ANALISIS DE LA •LIC. T.M.

RAMOS AGAPITO JUAN CARLOS

•LIC. T.M. RAMOS AGAPITO RONALD WILLIAM
MORFOMETRIA
CELULAR EN SANGRE
HEMATOLOGIA ESPECIALIZADA
PERIFERICA Y
MEDULA DOCENTE: DR. AVELINO CALLUPE PAUL

OSEA, IMPORTANCIA
DIAGNOSTICA
 ANALISIS DE LA MORFOMETRIA CELULAR
EN SANGRE PERIFERICA Y MEDULA OSEA,
IMPORTANCIA DIAGNOSTICA
¿Qué es Morfometría?:
Estudio científico de la forma y dimensiones de
algo

HEMATOLOGÍA: Estudio de sangre periférica

Se le conoce también como biometría
hemática o citometría hemática, es el
examen de laboratorio de mayor utilidad y
más frecuente solicitado por el clínico. En
un solo estudio se analizan tres líneas
celulares completamente diferentes:
eritroide, leucocitaria y plaquetaria, que no
sólo nos orientan a patologías
hematológicas; sino también a
enfermedades de diferentes órganos y
sistemas.
 HEMATOPOYESIS

La generación de todas las células sanguíneas,

llamada  hematopoyesis (cuadro), ocurre al
principio, durante el desarrollo fetal, en los
islotes sanguíneos del saco vitelino y en el
mesénquima paraaórtico, después se desplaza
al hígado entre el tercer y cuarto mes de
gestación, y finalmente pasa a la médula ósea.
Cuando la médula ósea se daña o  cuando se
produce una demanda excepcional de
producción de células sanguíneas nuevas, el
hígado y el bazo se convierten a veces en
zonas de hematopoyesis extramedular.
Hemograma Manual
1953

• Wallace y Joseph Coulter patenta un equipo basado en

impedancia volumétrica para contar leucocitos y eritrocitos.
1980

• Nuevos modelos que realizan el diferencial de leucocitos en 3 partes

y determinan los índices hematimétricos, útiles en la clasificación de
las anemias. (VCM y RDW).
 Principio de Medición

 Impedancia eléctrica

 Colorimetría
 Menú de parámetros

MCH Gran%
MCHC

8 4 7
19/21 Parámetros + 3 Histogramas
Mayor utilidad para un
pre-diagnóstico

Flag Type Flag Sgnificado

Leukopenia Low WBC analysis results
Leukocytosis High WBC analysis results
Gran decreased Low neutrophils analysis results
WBC Flag Gran increased High neutrophils analysis results
Lymph decreased Low lymphocytes analysis results
Lymph increased High lymphocytes analysis results
Mid-size cell increased High granulocytes analysis results
Pancytopenia WBC, RBC and PLT low
Possible presence of microcytes,
RBC Histogram Abn. macrocytes, anisocytosis, RBC
agglutination and dimorphic histogram

HGB Abn./Interfere? HGB abnormal or RBC agglutination, or

RBC Flag interference may exist (e.g., WBC high)
Microcytosis MCV low
Macrosytosis MCV high
Anemia Anemia
Erythrocytosis RBC high

PLT Histogram Abn. Possible presence of microcytes, red

blood cell debris, giant PLT or PLT clump
PLT Flag
Thrombocytopenia PLT low
Thrombocytosis PLT high
1990

.
• Diferencial de leucocitos en 5 partes. Recuento diferencial de leucocitos
por combinación de diferentes tecnologías, nuevos parámetros, flags o
alarmas que alertan sobre las distintas patologías.
 Diferenciación de WBC en 5 partes

Tinción Química Citometría de flujo Dispersión láser

Impedancia
 Parámetros

WBC
RBC PLT
LYM#
MCV MPV
LYM%
HCT PCT
MON#
RDW-SD PDW
MON%
RDW- P- NEU#
CV HGB LCC NEU%
MCH P-LCR EOS#
MCHC EOS%
BAS#
8 BAS%
BAS%
ALY(#,%), LIC(#,%), NRBC(#,%), Lip /#%),
Blast (#%), PLT clumps (#%), PDW-SD,
NLR, PLR, Neu-X, Neu-Y, Neu-Z, Lym-X,
8 6 11 Lym-Y, Lym-Z, Mon-X, Mon-Y, Mon-Z.

