DETECCIN DE METABOLITOS DE

DROGAS DE ABUSO POR

CROMATOGRAFA DE GASES ACOPLADO
A ESPECTROMETRA DE MASAS

Ernesto Bernal Morales

P.G.J. del Estado de Mxico

DEFINICIN DE DROGA DE ABUSO

Bajo

el nombre genrico de drogas de

abuso se pueden incluir una largusima lista
de sustancias qumicas de diverso origen
que pueden ser susceptibles de consumo
con fines no teraputicos

Gisbert Calabuig Medicina Legal y Toxiologia Ed. Masson Barcelona

2001

CLASIFICACIN DE DROGAS DE ABUSO

Alcohol

etlico
Opiceos
Inhalantes
Cocana
Anfetaminas y sustancias afines
Otros estimulantes (Caf, Khat, etc.)
Derivados de la Cannabis Sativa
Alucingenos (PCP, LSD, etc.)
Hipnticos y ansiolticos
Tabaco

EFECTOS FARMACOLGICOS

Compuestos psicoactivos

Estimulantes (cocana, anfetaminas)

Depresores (alcohol etlico)
Narcticos (opiceos)
Alucingenos (Cannabis sativa, PCP, LSD)

REAS DE APLICACIN DE LA TOXICOLOGA

FORENSE Y EL ANLISIS DE DROGAS

Medico Legal

Laboral

Postmortem Causa y modo de la muerte

Identificar personas que manejan bajo la influencia de
drogas (DUI y DUID)
Correccionales, fianza, etc.
Programas pblicos y privados para la deteccin de
drogas en empleados

Deporte

Juegos Olmpicos, Tour de France, etc.

FUNCIONES DE LA TOXICOLOGA
FORENSE
Identificacin

de un agente lesivo
Sustancias que produzcan una alteracin
psquica pasajera o permanente
Intoxicacin como circunstancia calificadora
de un delito
Intoxicacin como delito
Intoxicacin como estado peligroso

INVESTIGACIN TOXICOLGICA
Es

el conjunto de procesos analticos que

tienen por objeto el aislamiento,
identificacin y determinacin cualitativa o
cuantitativa de los txicos tanto en vivo
como en el cadver, con el fin de permitir el
diagnostico de intoxicacin y el
esclarecimiento de los hechos.

RECOMENDACIONES PATA LA
INVESTIGACIN TOXICOLGICA
FORENSE (ORFILA)
Todo los analistas deben de tener experiencia en
Toxicologa.
El analista debe de recibir la historia completa del
caso con toda la informacin disponible.
Todas las evidencias correctamente etiquetadas y
selladas en recipiente limpios deben ser remitidas y
analizadas.
Todas las pruebas analticas deben ser aplicadas.
Los reactivos tendrn que ser puros y tendrn que
correrse siempre blancos.
El anlisis debe de hacerse por duplicado.

PASOS DE LA INVESTIGACIN TOXICOLGICA

Informacin
Toma de Muestra
Procesamiento de la
muestra

Aislamiento,
Concentracin

Diferenciacin y
deteccin
Identificacin

Hidrlisis, digestin,
desproteinizacion, etc.

Comparacin datos
encontrados con bases
de datos de referencia

Cuantificacin
Interpretacin de los
resultados

INFORMACIN QUE DEBE SER

ENVIADA AL ANALISTA FORENSE

Nombre, edad, sexo, peso, nacionalidad, ocupacin

Historia Clnica (Drogas prescritas, adicciones,
sospechas)
Cuando fue vista por ultima vez la vctima?Donde fue
encontrada? Si estaba enferma Desde cuando?
Datos sobre tratamiento medico, anlisis previos
hechos
Sntomas
Declaracin de testigo de los hechos y Testigos de
identidad.
Descripcin de la escena del crimen
Necropsia
Clarkes Analysis of Drugs and Poisons, ed. AC Moffat, MD Osselton, B. Widdop
Pharmaceutical Press London (2004).

CLASIFICACIN DE TXICOS

Clarkes Analysis of Drugs and Poisons, ed. AC Moffat, MD Osselton, B. Widdop

Pharmaceutical Press London (2004).

ANLISIS DE DROGAS EN MUESTRAS

BIOLGICAS

El anlisis es posible en todas las muestras

biolgicas
Diferentes muestras biolgicas dan diferente
informacin
Interrelacin entre las muestras
Ventanas de Deteccin

ESPECMENES PARA BSQUEDA DE DROGAS

Vivos
Sangre*
Orina
Fluido Oral
Pelo
Sudor
Aliento

Muertos

Sangre
Orina
Humor Vtreo
Tejidos

Muestra

Sangre Perifrica
total
Corazn
Orina

Cantidad

Comentarios

SOFT/
AAFS

Tox.Rev.2005,24
(1): 63-71

10 ml

2 x 5 ml (sellada)*

Vena Femoral
c/preservativo

25 ml

10 30 ml

Ventrculo derecho o vena

cava inferior.S/ Preservativo

Toda

5 ml (sellada)

C/preservativo

20 50 ml

S/preservativo

Contenido Gstrico

Todo

25 50 ml

S/preservativo

Humor vtreo

Todo

Ambos ojos (sellado)

C/preservativo

Bilis

Toda

10 ml

C/preservativo

50 g

10 20 g

Lbulo derecho (Hgado),

s/formol, en recipientes de
vidrio por separado.

