MÉTODOS ESPECIALES DE DIAGNÓSTICO

PARASITOLÓGICO, MÉTODO DIRECTO,

INDIRECTO Y MOLECULARES.

INTEGRANTES
GRUPO 21A
-BURGA PECSEN SEBASTIAN ALEXANDER - 2018224998 SUBGRUPO 1
-LÓPEZ MUÑOZ JANETH IRMA - 2019208400
-OJEDA CAMPOS KIARA MARYSOL - 2018218069
-MEDINA CIGÜEÑAS  MARSSELO ELI - 2019208421
DOCENTE: DR. JUAN FERNANDO CHAPOÑAN MENDOZA
Introducción
• El diagnó stico es un procedimiento
fundamental en donde se puede identificar
una enfermedad o síndrome.
• Se pueden utilizar varios métodos de
diagnó stico que van desde los métodos
directos, indirectos y moleculares. Los
métodos diagnó sticos han de ser rápidos,
precisos, sencillos y asequibles.
• Para algunas infecciones, un diagnó stico y
tratamiento tempranos pueden tener un
papel crucial en la curació n del paciente o en
reducir su morbimortalidad, ya que se
administra un tratamiento antibió tico
adecuado en el momento oportuno y
necesario.
 Objetivos
Identificar los métodos indirectos y directos de
los enteropará sitos

Identificar los métodos diagnó sticos de los

hemopará sitos

Identificar los diagnó sticos por métodos

inmunoló gicos y moleculares.

Identificar el diagnostico de la enfermedad de

Chagas
 Diagnó stico parasitoló gico
de enteropará sitos

MÉ TODOS MÉ TODOS
DIRECTOS INDIRECTOS

Concentració n Graham Coloraciò n western blot

Kinyoun Ziehl-Neelsen
Willis Ritchie ELISSA
modificada modificada
MÉTODOS DIRECTOS

Concentració n Willis Ritchie

separació n de coloració n en
Graham quistes frìo

Kinyoun Ziehl-Neelsen
Coloració n modificada modificada
 Diagnostico de
hemoparásitos
El rendimiento en la
El exámen microscó pico de bú squeda de estos parásitos
sangre es importante para el mejora con el uso de
diagnó stico de Trypanosoma distintas técnicas de
cruzi, Plasmodium concentració n y la
recolecció n en forma seriada.

Las infecciones parasitarias

pueden detectarse con dos
tipos de extendidos de
sangre: grueso y fino (gota
gruesa y gota fina).
Frotis extendido fino
Fina película de sangre extendida sobre
Características de correcto un portaobjetos, de modo que las células
extendido: sanguíneas estén dispuestas en una capa.

Su espesor debe
No debe cubrir
ir disminuyendo Cola Cabeza
toda la superficie
desde el inicio
del portaobjetos
hasta el final

Las bandas La sangre debe ir

laterales deben dispuesta en una Cuerpo
ser lisas. sola capa.
 Se pipetea una
pequeñ a cantidad
de sangre

Colocamos una
Damos por concluida
gota, en un
la realizació n del
frotis sanguíneo extremo del
portaobjeto

Técnica
Lo deslizamos hasta
Arrastramos el extremo que el extremo que
del portaobjetos
contacta con el porta,
esmerilado por la
superficie del tome contacto, a su
portaobjetos horizontal  vez, con la gota de
sangre
Movemos
ligeramente, de un
lado a otro, el
portaobjetos
esmerilado
 Gota Gruesa
La preparació n de Los elementos
gota gruesa consiste sanguíneos está n má s
en una capa gruesa de concentrados que en
eritrocitos sin un á rea equivalente
hemoglobina de un frotis delgado.

que la preparació n es
no permite una
má s eficiente para la
revisió n ó ptima de la
detecció n de pará sitos
morfología del
(sensibilidad
pará sito
aumentada).
 Coloque una gota
pequeñ a de sangre
al centro de la
laminilla

Distribuya la gota en
Colocamos un puente
un patró n circular
de tinció n sobre un
hasta que alcance el
cristalizador
tamañ o de 1.5 cm2 

Técnica Coloque las

Una vez fijada la laminillas en un lugar
extensió n, dejamos
secar la muestra
plano para que se
hasta el día siguiente sequen
completamente
Cuando la
extensió n esté seca
la fijamos con
metanol
 Diagnóstico por métodos
inmunológicos y moleculares

Wester Blot ELISA

Wester blot
Es una técnica analítica, ampliamente
utilizada, para el estudio de proteínas.

Permite la detecció n de una sola proteína

dentro de una muestra bioló gica.
Importancia
Se puede estimar el tamañ o de una
proteína

Confirma la presencia de modificaciones

post-traduccionales

Compara cuantitativamente los niveles

de proteína entre muestras
 Técnica
2. Electroforesis en
1. Preparación de la gel de Acrilamida
muestra
Las proteínas en el extracto se
separan de acuerdo a su tamañ o
Extracció n de las proteínas de mediante electroforesis.
las muestras bioló gicas

3. Transferencia
electroforética a una
membrana
Las proteínas son transferidas
electroforéticamente a un
soporte rígido o membrana
4. Hibridación del
anticuerpo
La membrana con las proteínas
inmovilizadas debe tratarse para
bloquear las zonas con ausencia de
proteínas
 • Después de un lavado de la membrana para eliminar
el anticuerpo no unido, se procede a detectar la
5. Detección
de las bandas localizació n de la banda en la membrana.
 ELISA
Acró nimo en inglés para
enzimoinmunoaná lisis de adsorció n.