25 Parámetros + 24 Parámetros de investigación

reportables
Más Más parámetros

NRBC

PLT- IG
O 6-Diff
IPF
Parámetro
s
tecnologías
Otros avanzadas
fluidos
corpora
les
Malaria
RET
IRF
RET-
He
 HOY

• Nuevos parámetros, conexión a un LIS, módulos integrados, módulos

de realización de extendidos, tinción y análisis digital de la imagen.
Observaciones al Hemograma
Leucocitos
• Granulocitos: inclusiones , aspecto
del núcleo
• Aspecto linfocitario: reactivos,
atípicos, linfomatoso , neoplásico,
variante o linfomonocitario.
• Sombras de Gumprecht
• Monocitos con fenómeno de
fagocitosis
• Caracterización de los blastos
Formula expandida
• Genera alarmas morfológicas
de sospecha: cayados ,
granulocitos inmaduros,
linfocitos atípicos, blastos
• Entrega una cuantificación de
estos elementos
• Pantallas de investigación –-
datos no reportados
 La revisión del FSP contribuye
• Información adicional
• Detectar alteraciones cuanlitativas o cuantitativa
• Confirmar las alarmas de sospecha
• Verificar conteos ,distribución y posibles interferentes
• Realizar variaciones en el diferencial leucocitario
• Caracterizar rasgos morfológicos
• Determinar la presencia de elementos atípicos
• Descartar hemoparásitos
• Evaluar y caracterizar anemias (OMS)
• En desordenes hereditarios
• Validación de un resultado
Extendido y coloración automatizado
Extendido y evaluación de SP
Recuento Diferencial de Leucocitos (RDL)
Llamado también
Fórmula leucocitaria
Corresponde a la
determinación de la
concentración
relativa y absoluta de
las subpoblaciones de
leucocitos
circulantes, utilizando
métodos manuales o
automatizados
Considerado parte
del examen básico de
un hemograma, junto
al recuento celular y
la concentración de
hemoglobina
Recuento Diferencial de Leucocitos (RDL)

• Clasificación # y %:
• Neutrófilo banda
• Neutrófilo segmentado
• Eosinófilo
• Basófilo
• Monocito
• Linfocito normal
• Linfocito variante
• Incluir células distorsionadas si son claramente identificables según a
la categoría que pertenezca
Transtornos o patologías leucocitarias

Alteraciones Benignas:
Congénitas o primarias: Transtornos morfologico de nacimiento
Adquiridas o secundarias: enfermedad de fondo con daño en su
maduración, proliferación con consecuencias clínicas (sindromes)

Alteraciones Malignas:
Neoplasias hematológicas
Leucemias agudas
Leucemias cronicas
Linfomas o síndromes linfoprolIferativos crónicos
Clasificación

• Según el modo de alteración

• Alteraciones cualitativas
• Alteraciones cuantitativas
• Según el tipo celular
• Mieloides
• Granulociticas
• Linfocíticas
Valores referenciales
• Leucocitosis: Elevación por encima de 11,000/mm3

• Leucopenia: Disminución menor a 4000/mm4

• Neutrofilia: Mayor a 7500/mm3 o 75%
• Cuando se asocia con células inmaduras (ab, metamielocitos) se denomina
desviación a la izquierda
• Si es mayor a 50000/mm3, la desviación a la izquierda se denomina
reacción leucemoide
Estudio de Lámina Periférica

• SVR – MS: Modelo de reporte

• Datos del laboratorio
• Datos del paciente
• Resultados del Hemograma (Manual o automatizado)
• Reporte de Lámina Periférica
• Comentarios o Recomendaciones
Morfología Eritroide

• Cantidad: Disminuido o aumentado

• Anemia: leve – moderada – severa
• Citomorfología:
• Tamaño (+): Anisocitosis - Macrocitosis – Microcitosis
• Color (+): Hipocromía – Normocromía – Policromasia
• Forma (+): Poiquilocitosis – Eliptocitos – Dacriocitos - …
• Inclusiones (+): C. Howell-Jolly - Anillo de Cabot
Morfología Plaquetaria

• Cantidad:
• Disminuida:
• Plaquetopenia leve: 100,000 a 150,000/mm3
• Plaquetopenia moderada: 50,000 a 99,000/mm3
• Plaquetopenia severa: 21,000 a 50,000/mm3
• Plaquetopenia grave Menor de 20,000

• Citomorfología Plaquetas grandes (+)

Morfología Leucocitaria

• Cantidad: Disminuido: Leucopenia: Leve-moderada-severa

Aumentado: Leucocitosis: Leve-moderada-severa
• Formula Diferencial (%):
• Linfocitos
• Monocitos
• Eosinófilos
• Basófilos
• N Segmentados
• Citomorfología: Hipersegmentacion en Neutrófilos (+)
 HEMATOLOGÍA: Estudio de médula ósea

