2.1.

3 Teoría del proceso

cromatográfico
EQUIPO 3
De la Cruz de la Cruz Jesús
Noyola Escamilla Uriel
Olvera Cervantes B. Noe
Valentín García Stephanie C.
OBJETIVO
Comprender los factores que determinan la eficiencia, la resolución y la
selectividad de un sistema cromatográfico
INTRODUCCIÓN

● Velocidad media a la que un soluto se mueve

depende de la fracción de tiempo que pase
en la fase móvil
● La diferencia de la velocidad hacen que los
componentes de una mezcla se separan en
bandas o zonas a lo largo de la columna

FUENTE: Fundamentos de Quimica Analitica. Douglas A. Skoog et al.

(2005)
 Cromatograma

Un cromatograma es la representación de la respuesta del

detector en función del tiempo de elución.

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

TIEMPO DE RETENCIÓN
Tiempo de retención

Tiempo requerido para que la banda llegue

al detector.

Proporciona una medida de la velocidad media de

migración de la fase móvil

FUENTE: Fundamentos de Quimica Analitica. Douglas A. Skoog et al.

(2005) Pág 935
 1. Coeficiente de reparto
Es el cociente entre el número de moles de soluto en la fase estacionaria y el
número de moles de soluto en la fase móvil.

● Cs = es la concentración del soluto en la fase estacionaria

● Cm = es la concentración del soluto en la fase móvil

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

 Relación entre tiempo de retención y coeficiente
de reparto:
Factor de capacidad:

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

Ejercicio. Factor de capacidad
Se inyecta en un cromatógrafo de gases una mezcla de benceno, tolueno y
metano. El metano dio un pico muy agudo a los 42 segundos, mientras que el
benceno tarda 251 segundos en aparecer, y el tolueno 333 segundos. Hallar el
factor de capacidad de cada soluto.
Ejercicio. Coeficiente de reparto
En el ejemplo anterior, el gas metano dio un pico agudo a 42 s, mientras que el benceno precisó 251 s. La
columna cromatográfica tubular abierta tiene un diámetro interior de 250 um, y está recubierta en su cara
interior con una capa de fase estacionaria de 1,0 um de espesor.

Estimar el coeficiente de reparto (K = Cs/Cm) del benceno entre la fase estacionaria y móvil.

Pasos a seguir:

● Calcular los volúmenes relativos de las fases móvil y estacionaria (nota: los volúmenes relativos
de las fases móvil y estacionaria son proporcionales a las áreas relativas de las secciones
transversales, porque cada fase se extiende por todo el tubo. Por tanto, Vs/Vm)
● Área de la sección transversal de la columna = π*r12
● Área de la sección transversal del recubrimiento = 2π*r2*grosor
 2. Plato teórico y Eficiencia
Altura de plato (H):

● equivale a la longitud de una columna dividida entre el número de platos

teóricos.
● es la constante de proporcionalidad entre la varianza (σ2) de la banda y la
distancia que ha recorrido (x).

Cuanto más pequeña es la altura de plato, más estrecha es la banda.

FUENTE: Análisis Químico Cuantitativo. Daniel C. Harris (2013)

FUENTE: Análisis Químico Cuantitativo. Daniel C. Harris (2013)
 Se puede calcular el número de platos o eficiencia de un cromatograma con la
ecuación:

Base:

Mitad de altura:

FUENTE: Análisis Químico Cuantitativo. Daniel C. Harris (2013)

Factor de coleo o Tailing Factor

● El factor de coleo (T), se define como la

relación de la distancia del ancho del
pico, W0.05, dividido entre dos veces la
distancia, f , del máximo del pico hacia el
lado izquierdo del pico.

● Estas distancias deben medirse a un

punto que corresponda a un 5 % de la
altura partiendo de la línea base.

Fuente: Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. MGA 0241 Cromatografía. 11 Ed. 2014
 Causas de la asimetría del pico
● Interacciones secundarias del analito con ● Ensamblaje de la columna
la fase estacionaria
● Interacción de solutos quelantes con
● pH de la fase móvil incorrecto/no optimo restos de metales en la fase estacionaria

● Vacío en la entrada de la columna debido ● Volumen muerto de la columna (entre el

a la presión del sistema punto de inyección y el punto de
detección)
● Deterioro de columna
● Gradientes de temperatura dentro de
● Disolvente de muestra o volumen de columnas
inyección inadecuados
● Configuración inapropiada de respuesta
del detector

Fuente: CHROMacademy. HPLC Troubleshooting Guide – Peak Tailing. Link: https://www.chromacademy.com/chromatography-HPLC-Troubleshooting-Peak-Tailing.html

Shimadzu. Abnormal Peak Shapes. Link: https://www.shimadzu.com/an/support/lib/lctalk/92/abnormalpeakshapes.htm
 Ejemplos de formas de pico anormales

Fuente: Shimadzu. Abnormal Peak Shapes. Link: https://www.shimadzu.com/an/support/lib/lctalk/92/abnormalpeakshapes.htm

Volumen muerto en la conexión de la línea de flujo

Efectos de los solventes de muestra en la forma del pico

Fuente: Shimadzu. Abnormal Peak Shapes. Link:

https://www.shimadzu.com/an/support/lib/lctalk/92/abn
ormalpeakshapes.htm

Causas principales de formas de pico anormales

 N de un pico asimétrico

Foley y Dorsey derivaron el

número de platos teóricos:

