CINÉTICA DEL CRECIMIENTO

CELULAR EN BIORREACTORES

Tecnología de las Fermentaciones

Estequiométrico:
 la concentración final de células depende de la
concentración y composición del medio de cultivo.
 balance de materia y energía de los procesos de
crecimiento celular.
Cinético:
 velocidad en la que se lleva a cabo el proceso.
Condiciones ambientales (medio) nutrientes Población celular

sustratos
multicomponente multicomponente
reacciones en solución productos heterogeneidad en cada célula
equilibrio ácido-base. individual
cambio de las propiedades mútiples reacciones
calor
reológicas mecanismos de control interno
multifásico (gas, líquido) adaptabilidad
interacciones
distribución espacial no uniforme. mecánicas variabilidad genética
 MODELOS DE CRECIMIENTO CELULAR

Modelos estructurados Modelos no segregados

Modelos no estructurados Modelos segregados

Depende de….
 No Estructurado Estructurado

Caso ideal
• Un solo componente. • Multicomponente.
No
Segregado • Descripción de las células • Descripción de las células
como promedio como promedio.

Caso real
• Un solo componente. • Multicomponente.
Segregado
• Población celular • Población celular
heterogénea. heterogénea.
¿CÓMO CRECE UN MICROORGANISMO?

Ln X

Tiempo
Sistemas de cultivo

Discontinuo (Batch)

Continuo

Discontinuo alimentado (Fed-Batch)

 Cultivo Batch o Discontinuo

V constante
Xf
Xo So
Sf
Po

Pf
 Cultivo Continuo

SR
Reservorio

FI = FS
FI
FS X

X S
V constante S
P
P
D=F/V

D = µ (estado estacionario)
Discontinuo alimentado (fed-batch)

F, SR

X
VX
VF S≈0
V0 VP
 Cultivo en Batch (discontinuo)

Características

Tiempos cortos de procesos  trabajo en condiciones

asépticas (especialmente cuando se trata de medios de
cultivos ricos en nutrientes).

Períodos muertos: lavado, esterilizado, etc.

Opera a baja densidad celular.

Las concentración de los distintos componentes varía a

lo largo del proceso.
 Fases del crecimiento de un organismo
en un proceso en batch

Lag Exponencial Estacionaria Muerte

Ln X

Tiempo
 Fase Descripción µ

lag o latencia Las células se adaptan al nuevo ambiente µ≈0

aceleración Comienza el crecimiento µ < µmáx

Se alcanza la velocidad máxima de µ = µmáx

exponencial
crecimiento

Crecimiento disminuye por falta de

desaceleración µ < µmáx
nutrientes o inhibidores

estacionaria Se detiene el crecimiento µ=0

muerte Las células pierden viabilidad y se lisan µ<0

 Cultivo en Batch (discontinuo)

Las células crecen en condiciones homogéneas en cuanto a

transferencia de nutrientes (fte. de carbono, nitrógeno, minerales,
vitaminas, etc.).

 Las concentraciones de nutrientes y de biomasa del cultivo varían a

través del tiempo.
 El crecimiento de un microorganismo puede describirse a través de
una ecuación exponencial de acuerdo a:

𝑿𝒏 = 𝑿𝟎 ∗ 𝟐𝒏 (1)

Donde:
Xn = biomasa después de n generaciones
X0 = biomasa inicial
n = número de generaciones
 Cultivo en Batch (discontinuo)
 También puede decirse que la biomasa se incrementará en dX en un
determinado intervalo de tiempo dt de acuerdo a la ecuación:

𝒅𝑿 (2) Donde µ = velocidad específica de

= 𝐗𝟎 ∗ µ
𝒅𝒕 crecimiento de un organismo

 La velocidad específica de crecimiento tiene unidades de t-1 (min-1,

h -1 o d-1).
 Depende de :
• características intrínsecas del organismo
• factores externos (fte. de carbono, O2, T, pH)

