PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

O La extracción de colágeno a partir de a partir de

pieles de cerdo, pescado, ovino, huesos de ovinos
es un proceso costoso y con alto impacto
ambiental.
O Las escamas de pescado son fuente rica en
colágeno.
O En el Perú las escamas de pescado son descartadas
en los mercados como desperdicio.
O Se propone determinar un procedimiento que
permita producir gelatina a partir de las
escamas de pescado.
 ANTECEDENTES
Elaboración de biopelicula Obtención de colágeno de
a partir de las escamas, escamas de pescado y
espinas y piel de Mojarra, Biocompatibilidad.
TITULO Tilapia
(Oreochromis niloticus

Hernandez Ramire,Daniel; Sáenz Serrano, Nancy

Gonzales Toto,Jorge.
AUTOR

Limpieza Limpieza
METODOLOGIA -Extracción del colágeno: -Extracción del colágeno:
Desmineralización Desmineralización
Hidrolisis en medio básico Secado
Solubilización del Irradiación
colágeno
OBJETIVOS

GENERAL: Desarrollar un procedimiento económico y de alto rendimiento para

la obtención de gelatina a partir de las escamas de pescado.

ESPECIFICOS:
-Aprovechar un desecho de la pesca artesanal e industrial, que se encuentra en
mercados de abasto, que actualmente contribuye a contaminar el ambiente.
-Promover la producción nacional de gelatina y colágeno.
DETALLES EXPERIMENTALES
MÉTODO 1 MÉTODO 2

LIMPIEZA
Se utilizaron escamas del pez Lorna (Sciaena deliciosa).Se lavan en agua
con sal (durante un día). Luego se enjuagan y dejan secar al ambiente (El
mismo procedimiento de limpieza se aplica en cada método)

PARA LA EXTRACCIÓN DEL COLÁGENO

DESMINERALIZACIÓN DESMINERALIZACIÓN
METODOLOGÍ  Usando EDTA  Usando HCl y solución de
A HIDRÓLISIS EN MEDIO BÁSICO fosfato
 Usando NaOH SECADO
SOLUBILIZACIÓN EN MEDIO  Temperatura ambiente
ÁCIDO
 Usando solución de ácido acético
PRECIPITACIÓN SALINA
 Usando NaCl
SECADO
 Temperatura ambiente
 MÉTODO 1
• Se deja las escamas
DESMINERALIZACIÓN con EDTA 0,1 M Precipitado:
durante una semana. colágeno

• Se deja en
HIDRÓLISIS EN NaOH 0.5 N
MEDIO BÁSICO
(durante una
semana)

SOLUBILIZACIÓN • Dejar reposar con

DEL COLÁGENO ácido acético
durante una
El precipitado semana.
se disuelve
PRECIPITACIÓN SALINA
(se deja reposar por un día
con NaCl 0.1 N)
El precipitado
se restaura
MÉTODO 2

DESMINERALIZAC LAVADO
IÓN SECADO
• Se deja con HCl • Se lava con la • Se dejo secar a
0.5 N(durante solución temperatura de
dos días) amortiguadora ambiente.
de fosfato de
PH=7,4.
 DISCUSIÓN Y RESULTADOS

OBTENCIÓN DE GELATINA A PARTIR DE ESCAMAS

O La ventaja de la obtención de gelatina a partir de escamas

en lugar de piel es que las escamas son materia prima casi
pura: se componen sólo de mineral hidroxiapatita y
colágeno, no hay material celular ni grasas.
O Esto hace posible un método de extracción mas sencillo,
menos contaminante y mas económico.
PASOS PARA LA OBTENCIÓN
INDUSTRAIL DE GELATINA

MÉTODO
La gran cantidad1 de
DEpasos
OBTENCIÓN
se debe a que la
materia primaDE es
GELATINA
muy impura (tejido,
grasa, otras proteínas, etc.)
Desmineralización

Hidrólisis en medio básico

Solubilización en medio ácido

Precipitación salina

La cantidad de pasos es mucho

menor
 MÉTODO 1
EL EDTA COMO AGENTE DESMINERALIZANTE DE LAS ESCAMAS

O El EDTA actúa como agente quelante, capturando el Ca 2+ y

removiendo la capa externa mineral, dejando las escamas más
flexibles y transparentes.
O Esto hace posible que el NaOH pueda atacar a la capa interna de
colágeno, desprotegida.
 DISPOSICIÓN DE LA
HIDROXIAPATITA EN LAS FIBRAS
DE COLÁGENO
O Alrededor de 1/3 del
peso de las escamas
(liberadas de la capa
externa) proviene de
mineral hidroxiapatita.
O La principal dificultad
para la extracción de
colágeno de las
escamas es la gran
compactación de las
fibras.
 DIFICULTAD EN LA DESMINERALIZACIÓN

O Las fibras de colágeno parcialmente mineralizadas se hallan

fuertemente compactadas, y protegen así el mineral
interior, requiriendo por tanto cierto tiempo de tratamiento
con NaOH para la desmineralización total.

