Química de los Productos Naturales

“PN-V 2021-1”
Dr. Jan Spengler

Unidad 1: Productos naturales son moléculas

U1b: Aislamiento y Purificación de

Productos Naturales
 U1b: Aislamiento y Purificación de Productos Naturales
Contenido

Extracción Cromatografía
solido-liquido
¿Qué es?
Preparación del material
Extracción con Soxleth Cromatografía
Disolventes con sílice:
Extracción a vapor
-capa fina
Líquidos supercríticos
Extracción liquido-liquido -columna
-HPLC
Otras técnicas de separación
 Manipulación del material antes de la
extracción
Depende del material.
Brotes de fermentación : directamente a extraer
Otro (vegetal):

Separación: partes que contienen el producto de interés

Tratamiento mecánico

(Secado hasta peso constante)

Fines: conservación, estandarización, mejorar para la extracción

 La extracción solido-liquido y el extracto
Ejemplo: La infusión

Extracción de fase solida a fase liquida

Disolvente es agua

Factores:
Cantidad del disolvente: Solubilidad del producto
Temperatura:
Tiempo:

La relación de las concentraciones de una sustancia en cada uno de los fases, a una temperatura determinada, es
constante. Esta constante se denomina coeficiente de reparto y se puede expresar como:

K = [s u s t a n c i a] en fase 1 / [ s u s t a n c i a ] en fase 2

donde [sustancia] es la concentración de la sustancia.

La extracción solido-liquido con el Soxleth

El extractor Soxhlet (en honor a su inventor Franz von

Soxhlet) es utilizado para la extracción de compuestos,
contenidos en un sólido.

Permite la extracción exhaustiva con una determinada

cantidad de disolvente.
 Selección del Disolvente: Similia similibus solvuntur

El disolvente usado en la extracción puede ser agua u otro.

En general, el disolvente resembla algunas características de los compuestos soluble en el, por ejemplo, un disolvente
polar disuelve compuestos polares mejor que apolares (significado frase latin).
Es importante considerar que el disolvente en algún punto debe ser removido y no debe reaccionar con los compuestos.
 Extracción con fluidos supercríticos

El fluido supercrítico mas usado es CO2 que se encuentre en condiciones de presión y temperatura superiores a su punto
crítico que se comporta como “un híbrido entre un líquido y un gas”, es decir, puede difundir como un gas (efusión), y
disolver sustancias como un líquido (disolvente). (wiki)

¿A que disolvente parece el CO2 supercrítico? (Constante dieléctrica 1,5 a 200 bar y 40°C.)
Destilación por arrastre con vapor de agua.
 ¿Cómo se obtiene aromas?

Destilación por Enflorado Maceración

arrastre con vapor
de agua.
Otras Técnicas de Separación y/o
Purificación
Cristalización

Lo que no cristaliza:
Diferentes solubilidades en disolventes: Extracción liquido-liquido
Ejemplos: Método de Stas-Otto, …
Resina de intercambio catiónico

Adsorción – desorción: Cromatografía

Lo que no cristaliza (casi todo):
Separar por:

Diferentes solubilidades en disolventes:

*Extracción liquido-liquido
*Combinar extracción con modificación química (Ejemplos: Método de Stas-
Otto para alcaloides)

Resinas de intercambio iónico

Adsorción – desorción: Cromatografía

 Diferentes solubilidades en disolventes:
Extracción liquido-liquido

La relación de las concentraciones de una sustancia en cada uno de los fases, a una temperatura determinada, es
constante. Esta constante se denomina coeficiente de reparto (o partición).
*Extracciones repetitivas aplicando el disolvente en porciones es mas eficaz que una sola extracción con todo el volumen.
 Ejemplo: Fraccionamiento guiado por ensayo biológico

BNP 19 (34)
 Resinas de intercambio iónico

INP 18 (37)
 Resinas de intercambio iónico

Retención (ejemplo resina acida):

AH+ + resina-Na+  A+-resina inmovilizada + Na+

Liberación
AH+-resina- inmovilizada + Na+  AH+ + resina-Na+
 Cromatografía
La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas.

Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva.

