BIOQUÍMICA

o Semestre-2022

Departamento Académico de Cursos Básicos

Técnicas básicas de identificación
de biomoléculas

Semana 06
Sesión 18
Contenido
o Identificación de proteínas
o Identificación de carbohidratos
o Identificación de lípidos
o Identificación de ácidos nucleicos
 Resultado de aprendizaje de la sesión

Resultado de aprendizaje de la sesión

Al finalizar la sesión, el estudiante

identifica biomoléculas como proteínas,
carbohidratos, lípidos y ácidos nucleicos a
través de diferentes procedimientos
experimentales.
https://acortar.link/u7BXS0

04
 Reflexión desde la experiencia

Reflexión desde la experiencia

Participemos en las siguientes preguntas

¿Cuáles son las biomoléculas?

¿Qué métodos conoces para

determinar estas biomoléculas?

¿Qué biomoléculas se cuantifican

en diagnóstico de enfermedades?
05
Identificación de
proteínas
 Métodos de determinación de las
proteínas

o MÉTODO DE ABSORCIÓN UV A 280nm

o MÉTODO DE BIURET
o MÉTODO DE LOWRY
o MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)
o MÉTODO DE BRADFORD
o MÉTODO TURBIDIMÉTRIA y NEFELOMETRÍA
o ELECTROFORESIS
07
Determinación de proteínas séricas
totales

Puede ser:
cualitatitiva o
cuantitativa
(Estándar)

https://acortar.link/5WEzZ6
https://n9.cl/w3uur

08
 Determinación de proteínas séricas
totales
Método de Biuret
Requiere la desnaturalización de las
proteínas para exponer los enlaces peptídicos

FUNDAMENTO:
Se basa en la reacción entre los iones de cobre
del reactivo de Biuret y los átomos de nitrógeno
de los enlaces peptídicos de las proteínas. Se
produce un complejo de color azul que absorbe
entre 535 y 540 nm. La intensidad de
coloración es directamente proporcional a la https://n9.cl/rxgh6
cantidad de enlaces peptídicos.
Intervalos de referencia: 6.0 – 8.3 g/dL

Detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más
enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. 09

https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Proteina-Total.-Inserto.pdf
 Determinación de proteínas séricas
totales
Método de Biuret
¿Cuál sería el material a necesitar de
acuerdo a lo descrito en la técnica?
Material:
-Tubos de ensayos 12x75 mm.
-Pipeta automática de 1000 µL
o pipeta serológica de 5 mL
-Pipeta de 20 µL
-Tips
-Gradilla
-Temporizador
-Espectrofotómetro
-Cubetas de polietileno
010
https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Proteina-Total.-Inserto.pdf
 Determinación de proteínas séricas
totales
20 µL
20 µL
Estándar o Patrón
6,1 g /dL M
B ST

Suero de paciente
Blanco Estándar Muestra (suero
de un paciente)

1 mL de reactivo a cada tubo de ensayo 12 x75 mm

Mezclar e incubar a ST: Estándar

TA por 5 minutos M: Muestra
011

Leer (540 nm)

Identificación de
carbohidratos
 Identificación de carbohidratos

GLUCOSA PLASMÁTICA EN AYUNAS (Glicemia

Basal)

Ensayos cuantitativos:

MÉTODOS ENZIMÁTICOS QUÍMICOS

o Método de Hexoquinasa Método de Ortoluidina

o Método de Glucosa-Oxidasa

013
 Identificación de carbohidratos

Método de Glucosa oxidasa:

oLa glucosa reacciona con el reactivo enzimático que contiene una mezcla
de las enzimas Glucosa Oxidasa (GOD) y Peroxidasa (POD).

oEn la primera etapa la Glucosa es oxidada a Ac. Glucónico por la acción de

la enzima GOD, liberándose como producto H2O2, el cual en una reacción
mediada por la enzima POD, reacciona con el Ac. p-Hidroxibenzoico y 4-
Aminoantipirina produciendose un compuesto coloreado con un máximo de
absorción a 505 nm., en cantidad proporcional a la cantidad e Glucosa
presente en la muestra.
014

https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Glucosa-GOD-PAP.-Inserto.pdf
 Identificación de carbohidratos

Método de Glucosa oxidasa:

015

https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Glucosa-GOD-PAP.-Inserto.pdf
Apliquemos lo aprendido

Determine la
concentración de
proteínas totales en el
suero del paciente

https://acortar.link/rSWaoI
 Apliquemos lo aprendido
Participemos en la siguiente pregunta

Determine la
concentración de la
muestra tomando en Conc. Estándar: 100 mg/dL
cuenta las Abs que se Abs estándar: 0.640
describen a continuación Abs muestra: 0.514

RANGOS DE REFERENCIA:
Suero: 60 a 110 mg/dL

¿La muestra está dentro del rango de referencia? 017

Identificación de
lípidos
Identificación de lípidos

019
 Identificación de lípidos

PRUEBA DE SOLUBILIDAD
Ensayo cualitativo FUNDAMENTO:

o Los lípidos son insolubles en agua.

o Al agitarse fuertemente se dividen en
pequeñas gotas formando una emulsión
de aspecto lechoso (transitoria).
o Desaparece en reposo por reagrupación
de las gotitas de grasa en una capa que,
por su menor densidad, se sitúa sobre el
agua.
o Las grasas son solubles en disolventes
orgánicos, como el éter, cloroformo,
acetona, benceno, etc. 020
 Identificación de lípidos
PRUEBA DE SOLUBILIDAD
Técnica:
1.Poner 2 mL de aceite en dos tubos de ensayo.
2.Añadir a uno de ellos 2 mL de agua y al otro 2 mL de éter u otro disolvente
orgánico.
3.Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.

