Bacteriología

Morfología, tinciones y
medios de cultivo
 BACTERIAS

Son un grupo diverso de microorganismos unicelulares,

procariotas, que se pueden encontrar prácticamente en
cualquier ambiente (suelos, aguas, aire)
 No poseen membrana nuclear
 Único cromosoma circular
 Poseen pared celular compuesta de peptidoglicano
 Algunas pueden tener cápsula de polisacáridos
 Se dividen por fisión binaria
Apéndices: Flagelos, pilis y fimbrias
 ENVOLTURA BACTERIANA
Las estructuras externas de la bacterias están compuestas por

 Membrana celular: Consiste en una bicapa lipídica similar a otras membranas biológicas
 Pared celular: Ubicada por fuera de la membrana plasmática. Compuesta por peptidoglicano o mureína.

Peptidoglicano: es un gran polímero compuesto por dos aminoazúcares: N-acetilglucosamina y N-

acetilmurámico; unidos entre sí de manera alternante.
Una cadena peptídica de cuatro aminoácidos está conectada a un N-acetilmurámico. A su vez estos tetrapéptidos
entre sí por puentes de pentaglicina.
 Cápsula: Algunas bacterias presentan una cápsula por fuera de la pared compuesta por polisacáridos
 ENVOLTURA BACTERIANA

A la mayoría de las bacterias las vamos a dividir en gram positivas y gram negativas ya que se tiñen de forma distinta
debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.

Gram-positiva: Pared gruesa de varias capas interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico.

Gram-negativa: Pared mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior
compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. (las bacterias gram negativas poseen membrana externa)
Endotoxina
Polisacárido

Lípido A

Gram negativa
 Morfología

La mayoría de las bacterias se presentan en estas formas básicas:

1. Cocos: Bacterias de forma más o menos esférica

2. Bacilos: Bacterias de forma cilíndrica
3. Cocobacilos: se presentan como bacilos pequeños y redondeados
4. Vibriones: Bacterias curvas (en forma de coma).
5. Espiroquetas: son microorganismos helicoidales y flexibles.
 Disposición

Los cocos se pueden disponer en:

 Diplococos: que son los cocos que permanecen en pares luego de la división.
 En cadenas: luego de la división permanecen en cadenas de cuatro o más células.
 Tétradas: Son agrupaciones de cuatro cocos en una disposición cuadrada
 En racimos: Se agrupan en forma de racimos, no siguen un patrón regular de orientación en divisiones sucesivas.

Los bacilos a su vez puede disponerse

 En empalizada: un bacilo al lado del otro

 En V: formando la letra V
 En letras chinas: Formando letras chinas
 TINCIONES

Gram Microscopia de fondo oscuro

Para la mayoría de las bacterias Algunas espiroquetas son muy finas y

Básica para la valoración inicial sólo pueden ser observadas por
microscopía de fondo oscuro.

Ziehl-Neelsen

Para determinadas bacterias como

Mycobacterias y actinomicosis
 TINCIÓN DE GRAM
Paso 1: Colocar como colorante primario cristal violeta (de color violeta), el cual tiene afinidad con
el peptidoglicano de la pared bacteriana.

Paso 2: Se coloca lugol, el cual sirve como mordiente formando el complejo cristal violeta-yodo.

Paso 3: Se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y

destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas.

Paso 4: Se coloca fuscina o safranina (de color rosa) la cual funciona como un colorante
secundario o de contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo
cristal violeta-yodo.

Las bacterias Gram positivas , al contener una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con
mayor fuerza el cristal violeta (se ven violetas), mientras que las Gram negativas no lo pueden
retener por tener menos cantidad de peptidoglicano (Se ven rosas)

Paso 1 Paso 2 Paso 3 Paso 4

 TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
 Comúnmente usada en el diagnóstico de micobacterias. .
 La alta concentración de ácido micólico en la pared celular hace que no
pueden ser teñidas por el método de Gram.

Paso 1: Colocar fucsina (color fucsia) el cual tiene una enorme afinidad por
los ácidos micólicos

Paso 2: Calentar la preparación ligeramente para solubilizar lípidos y otros

ácidos grasos de la pared celular para que permita el paso libre del
colorante.

Paso 3: Decoloración con alcohol ácido

Paso 4: Coloración con azul de metileno que se utiliza como colorante de

contraste

 La mayoría de las bacterias se decolora por el alcohol ácido y pueden tomar el azul de metileno
mientras que las ácido resistentes mantienen el color rojo brillante de la fucsina.

 Las micobacterias por ser bacilos son llamados comúnmente Bacilos ácido alcohol
resistentes (BAAR)
¿Que vemos?
 MEDIOS DE CULTIVOS

El medio de cultivo es aquel que contiene agua y una serie de nutrientes, necesarios para permitir el
crecimiento de microorganismos.

