UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NÚCLEO BOLÍVAR
ESCUELA CIENCIAS DE LA SALUD
“DR. FRANCISCO VIRGILIO BATTISTINI CASALTA”
DEPARTAMENTO DE SALUD PÚBLICA
CÁTEDRA: INMUNOLOGÍA

Práctica 9 - 10
Blot – pcr-asa
PROFESOR: BACHILLER:

Lic C.I: V- García, Victoria

CIUDAD BOLÍVAR, MARZO DE 2022

 COMPARACIÓN DE LOS TIPOS DE BLOT
NORTHERN SOUTHER WESTERN
DETERMINACIÓN ARN ADN PROTEÍNAS

ELECTROTRANSFERENCI
MÉTODO CAPILARIDAD DIFUSIÓN SIMPLE
A

GEL DE
SOPORTE NITROCELULOSA AGAROSA, NYLON
POLIACRIDAMIDA

QUIMIOLUMINISCENCI
REVELADO AUTORRADIOGRAFÍA COLORIMETRÍA
A

MARCADOS / TINTA CHINA, AZUL DE COOMASSIE,

P32
TINCIONES NEGRO AMIDO ORO COLOIDAL
 Procedimiento para Western Blot

7. Las proteínas del gel se 1. Mediante

3. Los anticuerpos se electroforesis se
desplazan hacia el polo 5. Luego se transfieren mediante
detectan añadiendo una separan las
positivo y quedan atrapadas la aplicación de un campo
eléctrico y un tampón de anti-IgG humana marcada diferentes
por la membrana. con una enzima
transferencia para llevar las proteínas víricas
(peroxidasa) que produce por su diferente
proteínas desde el gel hacia la
una banda coloreada al peso molecular.
membrana. Para ello, se apilan en
8. Tras la transferencia, añadir un sustrato.
el orden descrito los siguientes
se suele proceder a la 6. Se dispone en el elementos (del polo negativo o
tinción del gel con sistema de cátodo al positivo o ánodo)
Coomassie Brilliant transferencia y se esponja, varios papeles de filtro
Blue (un colorante de aplica una corriente 4. Esta técnica identifica 2. Posteriormente se
empapados en buffer de
para comprobar que en eléctrica, de anticuerpos específicos frente a transfieren a papel de
transferencia, gel, membrana, más
efecto una parte magnitud acorde a las distintas proteínas. Las nitrocelulosa y
papeles de filtro empapados y otra secundariamente se
importante del material los materiales proteínas son separadas en primer
esponja. Este montaje, llamado incuban con el suero
proteico ha pasado a la empleados, al lugar mediante electroforesis en
coloquialmente sándwich. problema.
membrana).) tiempo disponible. ) geles de poliacrilamida.
 Se toma una frotis de la parte interna de la nariz o del
Pcr-asa para covid-19
1 fondo de la garganta del paciente. La muestra se lleva a
analizar al laboratorio
5. La máquina PCR calienta la
mezcla. Esto hace que el ADN de
Se extrae el ARN del virus y se purifica. Una enzima doble cadena se desenrede y el
2 llamada transcriptasa inversa convierte el ARN en ADN
cebador pueda unirse al ADN a
medida que se enfría.
Aquí es donde entran los
colorantes fluorescentes, añadidos
al tubo de ensayo mientras se
El ADN obtenido se mezcla con cebadores, unos fragmentos de copia el ADN. Se unen al ADN
ADN diseñados para unirse a zonas características del genoma copiado, lo que aumenta su
del virus. Al calentar y enfriar repetidamente una mezcla del
3 ADN del virus, los cebadores y una enzima sintetiza ADN, se fluorescencia haciendo que emitan
producen millones de copias del ADN viral. más luz, que permite confirmar la
presencia del virus.
Las moléculas de tinte fluorescente se unen al ADN del
virus durante la copia. Al unirse producen más luz, que se
4 usa para confirmar la presencia del virus en la muestra.
1. La técnica
3. El ARN del virus que se extrae utilizada para
de la muestra se purifica y se detectar el
mezcla con una enzima llamada coronavirus es la
transcriptasa inversa, que PCR, por las
convierte el ARN de una sola siglas en inglés de
cadena en ADN de doble cadena. “reacción en
cadena de la
polimerasa”
2. El ADN constituye
4. El ADN vírico se añade a un
nuestro material genético,
tubo de ensayo junto con
pero SARS-CoV-2 no
cebadores —secciones cortas de
contiene ADN de doble
ADN diseñadas para unirse al
cadena, sino ARN, de una
virus—, nucleótidos —los
sola cadena. Como las
bloques de construcción que
pruebas de PCR solo pueden
componen el ADN— y una
hacer copias de ADN,
enzima constructora del ADN.
primero hay que convertir el
ARN en ADN.