Fibras de quitina regeneradas con

nanocristales de celulosa bacteriana

como biomateriales de sutura
Huanling W. GarethR.Williams., JunziWu., JianrongWu.
ShiweiNiu. Hey Li. Haijun Wang. LiminZhu

Equipo:
Bracamonte Estrada Christian
Romero López Luz Haydeé
Abstract gráfico
Palabras claves
● Regenerated chitin fiber (RC)
● Bacterial cellulose nanocrystals (BCNCs)
● Suture biomaterial
● Biocompatibility
Introducción
La quitina y la celulosa bacteriana (BC) han sido ampliamente estudiados debido a su excelente
biocompatibilidad. La quitina ha atraído la atención, por su alta biodegradabilidad, sin embargo su fuerza
mecánica es muy baja, y por lo tanto solo se ha investigado para el recubrimiento de sutura. Para mejorar la
calidad de quitina que pueda ser utilizada para suturas, es necesario hacer modificaciones químicas o desarrollar
una nueva fibra, ajustando los parámetros del spinning especialmente por una nueva disolución del solvente.
Los nanocristales de celulosa (CNCs) , ofrecen una buena opción para mejorar el rendimiento mecánico, son
cristales con un ancho de 5-20nm y de largo 100-300nm.
Experimental
Materiales
● Celulosa Bacteriana (BC)
● Polvo de quitina marca Sigma-Aldrich
● Lisozima de grado biológico( ≥ 20,000 U/g)
● H2SO4 (95-98%)
● Hidróxido de Sodio (≥ 97% )
● Carbamida (urea≥ 99%)
● Célula L929 (Fibroblastos de ratón, Instituto de bioquímica y biología celular)
● Suturas de poliamida monofilamento (H501, 3-0, negro, Shanghai Jinhuan Medical)
Preparación y caracterización de nanocristales
de celulosa bacteriana (BCNCs).

● La celulosa bacteriana (BC) se trató con NaOH al 0.4% (p/v) en agua.

● Se lavó con agua destilada hasta que el drenante alcanza un pH neutro.
● Se cortaron gránulos cúbicos de la muestra de 2-5 mm^3
● Los cubos se procesaron en un homogeneizador Ultra Turrax (IKA) a 5,000 rpm por 2
minutos y se obtuvo una pasta de celulosa.
● La pasta húmeda (5.0g) se hidrolizo con H2SO4 (20 ml) con 60% a 65% v/v a 35 °C por 2-
3 hrs y agitación de 400 rpm.
● La pasta se diluyó con agua ultra fría para detener la hidrólisis después se centrifugó a
11,000 rpm a 4 °C por 10 min para obtener los productos hidrolizados .
● Diálisis con un tubo de diálisis de celulosa regenerada (8000-14,000 MWCO, Thermo
Scientific) contra agua ultrapura.
● Se realizó la sonicación en la suspensión de nanocristales de BC utilizando un Branson
Sonifier (Branson Ultrasonics) durante 30 minutos, dentro de un anicebath
● La suspensión coloidal resultante se centrifugó a 8000 rpm y 4 ° C durante 5 minutos, y se
recogió el sobrenadante turbio.
● Finalmente se almacenó a 4 ° C antes de su uso.
● La concentración de BCNC se verificó mediante liofilización del sobrenadante y se
encontró que era de aproximadamente 5 mg / ml
 Fabricación de fibras e hilos
2.3.1 Preparación de las fibras de quitina regenerada
(RC)

5g de polvo de quitina fue El resultado fue congelado a -30°C

Después se le hizo un wet spinning .
disperasada en 100g de una por 4 horas después se descongeló a
solución con NaOH, urea y temperatura ambiente, se repitió
H2O. dos veces.
 Fabricación de fibras e hilos
2.3.2 Preparación de fibras BCNC/RC
Se procedió a
realizar el wet
spinning .

5 g de polvo de quitina fue El resultado fue congelado a -30°C 10 mL de BCNC fue dispersado en la
disperasado en 90 g de una por 4 horas, después se descongeló a solución de quitina con agitacion de
solución con NaOH, urea y temperatura ambiente,. 2 H. Para preparar el spinning
H2O. dopado BCNC/RC.
Preparación de los hilos
1. Con las fibras, se procedió a enrollar 30 fibras usando el HC 907 twisting machine, para
formar hilos.
2. Una solución de quitina fue preparada para recubrir usando el mismo método que para el
spinning de RC dopada, pero con una concentración de 1.5% w/w.
3. Los hilos enrollados fueron después pasaron por la solución de recubrimiento.
4. Después se utilizó un padding mangle, y el hilo fue pasado a través de una baño de
coagulación conteniendo 5% v/v H2SO4 solución acuosa.

HC 907 twisting machine Padding mangle

 Equipos de caracterización de
fibras e hilos.
● Análisis Morfológico con Microscopía Electrónica de Barrido (SEM).

● Espectroscopia infrarroja de transformada de Fourier (FTIR).