Fibras fuertemente
compactadas, cubren
las zonas
mineralizadas
 SEPARACIÓN DE LAS FIBRAS DE
COLÁGENO
Hidroxiprolina de
O El tratamiento con NaOH una hélice de
colágeno
produce primero una
hinchazón: Los OH
separan los puentes de
hidrógeno y la triple
hélice se desarma.

Puente de
Triple hélice hidrógeno
de colágeno
Hidroxiprolina de
otra hélice de
colágeno
 HIDRÓLISIS BÁSICA
O Posteriormente, los Enlace peptídico
iones hidroxilo (OH)
del NaOH destruyen
los enlaces peptídicos,
rompiendo las
cadenas e
hidrolizando el Enlace peptídico roto
colágeno.
 DISOLUCIÓN Y PRECIPITACIÓN DEL
COLÁGENO
O Se conoce experimentalmente que el colágeno hidrolizado
(no el colágeno entero) es soluble en medio ácido (ácido
acético). El ácido acético genera rupturas en los enlaces
entre cadenas de colágeno (Davison et al., 1972).
O El colágeno hidrolizado en solución precipita con una
concentración elevada de NaCl (salting out).

Salting out: precipitacion de proteínas disueltas,

por altas concentraciones de sal
MÉTODO 2
TRATAMIENTO EN MEDIO ÁCIDO
O El fundamento de este
método es la alta
solubilidad de la
hidroxiapatita en medio
ácido.
O El colágeno entero
parcialmente
mineralizado es muy
poco hidrolizable (y por
tanto muy poco soluble)
en medio ácido.
RESULTADOS DEL MÉTODO 1
O SOLUBILIDAD

SOLUBLE INSOLUBLE
• Glicerol • Alcoholes
• Acetona
• Benceno
• Éter de petróleo
O PROPIEDADES FÍSICAS

-Es un sólido inodoro,

insípido ,
transparente,
quebradizo, vítreo, de
color amarillo muy
pálido .
PUNTO DE FUSIÓN
O Punto de fusión
teórico=35 OC

O Punto de fusión
experimental=38OC
O PUNTO ISOELECTRICO
N DE AGUA CH3COO CH3COO CH3COOHNa SOLUCION
TUBO H H (0.1 M) DE PH
S (0.01 M) (0.1 M) GELATINA
(MÉTODO
1)
1 3.8 0.8 -------- 2.0 2.0 5.6

2 3.5 0.5 --------- 2.0 2.0 5.3

3 3.0 1.0 ---------- 2.0 2.0 5.0

4 2.0 2.0 ---------- 2.0 2.0 4.7

5 4.0 ----------- 2.0 2.0 4.4

-------
-
6 3.2 ---------- 0.8 2.0 2.0 4.1
N° TURBIDEZ PH
TUBO (NTU)
1 9.9 5.6
pH en el que
2 14.4 5.3 precipita la proteína

3 26.4 5.0

4 21.2 4.7 Tipo de gelatina Punto

isoeléctrico
5 15.5 4.4
Gelatina A 6 – 9,5
6 22.5 4.1 Gelatina B 4,5 – 5,6
O MUESTRA1 - O MUESTRA 2 -
GELATINA EN OBTENIDA DEL
HOJUELAS MÉTODO 2
(ESTÁNDAR)

Ambas muestras se han llevado al espectrómetro infrarrojo

ESTRUCTURA DEL ENLACE
PEPTÍDICO EN COLÁGENO
Picos IR:
• Amida A
• Amida B
• Amida II

Picos IR:
• Amida I

R1 y R2 son restos glicina, prolina e hidroxiprolina

O MUESTRA 1 (GELATINA EN HOJUELAS –
ESTÁNDAR)
Cα-N (enlace del carbono α de los
aminoácidos con su respectivo grupo
amino

Amida A (N-
H)
Todos estos picos son característicos de Amida III (Mezcla
los enlaces peptídicos de desplazamientos)
Amida
Amida II (N-
I (C-O)
H)
MUESTRA 2 (OBTENIDA POR EL MÉTODO 2)

Cα-N (enlace del carbono α de los

aminoácidos con su respectivo grupo
amino

Amida A (N-
Se presentan
H) los mismos picos → el
producto del método 2 es colágeno
Amida
AmidaII (N-
III (Mezcla
Amida
H) deI desplazamientos)
(C-O)
 CONCLUSIONES
O Se determinó la extracción colágeno
hidrolizado(gelatina)por el método 1 y colágeno
(método 2)a partir de escamas de pescado con
métodos directos y eficaces.
O Mediante pruebas de solubilidad, punto isoeléctrico
y punto de fusión determinamos que es una gelatina
obtenida por el método 1 es de tipo B.
O Se confirmó la presencia de colágeno en el producto
obtenido por el método 2.
 BIBLIOGRAFÍA
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