FUENTE: Análisis Químico Cuantitativo. Daniel C. Harris (2013)

Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)
Ejercicio
Un soluto con un tiempo de retención de 407 s tiene una anchura en la base de 13
s en una columna de 12,2 m de longitud. Hallar el número de platos y la altura de
plato.
ECUACIÓN DE VAN DEEMTER
La ecuación de Van Deemter expresa la altura del plato, H, en función de
esas fuentes.

donde A, B y C son constantes para determinado sistema, y se relacionan

con los tres factores principales que afectan a H; u es la velocidad lineal
promedio del gas acarreador
en cm/s.
FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)
Velocidad de la fase móvil, u
•El valor de u es igual a la longitud L de la columna dividida entre
el tiempo, tM, en que se eluye una sustancia no retenida.

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

A , representa la difusión por arremolinamiento

•se relaciona con el tamaño de partícula y la geometría

del empaquetamiento de la siguiente manera:

•donde λ es una constante empírica de la columna (factor de

empaquetamiento), con valores típicos de 0.8 a 1.0 para una
columna bien empacada, y dp es el diámetro promedio de
partícula.
FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)
B representa la difusión longitudinal
•La difusión en la fase móvil está representada
por:

•donde y es un factor de obstrucción con valor

típico de 0.6 a 0.8 y DM es el coeficiente de difusión.
FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)
C es la transferencia de masa entre fases
se debe al tiempo finito necesario para que se establezca el
equilibrio del soluto entre las dos fases al moverse entre las fases
móvil y estacionaria.

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)
 FACTOR DE RETENCIÓN (capacidad)
El factor de retención k, para el máximo de una
muestra, está definido como:

● Un factor de retención grande favorece una buena separación

pero COMPROMETE EL TIEMPO (MAYOR)

Los valores preferidos de factor de retención son 1 a 5

Valores bajos de k: recorren con rapidez la columna
Valores altos de k: largos tiempos de retención y de análisis

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

 3. Selectividad o
Factor de
separación
● Mide la retención relativa de
los analitos

Donde:
● La selectividad es una manera ∝ Factor de separación
de medir la eficiencia de una
separación cromatográfica. Coeficiente de
KB distribución para la
especie más retenida.

KA Coeficiente de
distribución para la
especie menos
retenida.
FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)
 Coeficiente de distribución Coeficiente de distribución para la
KA para la especie menos KB especie más retenida.
retenida.

tR Tiempo de Retención del analito (soluto)

tM Tiempo de Retención fase móvil (tiempo muerto)

4. RESOLUCIÓN
Indica cuál es la separación entre dos bandas:

- Anchura y tiempo de retención (cuanto más tiempo pasa el soluto en la

columna, más ancha se hace la banda) y a más distancia entre bandas mayor
R
tiempos de
retención (s’)

ancho de la
línea base
(expresado en
s’)

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

Análisis Químico Cuantitativo. Daniel C. Harris (2013)
FUENTE: Fundamentos de
Quimica Analitica. Douglas
A. Skoog et al. (2005)
EJERCICIO- EJEMPLO
Un pico con un tiempo de retención de 407 s tiene una anchura en la base de 13 s.
Otro pico próximo se eluye a los 424 s, con una anchura de 16 s. Hallar la
resolución de los dos componentes respectivos.
 Factores que influyen sobre la resolución: Selectividad,
retención y eficiencia
La resolución se puede describir en términos termodinámicos sin considerar el
ancho del máximo (w)

● factor de separación 𝛂
● factor de retención (k)(k prom) y tiempo de retención (t)
● N = número de platos

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

 Factores que influyen sobre la resolución: Selectividad,
retención y eficiencia

● Al aumentar al doble la longitud de la columna, la

resolución aumenta 1.4.
● Un aumento de cuatro veces haría duplicar la resolución.
● Al aumentar N los tiempos de retención aumentan en
N= L : Longitud de la columna proporción directa

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

 Factores que influyen sobre la resolución:
Selectividad, retención y eficiencia
VARIACIÓN DE N VARIACIÓN DE k VARIACIÓN DE α

Al incrementar N, Al aumentar k, se eleva el -Modificar fase móvil y/o

incrementa el tiempo. tiempo de retención para estacionaria
ambos picos, y los -Modificar la temperatura de
ensancha la columna
- Emplear efectos químicos
- Fase móvil gaseosa: especiales
cambios de
temperatura
- Fase móvil liq:
composición
disolvente
- Espesor de la f.
estacionaria

FUENTE: Quimica Analitica. Gary D. Christian. Sexta Edición (2009)

Fundamentos de Quimica Analitica. Douglas A. Skoog et al. (2005)
EJERCICIO- EJEMPLO
Se separan etanol y metanol en una columna capilar de cromatografía de gases y
sus tiempos de retención respectivos son 370 y 385 s. Los anchos de base
respectivos (W) son 16.0 y 17.0 s. El máximo no retenido se presenta a los 10.0 s.
Calcular el factor de separación α, N y la resolución. NOTA: Se usa el máximo de la
elución más retardado para calcular N