Mechn ancho de un
lpiz

Regin occipital. Desde la

base, indicar punta

Vsceras

Hgado
Rin
Cerebro

Pelo

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE
DIFERENTES MUESTRAS
Muestra

Ventajas

Desventajas

Detecta Droga,
/Suero/plasma) anlisis cuantitativo

Volumen reducido, bajas

concentraciones, droga padre y
metabolitos

Orina

Volumen elevado,
altas concentraciones

No siempre disponible, metabolitos,

anlisis cuantitativo no siempre til

Contenido
Gstrico

Altas concentraciones Muestra variable, No siempre til

Pelo y uas

Siempre disponible

Requiere alta sensibilidad,

exposicin de semanas a meses

Humor Vtreo

Putrefaccin limitada

Volumen limitado

Vsceras

Altas concentraciones Anlisis cuantitativo difcil de

interpretar, interferencias

Sangre (Total

DIFICULTAD DEL ANLISIS QUMICO DE

ESPECIMENES BIOLGICOS

de Fluidez

Muestra

Lquido

Lquido Cefalorraqudeo
Lagrimas
Saliva
Orina
Bilis

Mixto

Plasma
Suero
Sangre

Slidos

Cerebro
Corazn, rin, hgado
Pulmn, msculo

Hueso

APROXIMACIONES AL ANLISIS TOXICOLGICO

Enfocado

Limitado

A una droga en particular

A una familia de Drogas

Comprensivo

Una gran cantidad de drogas

MTODOS PARA EL ANLISIS DE

DROGAS DE ABUSO
Presuntivas

Confirmacin

Inmunoensayos enzimaticos
(EIA)

Cromatografa de lquidos
espectrometria de masas
(CL-EM)

Inmunoensayo por
fluorescencia polarizada
(FPIA)
Radioinmunoanlisis (RIA)
Cromatografa de capa fina
(CCF)

Cromatografa de gases Espectrometra de masas

(CG-EM)
Electroforesis CapilarEspectrometria de masas
(EC-EM)

MTODOS PRESUNTIVOS

Anlisis inicial Screening

Identificar muestras negativas

Selectivos a familias de drogas

Sensibles
Rpidos
Barato

Negativo es negativo
Positivo necesita confirmarse

Inmunoensayos
Cromatografa en capa fina

INMUNOENSAYOS
Radioinmunoensayo (RIA)
Inmunoensayo enzimtico (EMIT,
CEDIA)
Inmunoensayo por Polarizacin
de la fluorescencia (FPIA)
Interaccin cintica de
microparticulas en solucin
(KIMS)
Ensayo por enzima unida a
inmunoabsorbente (ELISA)

INMUNOENSAYOS PRINCIPIO -

CARACTERSTICAS GENERALES DE LOS

INMUNOENSAYOS

EIA

FPIA

RIA

LAI

Instrumentacin Si

Si

Si

No

Estabilidad de
los reactivos
Costo de los
reactivos
Automatizacin

Meses Meses 3-4

aos
semanas
++
++
+
+++
Si

Si

Si

No

Pruebas/ 8
horas

100400

250300

200-400

200-350

ANLISIS TOXICOLGICO
PRUEBAS PRESUNTIVAS -

Equipo Viva Twin P.G.J.E.M.

PROCESO DE LA MUESTRA PARA

INMUNOENSAYOS

Orina

Centrifugar la muestra

Sangre

Desproteinizacion

Disolventes
Metanol
Acetona
Cloroformo
Acetonitrilo

Acido sulfosalicilico
N,N Dimetilformamida
Humor vtreo

Centrifugacin
Dilucin

ANLISIS TOXICOLGICO

- PRUEBA CONFIRMATIVA

Un segundo anlisis,
empleando generalmente
una tcnica con un
principio qumico diferente
a la prueba presuntiva.

Tcnica cromatografica
acoplada a una
espectrometra

CG/EM, CL/EM

Identifica sustancias
Sensibilidad
Generalmente, cuantitativa
Mas confiable (Validez
Legal)

CROMATOGRAFA

Definicin
Es un mtodo de separacin basado en la diferente
distribucin de los componentes de una muestra entre
una fase mvil y una fase estacionaria.
Adsorcin: basado en diferencias en la afinidad entre
una fase mvil y la fase estacionaria.
Particin: Diferencias en la solubilidad entre una fase
liquida estacionaria y una fase mvil lquida o gaseosa.

