ELISA SANDWICH

(ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY)

(ENSAYO DE INMUNOABSORCIN LIGADO A ENZIMA)

MARTHA ISABEL DELGADO CORDOBA JOHAN ANDRES AMAYA ROMERO

HISTORIA
1959

Yalowy Berson, precursor de los ensayos inmunoenzimticos que fueron descritos originalmente en 1971 por Engvall y Perlmann, y Van Wemeny y Schuurs. llama Elisa en sndwich porque el antgeno queda en medio de anticuerpos. prueba de Elisa es una prueba de rastreo, es la primera que debemos descartar frente a la presencia de un agente infeccioso

Se

La

ELEMENTOS PARA LLEVAR A CABO LA PRUEBA

PRIMER PASO
Se coloca en un vaso con inmunoglobulina La prueba se realiza en un laboratorio certificado. Los anticuerpos estn en fase solida El anticuerpo debe tener memoria contra el antgeno especifico

ANTICUERPOS MONOCLONALES BIEN RECUBIERTOS

SEGUNDO PASO

Se agregar el suero que contenga el antgeno (o no) que se quiera investigar. Si el antgeno est presente se unir al anticuerpo propio para l que est anclado en la fase slida. De media hora a 1 hora el anticuerpo interacciona con el antgeno (periodo de incubacin)

Los anticuerpos especficos se unen a los antgenos para los cuales estn destinados, esto permite ser precisos y seleccionar el antgeno o anticuerpo que se est buscando. Pues, quedar anclado al que se encuentre en la fase slida.

El antgeno se une al anticuerpo

TERCER PASO

Posteriormente se lava, pero los anticuerpos al estar fijos no se quitan. Solo se elimina el suero y los otros componentes. Los anticuerpos especficos se unen a los antgenos para los cuales estn destinados, esto permite ser precisos y seleccionar el antgeno o anticuerpo que se est buscando. Pues, quedar anclado al que se encuentre en la fase slida.

Un segundo anticuerpo monoclonal, se vincula a la enzima y se une al antgeno inmovilizado

CUARTO PASO

Por lo tanto, si el antgeno estaba presente se habra unido primeramente al anticuerpo fijado, posteriormente otro anticuerpo contra ese antgeno se unira a l, se agrega el sustrato con lo cual, la generacin de color indica que el antgeno s est presente

Se aade el sustrato y se convierte por las enzimas en el producto de color, la tasa de formacin de color es proporcional a la cantidad de antgeno

Si no hay presencia del agente infeccioso no voy a ver color Cuando hay color se demuestra la presencia del agente infeccioso La muestra debe ir por triplicado, se monta 3 veces. La muestra debe ser igual en los 3 lados en la microplaca Los resultados deben ser iguales en ambos lados Si da positivo en un extremo y negativo en otro la prueba esta mala y debe repetirse la prueba

RESUMEN DE LOS PASOS