Método analítico que depende de la

reacció n antígeno-anticuerpo

Tipos de
ELISA

Tipo
Directo Indirecto Competitivo
Sandwich
 Tipos de ELISA
Tipos de ELISA Ventajas Desventajas
Directo El protocolo es simple y rá pido Puede dar mayor ruido de fondo
Menor probabilidad de error

indirecto Alta sensibilidad El uso de anticuerpos

Alta flexibilidad secundarios puede dar lugar a
reactividad cruzada

Sandwich Alta flexibilidad, sensibilidad y El antígeno debe tener un tamañ o

especificidad suficientemente grande.

Competitivo Alta flexibilidad, sensibilidad y El protocolo es complejo

consistencia
Permite la detecció n de antígenos
de pequeñ o tamañ o
 Enfermedad causada por
Comprende: fase
aguda, fase crónica
y parasitemia
de Chagas Trypanosoma cruzi
escasa

Diagnó stico
presenta
se basa
limitaciones

debido a la baja sensibilidad

signos y síntomas clínicos
de las té cnicas parasitoló gicas

y la baja especificidad de las

datos epidemiológicos
inmunoló gicas

resultados de laboratorio

pruebas parasitológicas y
moleculares
 su sensibilidad varía
métodos permiten visualizar
la presencia de
dependiendo de la
fase en que se
parasitológicos parásitos encuentre la
enfermedad

En la fase aguda se utilizan

directos indirectos
examen de sangre al
xenodiagnóstico
fresco

extendido coloreado hemocultivo

inoculación en animales
gota gruesa
sensibles
 Amplifica el ADN

PCR alta sensibilidad

y especificidad
satélite y el ADN de
minicírculo de
kinetoplasto de T. cruzi

Limitacione
Ventajas
s
en casos agudos, en Chagas
Costo e infraestructura
congénito, en inmunodeficiencias

resultan adecuadas en la
sensibilidad en fase cró nica de la
evaluació n y seguimiento del
enfermedad
tratamiento
 Conclusiones
La tinció n de Ziehl-Neelsen y Kinyoun, utilizan prá cticamente los mismos reactivos y colorantes
(Carbol fuscina, alcohol á cido), así como el mismo colorante de contraste (azul de metileno). La
diferencia esta, en la preparació n de estos reactivos y en el procedimiento empleado de cada técnica.
Para la tinció n de Ziehl Neelsen se tiene que calentar la preparació n o portaobjeto, mientras que en
la de Kinyoun (coloració n en frío) no se tiene que calentar la preparació n.

Identificamos los métodos diagnó sticos de pará sitos en sangre que comprendieron el método
de la gota gruesa y el método del frotis extendido fino, estas pruebas facilitan el diagnostico
de los holopará sitos para poder combatir la infecció n

Identificamos los métodos diagnó sticos por métodos inmunoló gicos y moleculares, los cuales
son Wester Blot y ELISA, herramientas muy importantes que se basan en la relació n
antígenos-anticuerpos.

Identificamos el tipo de pruebas que se deben realizar para obtener un correcto diagnostico de la
enfermedad de Chagas, estos métodos consistían en pruebas inmunoló gicas y métodos
parasitoló gicos.
Referencias bibliográficas
• Técnicas moleculares para el diagnó stico de la enfermedad de Chagas. Saber [online]. 2015, vol.27, n.3, pp.
359-371. ISSN 2343-6468.

• Longo, D., 2020. Atlas De Hematología Y Aná lisis De Frotis De Sangre. [online]

Accessmedicina.mhmedical.com. [citado 11 Julio 2020]. Disponible en :
<https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?sectionid=114913044&bookid=1717>

• Gutierrez S, Arrospide N. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓ STICO DE

MALARIA. Lima-peru; 2003.

• Magaró H, Uttaro A, Serra E, Ponce de Leon P, Echenique C. TÉ CNICAS DE DIAGNÓ STICO PARASITOLÓ GICO
[Internet]. FACULTAD DE CIENCIAS BIOQUÍMICAS Y FARMACÉ UTICAS. UNR. AREA PARASITOLOGÍA. [citado
11 Julio 2020]. Disponible en : http://fmh.aulavirtualusmp.pe/mod/resource/view.php?id=108253
• Advansta. Aná lisis de proteinas. [Internet] ( Consultado 12 de julio 2020) Dsiponible en:
http://www.ecogen.com/upfiles/A56009.pdf

• Felipe R. Técnicas inmunoenzimá ticas para ensayos clínicos de vacunas y estudios inmunoepidemioló gicos.
Finlay [online]. 2012, vol 1.