Hematologa. Prcticas de laboratorio.

15 de noviembre de 2010

PRCTICA 15: TINCIN DE GIEMSA

Introduccin. La tincin de Giemsa es un mtodo habitual para el examen de frotis sanguneos. Es una tincin diferencial que es capaz de distinguir distintas estructuras celulares segn su afinidad por colorantes bsicos, cidos o mezcla de ellos. Con esta tincin los eritrocitos aparecen de color naranja rosado, los ncleos de los leucocitos de azul prpura, el citoplasma marfil o azul claro, las granulaciones neutrfilas pardo claro o violeta claro, las granulaciones eosinfilas rojo naranja, las granulaciones basfilas azul oscuro a prpura y las plaquetas lila oscuro. Material. o Microscopio. o Portas. o Puente de tincin. o Cubeta para la tincin. o Cristalizador. o Pipetas Pasteur. o Frasco lavador. o Tubos de ensayo. Reactivos y muestras. o Sangre anticoagulada con EDTA o heparina (muestra n). o Colorante GIEMSA, que es una mezcla de azul de metileno + eosina. o Tampn 7,2, compuesto por: Fosfato monopotsico = 0,431 gr. Fosfato disdico + 12 H2O = 1,15 gr. Agua destilada o suero fisiolgico (NaCL 0,9 %) hasta completar 1 litro. o Metanol. o Aceite de inmersin. Ejercicios y/o tcnica. 1- Preparacin del frotis. 2- Fijacin. 3- Tincin. 4- Observar en el microscopio usando el objetivo de 100x. Desarrollo y resultados. Ejercicio 1. Para la preparacin del frotis usaremos un porta de canto liso y otro de canto biselado para realizar la extensin sobre el primero. Se coge una pequea gota de la muestra con una pipeta Pasteur y se pone en un parte del porta, con el otro porta y en una inclinacin aproximada de 45 se coloca en contacto con la gota de sangre y se extiende hacia el otro lado del portaobjetos, tal y como muestra la figura 1.

Jos Luis Nieto Ferrando. jonife@gmail.com

1 Lab. Diag. Clnico. 1

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15 de noviembre de 2010

Fig. 1. Realizacin de un frotis.

Ejercicio 2. Para fijar el frotis hemos de colocarlo sobre el puente de tincin y con una cubeta debajo, a la que aadiremos un poco de agua, y cubrirla con metanol durante 3 minutos. Despus, decantaremos el metanol y dejaremos secar la fijacin ponindola en posicin vertical. Ejercicio 3. Prepararemos el colorante realizando una dilucin 1/10 de colorante con solucin Tampn 7,2 y mezclaremos suavemente (para 2 mL = 200 de colorante y 1800 de Tampn 7,2). Hemos de tener especial cuidado con el filtrado del colorante para que no nos queden grumos que nos puedan confundir a la hora de ver la muestra al microscopio. Para teir usaremos una pipeta Pasteur, y con esta cubriremos el frotis en su totalidad, y lo dejaremos actuar durante 25 minutos. Cuando haya pasado este tiempo decantaremos el sobrante de tinte y lavaremos cuidadosamente la extensin con Tampn 7,2 y lo dejamos secar en posicin vertical. Ejercicio 4. Observamos la extensin al microscopio y se pueden distinguir con bastante claridad los distintos tipos de clulas sanguneas. Conclusiones. Hemos de tener cuidado de hacer suficiente colorante para todas las extensiones que queramos teir, aproximada mente se gasta 1 mL por porta, aunque conviene hacer de sobra. Una vez fijada la muestra se puede teir al cabo de unos das, y si la hemos teido, ya se puede observar cuando queramos.

Jos Luis Nieto Ferrando. jonife@gmail.com

1 Lab. Diag. Clnico. 2