UNIVERSIDAD NACIONAL

UNIVERSIDAD
UNIVERSIDADNACIONAL
NACIONAL DE PEDRO RUIZ
DE TRUJILLO
TRUJILLO
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
GALLO
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA DE POSTGRADO

Producción industrial de vitamina B12 por Pseudomonas

denitrificans
Utilizando jarabe de maltosa y licor de macerado de maíz como el
costo-efectivo
Sustratos de fermentación

DOCENTE:
Dr. Ing. Augusto Castillo Calderon

ALUMNO:
Ing. Uriarte Tirado Wilmer

LAMBAYEQUE – PERÚ
2018
 Producción industrial de vitamina B12 por
Pseudomonas denitrificans
Utilizando jarabe de maltosa y licor de macerado de
maíz como el costo-efectivo
Sustratos de fermentación
La Pseudomonas denitrificans aeróbica

 Es ampliamente utilizado para la vitamina B12 industrial y comercial

fermentación, debido a su mayor productividad en comparación con los
microorganismos anaerobios productores de vitamina B12.
 Bajo costo

 Se encontró que la maltosa jarabe (un jarabe de almidón de maíz de bajo costo por
medio de licor enzimático o ácido) y licor de maceración de maíz (CSL, a
subproducto de la industria del almidón) fueron muy aplicables a producción de
vitamina B12 por P. denitrificans.
 La vitamina B12

Los compuestos complejos de la familia del cobalto corrinoide, que es una de las más atractivas y
fascinantes moléculas en el mundo de la ciencia y medicina . Las formas biológicas de la vitamina
B12 incluyen adenosilcobalamina y metilcobalamina. Como un importante factor de crecimiento
para microorganismos y animales

"el factor de la anemia anti perniciosa"

 La vitamina B12
 Utilizada para el tratamiento de la anemia perniciosa y periférica neuritis, y se encontró que la
vitamina B12 era la cofactor esencial para la metionina sintasa y (R) -metilmalonil-CoA mutasa
en animales y humanos.
 Mutagénesis y la ingeniería genética

 Mutagénesis e ingeniería genética, algunos industriales microorganismos han sido

explotados con éxito para la producción comercial de vitamina B12, como Pseudomonas
denitrificantes, Propionibacterium freudenreichii, Propionibacterium Y Germani.
 Objetivo

 Optimizar y desarrollar una fermentación alternativa o rentable para la producción

industrial de vitamina B12 utilizando jarabe de maltosa, licor de maceración de maíz
(CSL) y betaína como el sustratos principales.
 Materiales y métodos
 Microorganismo y medios Pseudomonas denitrificans, una cepa industrial donada por Huarong
Pharmacy Corporation (Shijiazhuang, China), fue utilizado para la producción de vitamina B12.
 Se mantuvo en agar inclinado que contiene (g / l): Medios ya específicos según el autor.
 Obtención

Fermentación en fermentador de
Fermentación en matraces agitados
120,000 l.

El precultivo se llevó a cabo en un matraz

Erlenmeyer de 250 ml que contiene 40 ml de La fermentación en tres etapas se realizó en
medio de siembra inoculado con células de un fermentador de 120,000 l, incluyendo
inclinación fresca, y se cultiva a 30 C en una dos etapas de crecimiento de semilla y una
coctelera rotativa a 180 rpm durante 20 h. etapa de la producción de vitamina B12.
ESTERILIZADOR
FERMENTADOR
 Métodos analíticos.
 La concentración de vitamina B12 en el caldo de fermentación fue determinado por HPLC.
Muestra de caldo (25 ml), a la cual 2,5 ml de NaNO2 al 8% (p / v) y 2,5 ml de ácido acético
glacial se agregaron ácidos, se hirvieron durante 30 min.
 La biomasa celular se cuantificó con peso de células secas (DCW).

De acuerdo con el método descrito por Niu et al.

un sistema HPLC (Waters 2695) equipado con un
Detección de Dispersión Ligh Evaporativa
Alltech 2000 (Alltech Associates, Deerfield, EE.
UU.)
 Resultados y discusión
 Efectos del jarabe de glucosa y el jarabe de maltosa en la fermentación de P. denitrificans La fuente de
carbono es uno de los principales componentes nutricionales involucrado en un medio de fermentación,
pero el habitual refinado azúcares (por ejemplo, glucosa, sacarosa y maltosa) son antieconómicos a una
fermentación industrial.
 Investigacion hecha en levaduras
 Si los almíbares de almidón de maíz podrían reemplazar la sacarosa refinada por producción de vitamina B12, la
fermentación de P. denitrificans procesos con jarabe de glucosa y jarabe de maltosa como el carbono las fuentes
fueron, respectivamente, llevadas a cabo en matraces de agitación.

Efectos del jarabe de glucosa y el jarabe de

maltosa en el crecimiento celular (a), pH (b)
y producción de vitamina B12 (c) durante el
shakeflask de P. denitrificans cultivo. Los
valores representan los promedios de tres
mediciones y las barras de error indican la
desviación estándar
 Para explorar si CSL es aplicable a la
vitamina B12
 La producción por P. denitrificans, las composiciones de aminoácidos en CSL (Hebei Zhongying Starch Co.,
Ltd., China) fueron analizado. Como se muestra en la Fig. 2, el CSL incluyó dieciocho diferentes tipos de
aminoácidos, y la concentración total de estos aminoácidos fueron hasta 23.093 mg por 100 mg de CSL, que
demostró que el CSL sería un apropiado fuente de nitrógeno orgánico para la fermentación microbiana.