2 mL de aceite
+ 2 mL de éter 2 mL de aceite
+ 2 mL de éter

021

Resultado:
Podemos observar que el aceite en el éter fue
disuelto, pues las grasas son solubles en
solventes orgánicos.
Resultado:
El aceite no logra disolverse en el agua debido a su
baja densidad; por lo que sube y se forman
pequeñas gotitas, tanto en el contenido como en las
paredes del tubo de ensaye.
Identificación de
ácidos nucleicos
 Identificación de ácidos
nucleicos
o Las bases nitrogenadas de los ácidos nucleicos tienen la
capacidad de absorber luz ultravioleta, con un máximo a
260nm.
o Propiedad utilizada para calcular la concentración y pureza
de los ácidos nucleicos por un espectrofotómetro.
o El ADN bicatenario, una unidad de absorbancia a 260nm
(A260 = 1,0) corresponde a una concentración de 50
ug/mL.
o Una solución de ADN puro de doble cadena presenta una
relación A260/A280 de 1,8 mientras que la presencia de https://acortar.link/EBl45U

023
proteínas o fenol disminuye esta relación: las proteínas
absorben a 280nm debido a los anillos aromático.
 Identificación de ácidos
nucleicos

o La presencia de ARN en una preparación de ADN hace

aumentar la relación A260/A280 por encima de 1,8 debido al
efecto hipercrómico (dos cadenas sencillas absorben más que
una doble).
o La relación A260/A280 para el RNA puro es de 2,0

https://acortar.link/EBl45U
024
Apliquemos lo aprendido
 Apliquemos lo aprendido

Participemos en las siguiente pregunta

La diabetes es una enfermedad donde el

paciente tiene elevados niveles de glucosa en
sangre y este debe monitorearse
frecuentemente. Una prueba para diagnóstico
es la curva de tolerancia a la glucosa se realiza
dando una solución con glucosa al paciente,
luego midiendo la concentración de glucosa en
la sangre en el tiempo.

¿Qué técnicas tenemos disponible para

diagnosticar la diabetes mediante esta técnica?
https://acortar.link/PgHDuD 026
Integremos lo
aprendido
 Integremos lo aprendido

Participemos en las siguientes conclusiones

• Los grupos químicos contenidos en las biomoléculas

les confieren propiedades distintas.
¿Qué aprendiste
en práctica de • Las diferentes propiedades de las biomoléculas
permiten identificarlas mediante ciertas técnicas
laboratorio hoy? experimentales (reacciones químicas, solubilidad,
absorción).

• La identificación de biomoléculas puede ser útil para

el diagnóstico de enfermedades.

028
Actividad asincrónica
 Actividad asincrónica

Lectura: Métodos experimentales que permiten el estudio de las

macromoléculas de la vida: historia, fundamentos y perspectivas
http://www.scielo.org.mx/pdf/eq/v24n2/v24n2a9.pdf

Resumen de 350 palabras sobre técnicas básicas de identificación

de biomoléculas.

030
 Actividad asincrónica
TITULO EN ESPAÑOL
(Título en inglés)

Apellidos y Nombres (Integrantes)

Correos electrónicos 1 ;
Introducción:XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX.OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
OOOOOO.Objetivo:DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
DDDDDDDDDDDDDDD.Desarrollo:DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD.ConclusiónCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC
CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC
CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC. 031

Palabras claves:
Referencias:
 Referencias Bibliográficas

DE CONSULTA
 
Cuadros Trillos, G. (2019). Mapas conceptuales en bioquímica (1.a ed.). El Manual Moderno
http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/128368
 
Melo, V. y Cuamatzi, O. (2019). Bioquímica de los procesos metabólicos. Reverté, S.A. https://elibro.net/es/ereader/ucsur/127790
 
Müller-Esterl, W. (2020). Bioquímica: fundamentos para medicina y ciencias de la vida. Reverté, S.A.
http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/129564
 
Piña Garza, E., Martínez Montes, F., Riveros Rosas, H., Laguna, J. y Pardo Vázquez, J.P. (2018). Bioquímica de Laguna y Piña (7.a ed.). El
Manual Moderno.
 
Pulido Villamil, X. C. (2019). Prácticas de bioquímica y estudios de casos en ciencias de la salud. Universidad de Tolima.
http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/142510
 
Simes, L. E. (2020). Introducción a la bioquímica: interpretación de análisis clínicos. Universitas.
http://elibro.net.cientifica.remotexs.co/en/lc/ucsur/titulos/172171

032
 Referencias Bibliográficas

OBLIGATORIAS

Bittencourt, J. (2018). The Power of Carbohydrates, Proteins, and Lipids (4.a ed.). CreateSpace, An Amazon.com Company.
https://www.researchgate.net/publication/322473648
 
Macías Alvia, A., Hurtado Astudillo, J. R., Cedeño Holguín, D. M., Cedeño Holguín, F. A., Scott ÁLava, M., Vallejo Valdivieso, P. A., Macías
Alvia, M. J., Santana Sornoza, J. W., Espinoza Macías, M. J., Ubillús Saltos, S. P., Arteaga Espinoza, S. X., Torres Macías, O. E., Pigüave
Reyes, J. M., Pigüave Reyes, Chavarría Cedeño, D. I., & Intriago Sánchez, K. J. (2018). Introducción al estudio de la bioquímica (1.a ed.).
Área de Innovación y Desarrollo, S.L https://doi.org/10.17993/CcyLl.2018.28
 
Nelson, D. L., y Cox, M. M. (2017). Lehninger Pinciples of Biochemistry (7.a ed.). W.H Freeman Macmillan Learning.
 
Navarro, M., Salazar, J., Salazar, Y. Zarkovic, G. (2022). Manual de prácticas de laboratorio. Bioquímica. Universidad Científica del Sur.
 
 

033