UNIDAD

I
Tema Nº 2

Dra. Geraldine Rojas Rendón

2020
SELECCIÓN DE UN MÉTODO INSTRUMENTAL
ANALÍTICO
Para elegir un método analítico de manera eficaz se debe definir con
claridad la naturaleza del problema analítico que queremos resolver,
para ello debemos respondernos algunas interrogantes como ser:

• Qué exactitud y precisión se necesitan para el resultado?

• Cuantas muestras debemos analizar?
• Con que cantidad de muestra contamos?
• Cuales son las propiedades físicas y químicas de la
matriz de la muestra?
• Qué componentes de la muestra pueden interferir?
• Cuál es el intervalo de concentración del analito?
• Cuales son los tipos de errores que se pueden cometer o existen?
• Cual es el límite de detección del analito?
Podemos ver algunos parámetros importantes que utilizan
se Análisis Instrumental en el Control de Calidad: en

• PARAMETROS DE CALIDAD (CUALITATIVOS)

• PARAMETROS DE CALIDAD (CUANTITATIVOS)

PARAMETROS DE CALIDAD (CUALITATIVOS)

Entre estos tenemos:

1. Velocidad (de la reacción)

2. Conveniencia y facilidad (del reactivo)
3. Habilidad del operador (persona)
4. Costo y disponibilidad del equipo (instrumento)
5. Costo por muestra (mas todos los insumos)
PARAMETROS DE CALIDAD (cuantitativos)

1. SEGURIDAD (de una prueba)

a. PRECISIÓN (del método y la técnica a emplear)
b. EXACTITUD (del método y la técnica a emplear)

2. ERROR (del equipo, reactivos, proceso, operador, etc.)

3. SENSIBLIDAD (tipo de técnica)

4. LIMITE DE DETECCIÓN (tipo de técnica e instrumento)

5. INTERVALO DE CONCENTRACIÓN ( concentración del analito en la

muestra)

6. SELECTIVIDAD ( del método a emplear y la muestra)

7. ROBUSTEZ (del método a emplear)

PARAMETROS DE CALIDAD (cuantitativos)
1. SEGURIDAD

La seguridad de una prueba es la capacidad para

conservar en el futuro su precisión y exactitud si la
prueba ha mantenido estos valores con las mismas
características durante un buen tiempo es digna de
confianza esta solo se puede deducir a partir de su
observación durante un cierto tiempo.

Por lo tanto revisaremos los términos de Precisión y

Exactitud .
a. PRECISIÓN
Grado de concordancia mutua entre dos o más datos que se han obtenido
de una misma forma en referencia a un valor central, o la variación de los
resultados obtenidos con un método cuando, se analiza con él
repetidamente la misma muestra.

Se divide en 2 categorías: la Repetibilidad y la Reproducibilidad.

Repetibilidad: precisión de un análisis en el

que la única fuente de variación es el análisis
de muestras repetidas (instrumental o método)

Reproducibilidad: precisión obtenida cuando

se comparan los resultados de distintas
muestras, distintos análisis o distintos métodos.

La precisión se ve afectada por los errores

Aleatorios, en relación al valor central.
Se puede expresar en: rango, desviación estándar y varianza.

Rango, diferencia o resta del límite superior menos el límite inferior, de

los datos utilizados en una clase.

R= L superior – L inferior
Ej.: R= 9–0 = 9

Desviación estándar, consiste en averiguar en cuanto difiere en promedio

cada observación, del promedio general de observaciones de un grupo.

S =   (xi – x)
n–1

S = Desviación estándar de la muestra

 = sumatorio
x = media o promedio aritmético
xi = valores de cada una de las n observaciones
n – 1 = número de observaciones de la muestra menos 1
Varianza, es el cuadrado de la desviación estándar.

S2 =   (xi – x)
n–1

S2 = Varianza
 = sumatoria
xi = media o promedio aritmético
x = término del conjunto de datos
n – 1 = número de observaciones de la
muestra menos 1
Cálculos de RANGO, MEDIA O PROMEDIO, DESVIACIÓN ESTÁNDAR Y VARIANZA.