Fig. 2. Concentraciones de aminoácidos contenidas en licor de maceración de maíz. Los

valores representan los promedios de tres medidas y barras de error indicar desviación
estándar
Tabla 1 Diseño experimental y resultados del compuesto Tabla 2 Resultados del análisis de regresión del compuesto
central diseño central diseño
Fig. 3 Presentación tridimensional de la superficie de respuesta para las concentraciones de jarabe de maltosa, betaína y licor
de macerado de maíz en la vitamina Rendimiento de B12
La fermentación industrial de vitamina B12 se realizó utilizando el
medio de fermentación optimizado en un fermentador de 120,000 l, en
el que las condiciones de fermentación eran de acuerdo con nuestras
estrategias de control previas. Figura 4 presentó los perfiles típicos de
la fermentación de los parámetros en línea, como velocidad de
agitación, flujo de aire, DO y pH.
De la Fig. 4, la velocidad de agitación y el flujo de aire eran controlado a 78 rpm y 850-1100
m3 / h, respectivamente. Bajo este tipo de estrategia de suministro de oxígeno, el DO era
disminuyó bruscamente a menos del 2% a las 30 h, y luego se mantuvo en este nivel hasta el final
de la fermentación.

Fig. 4 Perfiles de línea parámetros de fermentación (Velocidad de agitación, flujo de aire, pH; Oxígeno disuelto, DO; Oxígeno tasa de aceptación, Carbón tasa de evolución de
dióxido, CER) con jarabe de maltosa y maíz licor empinado como principal sustratos para P. denitrificans cultivo en 120,000 l fermentador
Era bien sabido que la melaza de remolacha fue la más utilizada fuente de carbono para la
fermentación industrial de vitamina B12 por P. denitrificantes. Sin embargo, los componentes
indeseables en la remolacha la melaza causaría una vitamina B12 inestable

Fig. 5 Curso de tiempo del total azúcar (a), nitrógeno amino (a),
crecimiento celular (b) y vitamina B12 producción (b) con maltosa
jarabe y licor de maíz como los sustratos principales para P.
cultivo denitrificans en una Fermentador de 120,000 l Valores
representan los promedios de tres medidas y barras de error
indicar desviación estándar
 Conclusiones

Basado en la investigación de los efectos del jarabe de maltosa en P. proceso de

fermentación denitrificans, junto con el análisis las composiciones de aminoácidos
en el CSL, este documento con éxito estableció un medio de fermentación rentable
para la producción industrial de vitamina B12 por P. denitrificans en un fermentador
de 120,000 l, con jarabe de maltosa y maíz escarpado licor como los sustratos
principales. Como resultado, el industrial el rendimiento de vitamina B12 podría
alcanzarse a 198.27 ± 4.60 mg / l.
 Bibliografía
1. Martins JH, Barg H, Warren MJ, Jahn D (2002) Microbial roduction of vitamin B12. Appl Microbiol
Biotechnol 58:275–285
2. Randaccio L, Geremia S, Demitri N, Wuerges J (2010) Vitamin B12: unique metalorganic
compounds and the most complex vitamins. Molecules 15:3228–3259
3. Sally P, Stabler MD (2014) Vitamin B12 deficiency. New Engl J Med 368:149–160
4. Takahashi-In˜iguez T, Garcı´a-Hernandez E, Arreguı´n-Espinosa R, Flores ME (2012) Role of
vitamin B12 on methylmalonyl-CoA mutase activity. Zhejiang Univ-Sci B (Biomed Biotechnol)
13(6):423–437
5. Survase SA, Bajaj IB, Singhal RS (2006) Biotechnological production of vitamins. Food Technol
Biotechnol 44(3):381–396
6. Kang Z, Zhang J, Zhou J, Qi QS, Du GC, Chen J (2012) Recent advances in microbial production
of d-aminolevulinic acid and vitamin B12. Biotechnol Adv 30(6):1533–1542
7. Wang P, Wang YS, Su ZG (2012) Improvement of adenosylcobalamin production by metabolic
control strategy in Propionibacterium freudenreichii. Appl Biochem Biotechnol 167:62–72
8. Li KT, Zhou J, Cheng X, Wei SJ (2012) Study on the disolved oxygen control strategy in large-scale
vitamin B12 fermentation by Pseudomonas denitrificans. J Chem Technol Biotechnol 87:1648–
1653
 CUESTIONARIO

¿Para qué son utilizadas las pseudomonas

denitrificans?
Es ampliamente utilizado para la vitamina B12
industrial y comercial fermentación, debido a su
mayor productividad en comparación con los
microorganismos anaerobios productores de vitamina
B12.
¿Qué es la mutanogenesis e ingenieria genetica?

Mutagénesis e ingeniería genética, algunos industriales

microorganismos han sido explotados con éxito para la producción
comercial de vitamina B12, como Pseudomonas denitrificantes,
Propionibacterium freudenreichii, Propionibacterium Y Germani.