Integrando la ecuación 2 se obtiene:

𝑿𝒕 = 𝑿𝟎 ∗ 𝒆µ∗𝒕 (3) ; o bien:

𝐥𝐧 𝑿𝒕 = 𝐥𝐧 𝑿𝟎 + µ ∗ 𝒕 (4)
¿Cómo se calcula µ a partir de datos experimentales?

ln X Despejando de la ecuación 4:

ln 𝑋𝑡 − ln 𝑋0
µ=
𝑡

m= µ

ln X0

tL tiempo

 Graficar ln X = f(t). A partir de la regresión lineal en la zona de

crecimiento exponencial, la pendiente es µ (µmáx).
 A partir de este gráfico, también puede calcularse el tiempo de
latencia.
 Otro parámetro importante a conocer en un proceso en batch
es el tiempo de duplicación de la biomasa (td).

A partir de la ecuación 4, 𝐥𝐧 𝑿𝒕 = 𝐥𝐧 𝑿𝟎 + µ ∗ 𝒕 (4)

se puede reemplazar Xt= 2 X0 y t = td

𝐥𝐧 𝟐𝑿𝟎 = 𝐥𝐧 𝑿𝟎 + µ ∗ 𝒕𝒅 (5)

Despejando:
ln 2
µ= (6)
𝑡𝑑

𝐥𝐧 𝟐
𝒕𝒅 = (7)
µ
 Influencia del substrato limitante en el crecimiento
microbiano
 La biomasa final obtenida es un proceso de cultivo esta
dada por la relación de rendimiento:

𝚫𝑿
𝒀𝑿/𝑺 = (8)
𝚫𝑺

 Donde YX/S = cantidad de biomasa obtenida (g) por por g de

substrato consumido.
 Ecuación de Monod

 Establece una relación entre la concentración de

substrato limitante y la velocidad específica de
crecimiento

 Ecuación que describe una hipérbola.

 Generalización de la ecuación de Michaelis-Menten para

un proceso enzimático:

µ𝒎á𝒙 ∗ 𝒔
µ= (9)
𝑲𝒔 + 𝒔
Representación gráfica del modelo de Monod

µmax = máxima velocidad

de crecimiento
S = concentración de
substrato limitante
Ks = constante de
saturación de substrato
(concentración de
substrato que da una
velocidad de crecimiento
de µmax/2)
 µmax s dx
µ= (9) = Xo µ (2)
KS + s dt

Cuando S >> Ks, μ = μmax, entonces

dx/dt sólo depende de Xo.

Si reemplazamos la ecuación 9 dentro de la 2 queda:

µmax s Xo
dx
= (10)
dt KS + s
 Cálculo de m y Ks

El cálculo de Ks y µmax es posible estimarlo

reordenando la ecuación 9 de Monod según
Lineweaver-Burk

1 KS 1
= + (11)
µ µmax s µmax

de tal manera que graficando 1/µ vs. 1/s se obtiene una

recta cuya pendiente es KS/µmax y la intersección en el
eje x es igual a -1/KS y la intersección en el eje y es
igual a µmax .
 Cálculo de m y Ks
Velocidad específica de crecimiento en función de la
concentración de sustrato (doble recíproca)
Otra modificación fue realizada por Langmuir:

s KS s
= +
µ µmax µmax
Efecto de la temperatura sobre el
crecimiento microbiano
 Efecto de la temperatura sobre m de un
cultivo aeróbico en glucosa de A. aerogenes
 Velocidad de consumo de substrato
Un incremento de biomasa dx se deberá a consumo ds y esa
relación esta dada por la formula de rendimiento
Yxs = dx
ds
entonces la velocidad de consumo de substrato si reemplazamos por la ecuación 2
se transforma en:
- ds =  max * X dX = Xo 
(2)
dt Yxs dt
o bien
- ds = qs * X
dt

donde qS es la velocidad específica de consumo de substrato

qS tiene unidades de gr. de substrato
qs = 
limitante consumido por gr. de
Yxs
biomasa por tiempo (gr. sust * gr X -1
* h-1).
FORMACIÓN DE PRODUCTOS
Productos de bajo peso molecular