Ejemplos de valores : 10, 8, 10, 8 , 8, 4 (6 valores)

a) RANGO R = L superior – L inferior R = 10 – 4 = 6 (resultado de

Rango)

b) MEDIA O PROMEDIO x =  todos los valores / n

xi = (10+8+10+8+8+4) / 6 = 48 / 6 = 8 (resultado de la media)

CUADRO DE VALORES Y CÁLCULOS

c) DESVIACIÓN ESTÁNDAR Valores xi xi - x (xi – x)2
S =   (xi – x) (para cada valor) 1 10 10 – 8 = 2 (2)2 = 4
n–1 2 8 8–8=0 0
Ej calcularemos para el 1er valor: 10
3 10 10 – 8 = 2 4

S =   (10– 8)2 = 4 = 0.8 (Resultado Desv. 4 8 8–8=0 0

6–1 5 estándar) 5 8 8–8=0 0

6 4 4 – 8 = -4 16

TOTAL 48 Suma = 24
d) VARIANZA S2 =   (xi – x)
Media= 48/6 = 8
n–1

S = 0.8 S2 = (0.8)2 S2 = 0.64 (Resultado varianza)

b. EXACTITUD
Es el grado en que una medida difiere, más o menos constantemente
en la misma dirección del valor real o verdadero.

Para determinar la exactitud hay que comparar los resultados

observados con el valor verdadero. Se compara utilizando un
método de referencia aceptable.

Es una característica que escapa del control del analista, por ej.:
cuando se obtienen resultados diferentes utilizando diferentes
métodos para analizar una misma sustancia. Se utiliza la siguiente
fórmula:

Exact. = u – xi u = media de la población o diferencia entre

un resultado analítico
xi = concentración verdadera del analito

El parámetro de calidad para medir la exactitud

es el error sistemático.
EJEMPLOS DE EXACTITUD Y PRECISIÓN
2. ERROR
La palabra error es bastante ambiguo. Se emplea para
comparar resultados obtenidos con el mismo método
analítico o con métodos muy similares, para lo cual
deben identificarse las fuentes de error y cada una de
ellas debe eliminarse o minimizarse. Podemos indicar que
el Error total resulta de:
Error total =  P2 + D2 + A2 + L2

P = Variación entre múltiples repeticiones del mismo análisis

D = Variación de resultados obtenidos en días consecutivos, mismo
analista, mismo laboratorio y misma muestra.
A = Variación entre diversos analistas del un mismo laboratorio
L = Variación entre diversos laboratorios

Y el Error total es igual a la suma de:

ET = error sistemático + error aleatorio

Existen 2 tipos de errores: Aleatorios (indeterminados) y

Sistemáticos (determinados) o de procedimiento.
- Errores Aleatorios (indeterminados)

Se encuentra en la naturaleza intrínsecamente incierta

de las técnicas de medición, se encuentra en cada
análisis. Cualquier error por el cual algunas mediciones
o resultados son muy altos o bajos, caen a ambos lados
del valor medio (afecta a la precisión). Se presentan
cuando se utilizan a su máxima sensibilidad.

Dentro de estos tenemos a los Ruidos, la magnitud del

error es pequeña. Existen 2 tipos de ruidos:

Ruido químico, provienen de una serie de variables

que afectan a la química del sistema como variación
en la temperatura o presión, fluctuaciones de
humedad, vibraciones, cambio de intensidad de luz.

Ruido instrumental, se asocia a los 4 componentes

de un instrumento, como ser al generador, detector,
procesador o al sistema de lectura.
- Errores Sistemático

Hace que los resultados se desvíen de manera

constante respecto a los valores esperados. Cualquier
error por el que una medición o resultado es siempre
demasiado alto o demasiado bajo. Se presentan
siempre en el mismo sentido, se puede identificar su
origen (afecta a la exactitud).

Podemos dar ejemplos de estos errores: procedimientos

de calibración inadecuados, pureza insuficiente de los
reactivos y operación incorrecta de los instrumentos de
medición.

Pueden ser de 3 tipos:

 Instrumentales
 Personales
 Del método
 ERRORES INSTRUMENTALES
- Se presenta en los circuitos eléctricos
- Fugas en sistema de vacío
- Efecto de la temperatura en el detector
- Errores de calibración en los medidores, pesas y equipos
volumétricos

Se corrige con calibraciones periódicas de los equipos.

 ERRORES PERSONALES
- Color de una disolución en el punto final de una valoración
- Intensidad relativa de dos haces de luz
- Ceguera al color, etc.

Como consecuencia de los criterios que debe adoptar el analista.

 ERRORES DEL MÉTODO

- Reacciones lentas e incompletas
- Pérdidas de volatilidad, absorción del analito, etc.

Como consecuencia del comportamiento químico o físico ideal de

los reactivos y las reacciones. Validación del método.
VALIDACIÓN DEL MÉTODO

“ Es el establecimiento de la evidencia documental de que un

procedimiento analítico conducirá con un alto grado de
seguridad a la obtención de resultados precisos y exactos, dentro
de las especificaciones y los atributos de calidad previamente
establecidos”.

