las dimensiones de un fermentador equipado con 2 juegos de turbina de 6 palas planas y con 4 pantallas deflectoras son: Dimetro del fermentador: 3 m Dimetro del agitador: 1.5 m Anchura de pantalla: 0.3 m Altura de lquido: 5 m

La densidad y viscosidad del medio de fermentacin son las siguientes: : 1200 Kg./m3 : 0.02 kg/m s La velocidad de agitacin es de 60 rpm y el caudal de aeracin es de 14.1 m3/min. Para un agitador de estas caractersticas se cumple la ecuacin: KLa = 20 256 (Pg/V) 0.95 vs0.47 Pg es la potencia en kw V es el volumen en m3 vs es la velocidad superficial del gas en m/s KLa se expresa en kmoles/m3 h atm Calcular:
a) b) c)

La potencia para el sistema sin aeracin La potencia para el sistema con aire El coeficiente de transferencia de oxgeno BIBLIOGRAFA

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