MICROSPORIDIOS

Mara Beltrn Fabin 01 - 4781111-2137

MICROSPORIDIOSIS

Los microsporidios, protoz.unicel. Primit eucariotes, responsb infec. emergentes. *El trofozoto es plamodio multinucleado c/ movimiento. Son parsitos del hombre animales verteb, invert., peces hasta insectos. *Conocidos por Kudo desde 1919, 1200 spp y 143 gneros, de llos 223 son de peces, 8 de anfibios, 4 reptiles, 1 de insectos y annlidos.

Microsporidios
*Son protozoos intracelulares obligados, los microsporidios se encuentran entre los organismos eucariotas ms pequeos. Generan esporas unicelulares de 1,0 a 4,5 m
*En la dcada de 1980 se reconoci como agentes etiolgicos de diarrea en VIH-Sida y posteriormente en trasplantados renales as como en personas inmunocompetentes (diarrea del viajero).

*Se consideran eucariotas primitivos debido a que adolecen de mitocondrias, peroxisomas, membrana de Golgi y otros orgnulos tpicos de los microorganismos eucariotas *Las esporas presentan dos formas de vida en su ciclo biolgico: la espora y el meronte, el que representa la fase vegetativa del parsito *La espora es fase infectante, sus membranas particulares, la exospora protenica y la endospora quitinosa y electrolcida la hacen resistente a los factores ambientales. Esporontes: los procesos de esporogona se inician tan pronto como los merontes se rodean de una capa superficial amorfa.

MICROSPORIDIOS
Espora: Esporociste con 2 estructuras como valvas, el cuerpo citoplasmtico contiene el esporoplasma con 1 vacuola y 2 ncleos y un tubo polar
exospora en endospora Fp base filamento polar c citoplasma cp cpsula polar fp filamento polar N nclo Vp vacuola posterior P plasmodio

ex

Pt = tubo polar, ex = exospora En = endospora, pv = vacuola post. A = disco ancho del filam.polar

MICROSPORIDIOS

Enterocytozoon bieneusi 0.8-1.4 m Encephalitozoon intestinalis = Septata intestinalis, E.hellem, E.cuniculi Nosema corneum = Vitaforma corneum Infeccin ocular N.ocularum, N.connori Microsporidium: M.ceylonensis, M.africanum Pleistophora, Trachipleistophora Brachiola vesicularum Microgemma (peces)

CARACTERISTICAS

Parsito intracelular obligado, son grandes oportunistas, responsables en pacientes c/ infeccin de diarrea crnica. Eucariote primitivo, posee ARN ribosomal tipo bacteriano se multiplica por fisin binaria o divisin mltiple Durante la fase proliferativa las clulas son amorfos, redondeados o alargados con un filamento polar, el nmero de vueltas varia por especie, E.bieneusi 5, E.cuniculi 5-7 y Pleistophora 9-12.

Carecen de membranas la mitocondria y el aparato de golgi

Producen prdidas econmicas para la industria y la pesquera
CICLO BIOLOGICO

Protozoario unicelular, el ciclo consiste en una multiplicacin proliferativa formando esporas en la clula del husped. Las esporas tienen doble pared, la externa es de protena y la interna es quitina

a. Fase infectiva, la espora-- estimulacin-> inoculacin de espora infectante a travs del filamento polar (esporoplasma en la clula) b. Fase proliferacin vegetativa, merogonia (esquizogonia) multiplicacin intracelular del parsito. c. Fase esporogonia intracelular, esporas infectantes, la va principal de contaminacin fecal-oral, es posible por inhalacin, as como las infecciones oculares. esporoplasma--trofozoto--esquizogonia-merozotos--gametogonia

CICLO Enterocytozoon bieneusi

Enterozytozoon bieneusi 1.- Ingestin de esporas x contaminacin 2.- Son resistentes al pH gstrico 3.- Invasin del enterocito inoculando ergastoplasma a partir del tbulo polar 4.- Multiplicacin asexual o esporognica formacin final de esporas A) Las esporas pueden infectar otros enterocitos B) Las esporas pueden liberarse en heces o C) Pueden ingresar por vas respiratorias

1. Espora infectante sobrevive en el ambiente 2. Esporas proyectan el filamento polar, infectan al husped 3. Infeccin ocurre por inoculacin esporoplasma x tubo 4. Hay multiplicacin merogonia 5. Continua la esporogonia, el desarrollo en forma directa al contactoa. forma vacuola parasitofora b. Enterocyt y Enceph

OBTENCION DE LOS ESPOROZOITOS:

SOLUCION Tripsina 0.25% Tauricolato sodio 0.75% Tripsina 0.25% Tauricol.sodio 0.75% Cistena-HCl 0.20 mM

Los ooquistes son incubados a 37C por 2 hs

Vac.parasitofora espora madura

Los

Microscopa Electrnica, las esporas maduras 9-12 nm, las endosporas 40-53 nm una membrana plstica y un poroplasto, el filamento de 6-8 vueltas.