Productos de alto peso molecular

1) Componentes estructurales.
2) Enzimas (intra o extracelulares).
 CLASIFICACIÓN DE LOS PRODUCTOS DE
FERMENTACIÓN DE BAJO PESO MOLECULAR

Productos directamente asociados con la generación de energía en la

célula (asociados al crecimiento): etanol, ácido acético, ácido láctico,
productos de las fermentaciones anaeróbicas.

Productos indirectamente asociados con la generación de energía

(semiasociados al crecimiento): ácido cítrico, aminoácidos,
nucleótidos.

Productos cuya síntesis no está claramente ligada directa o

indirectamente a la generación de energía (no asociados al
crecimiento): antibióticos, vitaminas.
 1 Asociado al crecimiento
2 Semiasociado al crecimiento
3 No asociado al crecimiento

X( )
P(---)

Tiempo Tiempo Tiempo

 Cinética de formación de productos
Producción de producto en función del sustrato
ΔP
YP/S =
ΔS

Producción de producto en función de la biomasa

ΔP qP 
YP/x= = Y PX *
ΔX

dp = qp * X qP = velocidad específica de
dt producción del producto
PRODUCTIVIDAD DE UNA FERMENTACIÓN EN
BATCH

X
Biomasa Qx = X = concentración de biomasa
t

Producto p p = concentración de producto

Qp =
t
Medidas de Performance de un Bioproceso
Productividad
mg / gr biomasa * h (qp)
mg / L * h (Qp)
Mas importante porque describe cuanto tiempo puede durar el bioproceso

Máxima Concentración de Producto (Máxima producción)

mg / L (producción volumétrica)
(importante cuando el costo de la recuperación y purificación del producto
representa un porcentaje alto en el costo total del bioproceso)

Rendimiento de Producto
gr de producto / gr de substrato
(importante cuando el costo del nutriente representa un porcentaje alto en el
costo total del bioproceso, no muy usual)
INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO
 Alta concentración de sustrato y/o productos:
-cambios en las propiedades fisico-químicas del medio
:presión osmótica,fuerza iónica,constante dieléctrica, y
actividad de solutos, pueden alterar la fluidez de las
membranas.
POSIBLES MECANISMOS DE LA ACCIÓN DE
INHIBIDORES

 Alteración de permeabilidad celular

 Alteración de la actividad de las enzimas
 Disociación de agregados enzimáticos
 Afecta la síntesis de enzimas
Influencia en la actividad funcional de las células
Determinación del coeficiente de mantenimiento y del
rendimiento de biomasa en función de sustrato

Y reordenando la ecuación (5), queda:

 Limitaciones del cultivo en Batch
Baja densidades de cultivo, si necesitamos obtener 100 g
Peso seco de Biomasa

YX/S = 0.4 gPS/g sust 250 g sustrato

•Inhibitorio o tóxico. Procesos de biorremedicación.

•Poco soluble.
•Inducir un cambio fisiológico en el microorganismo
(fermentación).
Puede cambiar la reología del medio de cultivo

Dificulta los procesos de agitación y

transferencia en un Biorreactor.
Limitaciones del cultivo en Batch

No es posible regular la velocidad específica de crecimiento

No hay condiciones constantes en toda la etapa del proceso.

Ciertos productos se sintetizan en condiciones

óptimas a
Velocidades de crecimiento diferentes a μmax.
Tiempos muertos

Lavado, preparación y esterilización del

Biorrreactor
Y el medio de cultivo para un nuevo ciclo.

Mayores gastos en la preparación de varios subcultivos

para la inoculación
Limitaciones del cultivo en Batch

 Mantenimiento de higiene industrial más costosa por mayor

riesgo debido al contacto potencial con microorganismos
patógenos o toxinas.