Pruebas de Susceptibilidad a

Antimicrobianos
Lic. Gertrudis Horna
Docente Auxiliar ETM UPCH

INDICE

Introduccin
Prueba de sensibilidad por Disco Difusin
Concentracin Mnima Inhibitoria
Concentracin Mnima Bactericida

INTRODUCCION
El mtodo ms comn para evaluar
susceptibilidad antimicrobiana es el de difusin
en agar.
MO de crecimiento rpido
Algunos de crecimiento fastidioso.
Metodologa estandarizada
Correlacin con CIM
Estandarizado segn CLSI (NCCLS)

Mtodo de Disco Difusin

Medio a utilizar
Preparacin del agar Mueller Hinton
Preparacin de la suspensin
Inoculacin de la placa
Colocacin de los discos
Incubacin
Lectura
Interpretacin de los halos obtenidos

POR QU EL MEDIO BASE ES

RECOMENDADO ?
Medio de Mueller Hinton
Reproducibilidad aceptable.
Baja concentracin de inhibidores
sulfonamidas, trimetoprim y tetraciclina.
Crecimiento satisfactorio de patgenos no
fastidiosos.
Existe gran experiencia en estudios de
susceptibilidad.
Slo para bacterias (aerobias o facultativas) no
fastidiosas.

Preparacin del medio Mueller

Hinton

Agar base deshidratado

Post autoclavado enfre a 45-50 C.
Vierta a placa en superficie horizontal 4 mm de
profundidad.
Volumen:
60-70 ml para placas de 150 mm
25-30 ml para placas de 100 mm.
Enfre a T ambiente
Almacene en refrigeracin (4-8 C).
Control de esterilidad y calidad.

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA

SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
POR DISCO DIFUSION
1. Composicin del agar
2. Profundidad del agar
3. Densidad del inculo
4. Concentracin del antimicrobiano en el disco
5. Caractersticas del crecimiento
6. Tiempo de aplicacin de los discos

7. Temperatura de incubacin
8. Tiempo de incubacin
9. pH
10. Concentracin de timina / timidina
11. Concentracin de cationes bivalentes
12. Medida de la zona de inhibicin

Efecto del pH
Rango de pH: 7,2 a 7,4
pH cido:
Pierden potencia los aminoglucsidos y
macrlidos.
Aumenta la actividad de penicilinas.
pH alcalino
Efectos son opuestos.

Efecto de Timinas o Timidinas

Exceso de timidina
Falsa resistencia a sulfonamidas y
trimetoprim.
Evaluar cada lote nuevo de agar MH
Enterococcus faecalis ATCC 29212 / 33186
y (SXT).
Halo de inhibicin para SXT
> 20 mm: satisfactorio.
< 20 mm : falsa resistencia

Variacin de cationes divalentes

Variacin de Ca++ y Mg++
Aminoglucsidos y tetraciclinas en
Pseudomonas aeruginosa.
Contenido excesivo falsa resistencia.
Contenido bajo falsa sensibilidad

Profundidad del Agar

4 mm
Variabilidad de 3 a 5 mm.
Profundidad < 3 mm da
lecturas falsamente
susceptibles.
Profundidad > 5 mm
genera lecturas
falsamente resistentes.

Estndar de turbidez 0,5 de Mc

Farland

TURBIDEZ 0.5 DE LA ESCALA DE MAC FARLAND

- 0.5 ml Cl2Ba 0.048M (BaCl2.2H2O AL 1.176% P/V)

- 99.5 ML H2SO4 0.18 M (0.36N) 1% V/V

A= 0.08 - 0.1 (625 nm)

CONSERVACION: OSCURIDAD, TEMP AMBIENTE

VERIFICAR LA TURBIDEZ MENSUALMENTE.

Preparacin del inculo

Tome 3 a 5 colonias de igual morfologa y
emulsione en 4 a 5 ml de caldo tripticasa soya.
Ajuste la turbidez con solucin salina (NaCl 0,85
%) estril a McF 0,5
Luz adecuada
Tarjeta blanca con lneas negras de contraste.

Inoculacin en las placas

Dentro de 15 minutos de
hecho el ajuste de la
turbidez.
Con hisopo de algodn
en tres direcciones
Inocule toda la placa
(giros de 60).
Deje impregnar durante
no ms de 15 min.
No utilice inculos no
estandarizados.

Aplicacin de los discos de

sensibilidad
Cantidad:
12 unidades en placas de
150 mm
6 unidades en placas de
100 mm.

Separacin:
24 mm (del centro de un
sensidisco al otro ms
cercano).

Difusin del frmaco es

instantnea:
no reubicar los discos
despus de haberlos
depositado en la superficie
del agar.

Interpretacin de Resultados

Mtodos de Dilucin
Macrodilucin en caldo
Sistemas Autamatizados: Microdilucin en caldo
Dilucin en agar
E test
Metodologa

Realizar serie de diluciones del antimicrobiano

Caldo o agar
Inoculacin con una suspensin estandarizada
Incubacin
Lectura

Preparacin de la Solucin Stock

Peso (mg)= volumen (mL) X Concentracin (ug/mL)

Potencia antimic. (ug/mg)
Volumen (mL) = peso (mg) X Potencia antimic.(ug/mg)
Concentracin (ug/mL)

MIC / CMB

0.5 1 2 4 8 16 32 64 C

Bacteria: Escherichia coli

Antibitico: Ampicilina
CIM 2 g/mL
CBM 16 g/mL

MICRODILUCION EN CALDO / ETEST

0.01 0,03 0,06 0,12 0,25 0,5

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