● Prueba mecánica de tracción para ver su resistencia con T150 UTM

Nano tensile test system (Agilent)
● Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM)

● Dispersión de luz dinámica

Degradación enzimática

● Se agregaron en fibras RC no recubiertas y BCNC/RC 50 ml de solución de PBS con pH

7.4, seguido de lisozima 0.2 mg/ml.
● Se incubó la mezcla durante 1-15 días con aguitación de 60 rpm.
● La degradación se cuantificó en términos del porcentaje de masa restante de masa
restante, que se calculó mediante:

● Se eliminaban y añadían todos los días 10 ml de la mezcla de lisozima para evitar la

inactivación del mismo.
In vitro citocompatibilidad
1. Células L929 (ratón) fueron seleccionadas para el ensayo de citocompatibilidad.
2. Se preparó la solución, para después añadir 2.0 mg de filamentos de BCNC/RC y los hilos
recubiertos de BCNC/RC en un 24-well plate. Se lavó con PBS para eliminar residuos de alcohol.
3. Las células fueron implantadas en cada pozo, e incubadas por 1 o 3 días.
4. Después de la incubación las células se estudiaron por dos métodos, uno por el cultivo de platos que
fueron removidos de la incubadora.
5. En instancia los primeros platos fueron removidos de la incubadora, y lavados con PBS (pH 7.4) dos
veces.
6. Se observó la morfología bajo un microscopio de fluorescencia invertido. ( XDS-500D)
In vitro citocompatibilidad
1. En el segundo método se hizo el ensayo con una solución de MTT (Thiazolyl Blue
Tetrazolium Bromide) que fue depositado en los pozos.
2. Después de la incubación se transfirieron a un plato de 96 pozos. La solución resultante
morada fue medida a 570 nm con el lector de microplacas.(Multiskm, ThermoFisher)
 Experimento animal
● Utilizaron ratones machos con seis semanas de edad. Proporcionado por Shanghai Slack
Laboratory Animals Inc.
● Se hicieron 4 grupo de animales, y 6 ratones por grupo. 24 en total.
● Grupos:
● Grupo I: Control negativo, sin suturar.
● Grupo 2: Control Positivo, animales suturados con el producto comercial PA (poliamida)
● Grupo 3: Animales suturados con el hilo recubierto y enredado de BCNC/RC.
● Grupo 4: Animales suturados, con hilo enredadas pero sin recubrir de BCNC/RC.

Después de 5-10 días después de la cirugía, 3 ratones de cada grupo fueron sacrificados
Resultados y discusiones

Caracterización de los BCNCs.

Morfología

● (a) BCNCs
● (b), (d) y (c) BCNCs hidrólisis
con H2SO4 a 60 % y 65%
DLS
● Se relaciono el tamaño de partícula según su procesamiento
previo.
● Se obtuvieron tamaños de partícula de 455.3 ± 17.6, 442.5 ±
21.6 y 366.8 ± 13.2 nm . Donde el primer resultado fue
caracterizado por el DLS, el segundo por el TEM y finalmente por
el ultrasónico.
 Fabricación y caracterización de quitina
regenerada y filamentos de BCNC/RC
La celulosa y la quitina tienen estructura molecular similar por lo tanto se
esperaba que tuvieran una buena compatibilidad y que se mezclaran bien.

❖ El BCNCs se pudo dispersar de forma efectiva en la solución quitina,

con ninguna fase de separación, incluso dejándola 10 dias.
❖ Los filamentos de RC y BCNC/RC fueron fabricados fácilmente por el
método de wet spinning.
Fabricación y caracterización de quitina
regenerada y filamentos de BCNC/RC

a) 19.8 ±1.2 ⲙm (RC)

b) 20.8±1.3 ⲙm (BCNC/RC)

La morfología de los hilos

enredados
a) El diámetro de los hilos
fue de 200 ⲙm

a) Superficie de las fibras

recubiertas
b) Torsion del hilo
 FTIR

2900cm-1
1100cm-1

3282 cm-1---3340cm-1
FTIR
 Caracterización de propiedades
mecánicas

Numerosos estudios, han probado que la adicción de nanocristales de celulosa (CNCs)

pueden incrementar la fuerza de la matriz, pero disminuir la extensibilidad. La clave para
incrementar la fuerza mecánica se logra al agregar los 10 ml de BCNCs. Se concluyó
que se pueden agregar de 5-10ml de BCNC para producir fibras con una propiedad
mecánica óptima.
Caracterización de propiedades mecánicas-
Degradación enzimática
Evaluación de la citocompatibilidad in vitro.
Evaluación de la biocompatibilidad in vivo.
 Conclusión

➢ Los nanocristales de celulosa bacteriana (BCNC) se generaron

exitosamente con dimensiones 20-50 nm de grosor y 100 nm de
longitud.
➢ Los hilos que se obtuvieron no dejan cicatrices severas en la
herida.
➢ Se espera que este hilo de mezcla de BCNC/RC sea utilizado en
aplicaciones de suturas médicas.