• El estudio de médula ósea (MO) es un procedimiento

diagnóstico especializado de suma importancia no sólo
para la evaluación y manejo de desordenes
hematológicos malignos y no malignos, sino también
para el seguimiento de neoplasias hematológicas y
tumores sólidos. Se realizan conjuntamente con un
hemograma y una extensión de sangre para conocer el
estado de la médula ósea y su capacidad de producción
de células sanguíneas, incluyendo hematíes, leucocitos
y plaquetas.
 Técnica de coloración
• Se coloca una gota de aspirado en el centro de un
portaobjetos, otro portaobjetos se coloca sobre la
gota y se ejerce una presión muy suave; los
portaobjetos se separan uno del otro en
direcciones opuestas. (Técnica de Cover Slip)
• Dejar secar al aire libre y visualizar
macroscópicamente para valorar la calidad del
extendido.
• Una vez secos, los extendidos se tiñen con el
colorante de Wright
• Se deja actuar el colorante por cinco minutos, posteriormente se agrega buffer
de fosfatos (pH 6.4) en una cantidad similar al del colorante agregado y se
mezclan ambos reactivos utilizando una pipeta Pasteur; se deja actuar unos 10
minutos
• Inmediatamente lavar el portaobjetos con agua corriente teniendo cuidado
que los grumos no se desprenda del portaobjeto. Dejar secar al aire libre
Evaluación de Morfologia MO
• Se realiza con el objetivo de mayor aumento
(100x).
• Se examinan las características morfológicas
de las células como:
• tamaño,
• relación núcleo/ citoplasma (N:C),
• apariencia de la cromatina,
• presencia, tamaño y cantidad de nucléolos;
• forma y tamaño del núcleo y características de su
borde (regular o con hendiduras),
• color del citoplasma, presencia de gránulos en el
citoplasma y sus características (cantidad,
tamaño, forma y color).
• También se examina la presencia de vacuolas,
presencia de cuerpos o bastones de Auer
(cantidad y agrupación) u otras inclusiones
citoplasmáticas;
• características del contorno de la membrana y
asincronía en la maduración.
Evaluación de Morfologia MO

• Se realiza el conteo diferencial de todas las células nucleadas: blastos,

promielocitos, mielocitos (neutrófilo y eosinófilo), metamielocitos
(neutrófilo y eosinófilo), bandas (neutrófilo y eosinófilo), neutrófilos
segmentados, eosinófilos, basófilos, promonocitos, monocitos,
linfocitos, células plasmáticas, proeritroblastos, eritroblastos
(basófilos, policromáticos y ortocromáticos) y mastocitos.
• Esto se realiza en 500 células.
INMUNOFENOTIPO

Inmunofenotipado
Identificación y cuantificación de distintas poblaciones celulares en base a la expresión
diferencial de marcadores de superficie o intracelulares
Utiliza Ac. Específico frente a los diferentes moléculas marcadoras (ac. marcado con
fluorocromo multifluorescencia)
Se puede realizar:
-Identificación de poblaciones celulares conocidas y desconocidas
-Análisis de las posibles alteraciones en poblaciones celulares asociadas a diferentes
patologías con buena precisión.
-Permite identificar diferentes estadios de maduración, diferenciación y activación
celular
-Diagnóstico de leucemia y otros tipos de tumores
-Monitorizaciones de leucemias post tratamiento (Cambios de expresión de
marcadores )
CITOMETRIA DE FLUJO

Es una técnica de análisis que permite la caracterización Fenotípica

celular mediante el estudio de la dispersión de luz y fluorescencia
emitida cuando una célula atraviesa un haz de luz
ENFOQUE HIDRONINAMICO
OPTICA: Láser, Filtros
ELECTRONICA
FLUOROFOROS
POBLACIONES LINFOCITARIAS
Marcadores inmunológicos para Leucemias
ALOT: TUBO DE ORIENTACION EN
LEUCEMIAS AGUDAS
APLICACIONES INMUNOFENOTIPO

. CANCER : Dx de Leucemias y otros tumores

. Monitorización de Tratamientos de las
Leucemias.
. Inmunodeficiencia: Sida
. Terapia Celular y Trasplante
. Medir Apoptosis celular
. Capacidad fagocítica de la Celular
ESTUDIO CITOLOGENETICO

• 1.- CARIOTIPO CLASICO

Prueba que consiste en ordenar los cromosomas ( 23 Pares) de una especie según su
tamaño, estructura y número.
USOS:
.Dx de enfermedades Genéticas
. Clasificar enfermedades hematológicas
BUSCA DETECTAR:
. Alteraciones de Número
- Trisomías :S. Down, S. Klinefelter( xxy)
- Monosomía S. Turner
. Alteraciones de Estructura
- Inversión
- Traslocaciones : Cromosoma Philadephia 22 -9 / LMC
- Deleciones
PROCEDIMIENTO CARIOTIPO

• .Muestra : Sangre Venosa / MO /Liq.Amniot.