Diferencias sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos dan como resultado una retención
diferencial sobre la fase estacionaria y, por tanto, una separación efectiva en función de los tiempos de
retención de cada componente de la mezcla. (wiki)
Cromatografía con sílice SiO2
“Capa Fina” (TLC, “thin layer
cromatography”)

Fuerza
capilar
 “Capa Fina preparativa”

La cantidad de un compuesto en una

mancha en una capa fina puede ser
suficiente para hacer un HPLC-MS y
un MALDI.

Existen placas de vidrio cubierto con

sílice para hacer capa fina
“preparativa”, es decir, obtener
cantidades relativamente altas.
Cromatografía con sílice SiO2 en columna

gravidad
 Cromatografía con columna
Columnas cromatografías rellenados con sílice permiten la separación y el aislamiento de cantidades hasta varios
gramos.
Se puede “columnar” por gravitación o bajo una presión ligera.
Los compuestos que suben primero en la capa fina, eluyen primero, aplicando el mismo eluyente. Hay versiones
automatizadas, hasta con detector UV.

INPC p.12
 Cromatografía con columna: Fracciones
Se colecta las fracciones habitualmente en tubos de ensayo.
Considerar tamaño.
Si los productos no son colorados, se analiza las fracciones con capa fino o HPLC.
Revelar la “Capa Fina”
Indicador de fluorescencia
“Capa Fina” Revelado de las placas con
reactivos

CAM Cer-ammonium nitrate, PMA phosphomolybdic acid, DNP dinitrofenol, I2 iodo

 Principio de la Cromatografía: Adsorción – desorción
Mezcla entre A y B aplicado sobre la fase estacionaria es arrastrado por la fase móvil (eluyente).

Si interactúa A mas que B con la fase estacionaria (silice), A se adsorbe mas que B y es por eso mas
retenido. B va a salir primero con el eluyente de esta fase estacionaria.

El compuesto adsorbido luego es arrastrado de la fase estacionaria con una fase móvil por desorción que
interrumpe la interacción compuesto – fase estacionaria.
 Adsorción – desorción: Cromatografía
Todos los compuestos de la mezcla (A, B y fase móvil o eluyente) interactúan con fase estacionaria.

A y B compiten individualmente con la fase móvil (o eluyente) en interactuar con la fase estacionaria (solido).

En cromatografía con sílice los interacciones son tipo polar (A, B y fase móvil o eluyente) – polar (fase
estacionaria).
 “Capa Fina”: ¿Qué sube mas?
Aumentando la polaridad de la fase móvil (eluyente) casi todos los compuestos suben mas.

Orden creciente de fuerza eluyente los disolventes más comúnmente empleados:

Hexano < tetraclorometano < cloroformo < diclorometano < acetato de etilo < acetona < 2‐propanol < metanol < agua

Se aplican comúnmente mezclas de disolventes de distinta polaridad.

High performance liquid chromatography
(HPLC)

La HPLC aplica el mismo principio

que la cromatografía con
columna, pero esta optimizado a
hacer mejor separaciones en
tiempos cortos.
Se aplica con frecuencia mezclas
de eluyentes con gradientes. Se
usa en escala analítica para
visualizar la composición de una
muestra. Normalmente se
visualiza con un detector UV.
 La separación con columna de sílice (SiO 2)
Se colecta las fracciones habitualmente en tubos de ensayo. Se analiza las fracciones con capa fina o HPLC.
Fracciones puras serán unidas.
 La separación con HPLC
Se colecta las fracciones habitualmente en tubos de ensayo. Se analiza las fracciones con capa fina o HPLC.
Fracciones puras serán unidas.
 Problemas mas frecuentes de la separación

Que no detectamos el producto en las fracciones.

Posibles causas y soluciones:
-Todavía no ha bajado de la columna.  Eluyir mas, o aumentar
la concentración del disolvente polar (cromatografía con SiO2)
-Demasiado diluido en las fracciones.  Aplicar mas muestra a
analizar.

Purificación incompleta (mezclas)

Que obtenemos fracciones mezcladas por sobrecarga  Re-
purificadas con columna mas grande
Tomando en cuenta la cantidad, capacidad, tamaño de
fracciones.
Que obtenemos fracciones mezcladas por dificultad de
separacion  otro eluyente, otro método

Buena separación sobrecarga