PATOGENICIDAD

*Causan diarrea crnica, E.bieneusi y Encephalitozoon spp * Prdida de peso, anorexia, semejante a Cryptosporidium, en promedio 3 evacuaciones lquidas por da x 4 semanas. *Afecta tubo digestivo, pulmones, conjuntivitis. *Enterocytozoon bieneusi ocurre en 15-35% de pacientes infectados con diarrea crnica, y en pacientes con VIH e inmunocompetentes

*E.hellen y E.cuniculi: sinusitis, nefritis, hepatitis, keratoconjuntivitis y peritonitis

*Causa infeccin diseminada, incluye el tracto gastrointestinal produciendo lesiones en todo el intestino delgado. *En los pacientes de profunda depresin linfocitos CD4 < 50 mm3

*Localizacin extraintestinal, urinaria, sinusitis bronco-pulmonar sinusitis ocular *Pueden infectar hgado, rion, msculo y cerebro
a. Sntomas semejantes Criptosporidiosis b. Sindrorme febril 75.0% a

c. Otros sntomas generales:

Anorexia Astenia Prdida de peso 71.4% 88.2% 86.3%

d. En pacientes con VIH en diarrea severa, hay invasin del pncreas, conducto biliar, tracto respiratorio.

DIAGNOSTICO
*Coloracin Gram-Cromotrope Gram y Giemsa

*El ncleo tiene posicin media. La vacuola posterior ocupa la regin basal, las esporas estn en contacto con el citoplasma del husped. *Biologa molecular 2 pares de primers oligouncletidos de la regin de la subunidad eb RNA (VI, EB 45O y VI, SI 500) E. intestinalis.

Analisis de genoma. El clonamiento y caracterizacin de las diferencias entre el pequeo 3 gen conocidos de cepa E.cuniculi cepa ratn cepa conejo y cepa perro.

E.bieneusi

OBTENCION DE LOS ESPOROZOITOS:

SOLUCION Tripsina 0.25% Tripsina 0.25% Tauricolato de sodio 0.75% Tauricol.sodio 0.75% Cistena en HCl 0.20 mM

Los ooquistes son incubados a 37C por 2 hs

NO OLVIDAR LAS MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

PRUEBAS INMUNOLOGICAS POR IFI BIOLOGIA MOLECULAR

a

*PCR, usando DNA extrado de las heces con 2 sistemas de E.bieneusi y E.cuniculi. Biologia molecular 2 pares de primers oligonucletidos de la regin de la subunidad eb RNA (VI y EB 45O) Y (VI SI 500) E. intestinalis Analisis de genoma. El clonamiento y caracterizacin de las diferencias entre el pequeo gen de 3 de cepa conocidas E.cuniculi cepa ratn cepa conejo y cepa perro

COLORACION
Coloracin gram:

MICROSPORIDIOS
GRAM:

1.0 gr Cristal violeta o violeta de genciana 100 mL de agua destilada Yodo 1 gr 2 gr Ioduro de potasio IK 300 mL de agua Procedimiento: Mezclar IK en agua, aadir el Yodo TRICHROME GOMORI: 6.0 gr Colorante chromotrope 0.15 gr Verde brillante o azul de anilina 0.5 0.7 gr Acido fosfotungstico 3.0 Acido actico glacial 100 mL Agua destilada Procedimiento: Disolver en cido actico, dejar 30 a tC, aadir agua destilada 100 mL, tamponar HCl 1 mL pH 2.5.

COLORACION ZIEHL NEELSEN MOD.

Para coccidios: FUCSINA FENICADA 4g 8 gr 20 mL 1 mL 80 mL

Fucsina Fenol Alcohol 95% Tween 80 o tergitol Agua destilada

Procedimiento: Disolver la fucsina con alcohol, adicionar el fenol adicionar agua destilada

COLORANTE DE CONTRASTE 1 gr Verde malaquita o azul de metileno 100 mL Agua destilada

Encephalitozoon
E.cuniculi A , E.hellen B

E. intestinalis C, Vitaforma sp D

Enterocytozoon bieneusi

Encephalitozoon hellem

PRESERVACION Y O FIJACION DE MATERIAL

1.

AFA

Acetato de sodio 15 g Acido actico glacial 20 mL Formol 40 mL Agua 925 mL 2 Dicromato de potasio 2.5%

EVIDENCIAS LABORATORIO

2000 Presentamos al SOPEPA resumen de microsporidios en hospitales de Lima 2004 Brote de Antamina de 16 personas se encontr 2 casos de microsporidios y 2 de Cyclospora a partir del medio Cary blair, H.nana, G.lamblia se present en el Congreso de Venezuela 2007