• Cultivo de Células
• Inhibición de la Mitosis en Fase Metafase
• Identificación y ordenamiento
IDENTIFICACION Y ORDENAMIENTO
FOTO CARIOTIPO - MUJER

• CARIOTIPO MOLECULAR - FISH

CARIOTIPO MOLECULAR - FISH

• HIBRIDACION IN SITU CON FLUORESCENCIA-FISH

Es una técnica de laboratorio que se usa para detectar y localizar
una presencia o ausencia secuencias complementarias que se
asocian a un gen que podía explicar la enfermedad de un
paciente.
.Utiliza una sonda marcada con la sustancia fluorescente
(fluoróforo) compatible con la sonda que se quiere localizar
Con el uso de un microscopio especial, se puede ver el
cromosoma y la ubicación subcromosómica donde se unió la
sonda fluorescente.
TECNICA FISH – Permite:

• Detectar y confirmar alteraciones cromosómicas número y estructura

• Detectar mosaicos Cromosómicos
• Monitorear Terapias aplicadas en Oncohematología
• Controlar los Tratamientos Post Transparentes de M.O.
• Detectar recaídas tempranas o enfermedad residual mínima.
BIOLOGIA MOLECULAR
APLICACIONES CLINICAS

• ONCOLOGIA
• Patologías infecciosas Virus y bacterias
• Enfermedades complejas:
• Neurológicas Alzaimer Parkinson
• Inmunológicas:HLA,Artitis Reumatoide, Esclerosis múltiple
• Cardiovasculares Hipercolesterolemia familiar
• Salud Reproductiva Est. GeneticoPre-implantacional
Aplicaciones: ONCOLOGIA

.Secuenciación del ADN tumoral

. Diagnostico Genético molecular
. Dianas Farmacológicas
. Biopsia liquidas
Mutaciones

• Una mutación es un cambio en la secuencia de ADN de un

organismo.
• Las mutaciones pueden producirse a partir de errores en la
replicación del ADN durante la división celular, la exposición
a mutágenos o una infección viral.
• Las mutaciones en la línea germinal (son las que ocurren en
los óvulos y los espermatozoides) pueden transmitirse a la
descendencia, mientras que las mutaciones somáticas (las
que ocurren en las células del cuerpo) no se transmiten.
MUTACIONES
SECUENCIADORES
BIBLIOGRAFIA

• http://www.scielo.org.co/pdf/unsc/v15n3/v15n3a03.pdf
• http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1727-897X2017000300012
• http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892019000300015
• https://www.msdmanuals.com/es-pe/hogar/trastornos-de-la-sangre/síntomas-y-diagnóstico-de-los-trastornos-de
-la-sangre/examen-de-la-médula-ósea
• http://www.bvs.hn/RMH/pdf/1985/pdf/Vol53-4-1985-5.pdf
• https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/prueba-de-la-medula-osea/
• https://docs.bvsalud.org/biblioref/2018/05/883834/mieloma-multiple.pdf
• https://www.medigraphic.com/pdfs/medlab/myl-2008/myl089-10b.pdf
• https://www.medigraphic.com/pdfs/medlab/myl-2008/myl083-4c.pdf
• http://incan-mexico.org/wp_hematologia/wp-content/uploads/MÉDULA-ÓSEA.pdf
• https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0186-23912016000400246
• https://www.cancer.org/es/cancer/leucemia-mieloide-cronica/acerca/huesos-y-sangre-normales.html
• https://labtestsonline.es/tests/estudio-de-la-medula-osea
• http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1018-130X1997000200002
• https://medicinaylaboratorio.com/index.php/myl/article/view/518/468
• http://bvs.minsa.gob.pe/local/INS/845_MS-INS-NT40.pdf
• http://www.revhematologia.sld.cu/index.php/hih/article/view/139/108
• https://www.elsevier.es/es-revista-revista-medica-clinica-las-condes-202-articulo-interpretaciyn-clynica-del-hem
ograma-S0716864015001480
https://www.parcdesalutmar.cat/mar/interpretacion%20_hemograma_2013.pdf

https://www.elsevier.es/es-revista-revista-medica-clinica-las-condes-202-articulo-
interpretaciyn-clynica-del-hemograma-S0716864015001480

https://eds.p.ebscohost.com/eds/pdfviewer/pdfviewer?vid=12&sid=9ef15188-e1e0-4
768-b386-e96e27b6f995%40redis

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https://eds.p.ebscohost.com/eds/ebookviewer/ebook/bmxlYmtfXzI1NDYzMTlfX0FO0?
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