Trabajo Practico de Laboratorio:

REACCIONES DE LAS PROTEINAS

Cátedra: QUIMICA BIOLOGICA

UNLaR
Año: 2021
 1- Comportamiento Ácido- Base de
Aminoácidos

La característica más llamativa de los aminoácidos (AA) es

la existencia en una misma molécula de grupos
ácidos(capaces de ceder H+) y
grupos básicos (capaces de captar H+).

En medio ácido se comportan como bases, y en medio

básico se comportan como ácidos.

Las moléculas que presentan esta característica se dice que

son anfóteros o anfolitos.
Titulación de una solución de un aminoácido
* Los aminoácidos son compuestos anfóteros, es decir, que en solución
acuosa se comportan como ácidos o como bases, dependiendo del pH de
la solución.
* Los aminoácidos poseen dos grupos ionizables (amino y carboxilo).
* Los aminoácidos de carácter ácido (aspártico, glutámico) o básico
(histidina, arginina, lisina, triptófano) poseen un tercer grupo ionizable, en
la cadena lateral. Esto influye en su punto isoeléctrico.
 Curva de titulación del aminoácido neutro: Glicina

Se pueden realizar las siguientes observaciones:

1. A pH ácido: pH = 1, el 100% de las moléculas de

aminoácido Gly se encuentran en forma de catión.
2. Al ir añadiendo equivalentes de base, el grupo α-
carboxilo (-COOH) se disocia, cediendo protones al
medio y transformándose en un grupo carboxilato.
3. En el pI, prácticamente el 100% del aminoácido se
encuentra como ion dipolar o zwitterion, de forma tal
que el aminoácido presenta una carga neta nula.
4. Si se siguen añadiendo equivalentes de base, el grupo
amino (-NH3 +) se disocia.
5. 5. A pH muy elevados, el 100% de las moléculas de
aminoácido se encuentran en forma de ion negativo o
anión.
 * Medida del pH de una disolución

Un pHmetro o medidor de pH, mide la actividad del ion hidrógeno en

soluciones acuosas, indicando su grado de acidez o alcalinidad.
El medidor de pH mide la diferencia de potencial eléctrico entre un
electrodo de pH y un electrodo de referencia.
* Calibración del pHmetro
El electrodo de vidrio debe calibrarse para asegurar su precisión. Se utilizan buffers
de calibrado, de pH conocido.
Calibrar el pH metro con los tampones pH 7,02 y pH 4, siguiendo las instrucciones
del profesor/a.

* Precauciones
‐ El electrodo del pHmetro se conserva siempre sumergido en la solución de
conservación (KCl 3M).
‐ Lavar y secar el electrodo cada vez que se cambia la solución en la que se
sumerge.
‐­ No debe dejarse el electrodo en seco más de 5 minutos.
­‐ El bulbo del electrodo debe quedar sumergido completamente y no tocar las
paredes o el fondo del vaso.
 * Procedimiento:

Se realizará una curva de disociación de la glicina en solución ácida empleado para la

titulación una solución de NaOH.
Las variaciones de pH se determinan mediante el empleo de un indicador universal
Bogen o método potenciómetro.

Indicador Universal:

Indicador Color Color

  pH ácido pH alcalino
Azul de Timol rojo amarillo
Dimetilaminobenceno rojo anaranjado
Rojo de metilo rojo amarillo
Azul de bromotimol amarillo azul
Fenolftaleína incoloro fucsia
Material empleado:
El material básico empleado para una valoración ácido-base es:
* Bureta
* Mesa o soporte de fondo blanco - se emplea para apreciar el cambio de color de la disolución.
* Indicador de pH o Indicador ácido-base
* Matraz Erlenmeyer (matraz cónico)
* Disolución estándar (una disolución de concentración conocida, como NAOH en agua)
* Disolución o muestra a estudiar.
* Agitador magnético.
Metodología:
1- En un Erlenmeyer agregar 5 ml de solución acida de Gly y 3 gotas del indicador de
Bogen.
2- Empleando un embudo, cargar la bureta con la solución de NAOH 0.025 N. Enrace.
3- Desde la bureta agregue los volúmenes de NAOH a la solución de Gly- Bogen.
Mezcle con movimientos circulares.
4- Registre en la tabla luego de cada agregado , el valor de pH y el color que presente la
solución.

Volumen de NaOH Color pH

0,025 N (mL)
0,5    
 
3,5    
 
6,5    
 
9,5    
 
11,5    
 
12,5    
 
13,5    
 
16,5    
 
18,5    
 
Curva de titulación de la glicina:
 

pH

ml OH
 * Resultados:
* Representar los valores de pH (en el eje de ordenadas) frente al volumen de base añadido
(en el eje de abscisas) en la titulación del aminoácido.
* A partirde la representación gráfica, obtener los valores aproximados de los pKa de los
grupos ionizables del aminoácido y su punto isoeléctrico (pI).
* Escribirlas formas de disociación de la glicina (las estructuras) e indicar qué carga
presentará el aminoácido al pH inicial de la titulación.
2- Coagulación de Proteínas:

Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas
superiores a los 70 °C o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.

Técnica:
* Para ver la coagulación de las proteínas se puede utilizar clara de huevo, para conseguir más
volumen puede prepararse para toda la clase una dilución de clara de huevo en agua, de forma
que quede una mezcla aún espesa.
* Colocar en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo.
* Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero.
 
2- Reacciones coloreadas
A- Reacción Xantoproteica:
Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando
las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado.
La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de
grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la
prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro.

Técnica:
1- Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solución problema (clara de huevo ).
2- Añadir 1 cc. de HNO3 concentrado.
3- Calentar al baño maría a 100: C..
4- Enfriar en agua fría
5- Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%.
B- Reacción de Biuret:
La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a
la presencia del enlace peptídico (- CO- NH-).
Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una
sustancia compleja denominada biuret.

Técnica:
* Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albúmina de huevo.
* Añadir 2cc. de solución de hidróxido sódico al 20%.
* A continuación 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%.
* Debe aparecer una coloración violeta-rosácea característica.