El proceso de la validación contempla varias fases que se deben

llevar a cabo para conocer las características de fiabilidad del
método, que son las que demuestran la capacidad del método
analítico de mantener a lo largo del tiempo los criterios
fundamentales de validación.
Para hacer un control del error en laboratorio lo que
debe aplicarse es lo siguiente:

• Patrones o estándares, patrones con

concentración
puros conocida, patrones una
adición
internosde una cantidad conocida del patrón puro
cony la
mezcla de muestras (pool) . la

• Blancos de Reactivos, con 2 propósitos principales

como restar de las lecturas obtenidas en los tubos con
muestra y estándar o patrón la parte que corresponde al
valor blanco.

• Gráficas de control de calidad, es una forma de ir

anotando las lecturas de los patrones y los blancos de
reactivos teniendo día a día un registro.

• Métodos de filtrado ya sea con el uso de equipos o por

programas computarizados.
 3. SENSIBLIDAD

Capacidad del método analítico de detectar

menores concentraciones del analito en la
muestra, mientras menores concentraciones
detecte el método será sensible.
parámetro para medirmásla sensibilidad
sensibilidad es deCalibración, se El
pendiente de la define
curva de calibración a una
concentración de interés, siendo esta una curvala
lineal. a

Presenta la siguiente fórmula: la

S = mc + Sb

S = señal media
m = pendiente de la línea recta
C = concentración del analito
Sb= señal instrumental para el
blanco
4. LIMITE DE DETECCIÓN (LOD)

Se define como la concentración o peso mínimo del analito que

pueden detectarse para un nivel de confianza dado.

Según IUPAC es la menor concentración o cantidad absoluta de un

analito que produce una señal significativamente mayor que la que
se obtiene con un blanco.

También existe un LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN (LOC), siendo la menor

concentración de analito que puede determinarse con precisión y
exactitud en las condiciones establecidas y se expresa en unidades de
concentración.
5. INTERVALO LINEAL (LINEALIDAD)

Se define como el intervalo desde la concentración mas pequeña

que puede realizar una medida cuantitativa hasta la concentración
donde la curva de calibrado se desvía. Eso es linealidad.
6. SELECTIVIDAD
La propiedad de un método de producir una señal medible
debido solo a la presencia del analito, libre de interferencias
de otros componentes, en la matriz de la muestra.

También indica el grado de ausencia de interferencias con

otras especies que contiene la matriz de la muestra.

Estos compuestos pueden ser excipientes de un fármaco,

productos de degradación, subproductos o productos
laterales de síntesis de una droga, metabolitos del mismo
analito en un fluido biológico, etc.
Por ejemplo:

En productos farmacéuticos se evalúan las siguientes rutas

de degradación con el fin de realizar un ensayo de
degradación artificial:

⦿ Termólisis (calentamiento)
⦿ Hidrólisis (calentamiento a reflujo con agua)

⦿ Hidrólisis alcalina (calentamiento con Na OH)

⦿ Hidrólisis ácida (calentamiento con HCl)

⦿ Fotólisis (exposición a radiación UV)

⦿ Oxidación (calentamiento con unas de agua

gotas oxigenada)

“ mas pureza del producto farmacéutico”

7. ROBUSTEZ
Los analíticos están sometidos a interferencias
métodos y físicas que contribuyen a la incertidumbre del
químicas
análisis (examen detallado de errores sistemáticos y aleatorios
de una medición).

Cuando el método está libre de estas interferencias se puede

decir que es “robusto”. La robustez de un método garantiza que
este pueda ser utilizado en distintas condiciones y diversas
matrices.

Ej.: Método en radiación ultravioleta para determinar fósforo

- Analistas
- Tiempo y temperatura de reacción
- Almacenamiento
- Técnica manual o automatizada

TODOS LOS ASPECTOS MENCIONADOS SON IMPORTANTES Y CRÍTICOS

METODOS DE ESTANDARIZACIÓN
La exactitud de una estandarización depende de la calidad de
los reactivos y del material de vidrio que se utilicen para
preparar los estándares.

Podemos estandarizar las técnicas a partir de:

- Patrones primario
- Patrones secundarios
- Estandarización en un solo punto o con varios puntos
- PATRON
PRIMARIO
•Elevada pureza
•Composición y concentración conocida
•Estable a temperatura ambiente (u otra)

- PATRON SECUNDARIO

•Reactivo con pureza

•Se debe establecer por comparación con un
patrón primario.

- ESTANDARIZACIÓN EN UN SOLO PUNTO O

VARIOS PUNTOS

•Cuando se utiliza un solo patrón con una

cantidad conocida de analito
•Cuando se utilizan varios patrones con
cantidad y concentración de analito
conocida.