Se utilizan placas de Petri con agar más nutrientes específicos (según el microorganismo que se desea
aislar), o medios de cultivo en tubo.
 Tipos de medios de cultivo

Según la proporción de agar, existen tres tipos:

 Líquidos (caldos). No contiene ningún agente gelificante, por lo que los microorganismos crecen por todo el
medio.
 Sólidos. Tienen una proporción de agar de, aproximadamente, el 1,5%. El crecimiento se desarrolla en la
superficie del medio. Estos medios pueden depositarse en placas de Petri o en tubos de ensayo.
 Semisólidos. Son aquellos que contienen una proporción de agar inferior al 0,5%. Se utilizan para pruebas
bioquímicas y de movilidad
 Tipos de medios de cultivo

 Nutritivos. Permiten el crecimiento de la mayoría de los microorganismos, por ser muy generales (agua de
peptona y el caldo de tripticasa-soja)

 De enriquecimiento. Contienen componentes adicionales (además de los básicos) para permitir el desarrollo
de microorganismos exigentes, que no crecerían en un medio general.

 Selectivos. Presentan algún componente que impide el desarrollo de microorganismos no deseados. Por
ejemplo, el agar MacConkey contiene cristal violeta, que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y
hongos, facilitando el desarrollo de bacterias gramnegativas.

 Diferenciales. Contienen sustancias que ponen de manifiesto alguna característica de la especie o grupo de
microorganismos. Por ejemplo, el agar MacConkey contiene lactosa y rojo neutro (como indicador); las
bacterias fermentadoras de lactosa (lactosa positivas) aparecen de color rosa intenso, mientras que las no
fermentadoras de lactosa son incoloras.
 Medios de cultivo frecuentemente utilizados en microbiología

Agar sangre

 Permite el crecimiento de la mayoría de las bacterias con importancia clínica.

 Está compuesto por un medio base rico en nutrientes más un suplemento de sangre animal en una proporción del 5-10 %.
 Es un medio diferencial porque permite comprobar si las bacterias son hemolíticas (capacidad para romper los glóbulos rojos)
Existen tres tipos de hemólisis:
 Betahemólisis. Consiste en la lisis total de los glóbulos rojos. Esto general un halo transparente en la zona donde crece este
tipo bacteriano (bacterias betahemolíticas)
 Alfahemólisis. Lisis parcial de los glóbulos rojos, desarrollando un halo verdoso en torno a las zonas donde crecen estas
bacterias (alfahemolíticas).
 Gammahemólisis. Es la ausencia de hemólisis.
 Medios de cultivo frecuentemente utilizados en microbiología

Agar chocolate

 Es un medio enriquecido muy parecido al agar sangre

 Los glóbulos rojos están lisados y liberan al medio nutrientes como la hemoglobina, factor X (hemina) y
factor V (NAD).

 La hemólisis le confiere un color marrón característico (chocolate)

 Se utiliza para el cultivo de bacterias exigentes que necesitan estos factores para su desarrollo, como es el
caso las especies del género Haemophilus. (muy importante!! Esta bacteria no crece en agar sangre..
Requiere factor X y V)
 Medios de cultivo frecuentemente utilizados en microbiología

Agar MacConkey

 Es un medio diferencial y selectivo muy utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias (bacilos
gramnegativos).

 Llevan en su composición sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de grampositivos y hongos.

 Contienen también lactosa y rojo neutro como indicador de pH.

 Las bacterias fermentadoras de lactosa (lactosa+) acidifican el medio y adquieren un color rosado (por ejemplo, E. coli),
mientras que las no fermentadoras de lactosa (lactosa–) aparecen incoloras (por ejemplo, Salmonella).
 Medios de cultivo frecuentemente utilizados en microbiología

Agar SS (Salmonella Shigella)

 Es un medio selectivo y diferencial para el aislamiento y

diferenciación de especies del género Salmonella y Shigella.

 Tiene sales biliares que retrasan el crecimiento de otras bacterias.

 Contienen también lactosa y rojo neutro como indicador de pH.

 El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la detección de

producción de ácido sulfhídrico (SH2). Formación de sulfuro de hierro
(colonias negras)
 Medios de cultivo frecuentemente utilizados en microbiología
Agar Thayer-Martin
 Es un medio de enriquecimiento altamente nutritivo
 Es selectivo para la recuperación de Neisseria gonorrhoeae y
Neisseria meningitidis por la presencia de suplemento V.C.N.T.
(vancomicina, colistina, nistatina y trimetoprima) que inhibe el
desarrollo de microorganismos Gram positivos y Gram negativos,
pero no de Neisseria spp.
Agar CLDE
(cistina-lactosa deficiente en electrólitos)
 Es un medio diferencial utilizado para aislar
microorganismos del tracto urinario en muestras de
orina (urocultivos).
 Las colonias amarillas pertenecen a bacterias
lactosa+, como por ejemplo E. Coli, y las colonias
verdes, azules e incoloras a bacterias lactosa–.
Trabajo práctico
Identifique el tipo de hemólisis