Principles on Forensic Toxicology Barry Levine AACC Press (2004)

CROMATOGRAFA HISTORIA 1903 -1906 Tswett

1929 Lederer
1938 -1939 Ismailov y
Shraiber (CCF)
1941 1952 Martin,
Synge and James (CG)
1950 M.J.E. Golay
1960 CL
1960 CG- EM

TCNICAS DE SEPARACIN Y SISTEMAS DE

FASES
Extraccin lquido lquido (ELL)
Extraccin en fase slida (EFS)
Cromatografa en capa fina
Cromatografa en columna
Cromatografa de Lquidos
Cromatografa de Gases

L/L

L/S
L/S
L/S
L/L
L/L y L/S

CROMATOGRAFO DE GASES

Sustancias trmicamente estables y voltiles

QUE PROPORCIONA LA CROMATOGRAFA DE

GASES?

SEPARACION

Diferencia analitos entre ellos y

entre los componentes de la
matriz

PARAMETRO DE RETENCION

Determinado por las diferencias

de afinidad del analito por la fase
estacionaria y la fase mvil

Parmetro cualitativo
RESPUESTA DEL DETECTOR

Seales del detector son

proporcionales a la
concentracin de la sustancia

Parmetro cuantitativo

DETECTORES CG
REF

Air
e
H

PMT

2
H

Fotomtrico de llama
Un filtro ptico selecciona
longitudes de onda
especficas de compuestos de
PoS

Ionizacin de llama
La combustin produce
partculas cargadas que el
colector convierte en una
corriente

Captura electrnica
La prdida de
electrones lentos por
absorcin de la muestra
disminuye la corriente
en la celda

Termoinico NP
Los compuestos de N o P
aumentan la corriente en el
plasma de la sal metlica
vaporizada

Ion
Fuente

32

Conductividad trmica
El par de filamentos se
calienta cuando la
muestra diluye el gas
portador

Analizado
r

EM

Detector selectivo de
masas
La muestra ionizada es
medida en un analizador
de masas

COMPARACIN ENTRE DETECTORES

DE GC
TCD
FID
ECD

NPD(N)
NPD(P)
FPD(S)
MSD
(SIM)
10-15
fg

10-12
pg

(SCAN)
10-9
ng

10-6
ug

1 ng en 1 ul lquido (sg = 1) es concentracin 1 ppm

El detector selectivo de masas es:
Especfico y universal

10-3
mg

DETECCIN MULTIDIMENSIONAL

Espectrometra de masas

Analitos son transformados en iones cargados o

fragmentos los cuales son subsecuentemente
separados de acuerdo a su radio masa /carga y sus
abundancias son medidas

Proporciona informacin acerca de la estructura

molecular del analito

Identificacin de los analitos (comparacin con bases

de datos)

PROCESO

UN ESPECTRO DE MASAS TPICO

Abundancia

Espectro medio de dodecano por EVALDEMO.D

57

100

<--[C H ] +
(Pico base)
4 9

90
80
70

Dodecano: C12H26

71
43

60

+
<--[C H ]
5 11

50
85

40

<--[C H ] +
6 13

30
20
10
m/z->
20

.+
M (Precursor)

55
29

98

113
128

40

60

80

100

120

141
140

170
159
160

180

Ion molecular (ion precursor): prdida de

un electrn

Pico base: ion ms abundante en el

espectro

 Preparacin

de la muestra

Disgregar la materia orgnica (slidas)

Hidrlisis (protena, glucuronidos)
Extraccin con una fase orgnica

EXTRACCIN DE DROGAS DE MUESTRAS

BIOLGICAS

Matrices Lquidas
Extraccin lquido-lquido
Extraccin en fase slida
(discos, cartuchos)
Microextraccin en fase
slida

Muestras slidas
Extraccin lquidoslida (soxhlet, bligh &
Dyer)
Dispersin de la
matriz en fase slida
(MSPD)
Extraccin de Fluidos
supercrtico (SFE)
Extraccin acelerada
de disolvente (ASE)
Extraccin asistida
por microondas (MAE)

ERRORES EN EL ANALISIS DE
COMPUESTOS ORGANICOS
Analisis, 6%

Manejo de
Datos, 27%
Preparacion
muestra, 61%
Toma
muestra, 6%

METABOLISMO

FACTORES QUE DETERMINAN LA

DETECTABILIDAD DE LAS DROGAS

Tipo de droga
Dosis consumida
Frecuencia de uso
Espcimen biolgico utilizado
Diferencias individuales en metabolismo
Momento de recoleccin vs consumo
Sensibilidad del mtodo

Chiang y Hawks, 1986

LIMITACIONES ANLISIS DE DROGASDrogas detectables pero debajo del nivel de corte

(Negativo)
No pueden indicar la cantidad de droga consumida
No puede indicar cuando se consumi
No puede indicar la fuente de la droga

LIMITACIONES ANLISIS DE DROGAS -

Muchos inmunoensayos no detectan algunos

opiceos sintticos o semisinteticos (oxicodona,
metadona, etc)
No existen inmunoensayos para muchas drogas
Algunas drogas requieren de inmunoensayos
especficos

Lic. Mario Alberto Carrasco Alcntara

Director del Instituto de Servicios Periciales de la P.G.J.E.M.
Q. Moiss Saldvar Rodarte
Jefe del Laboratorio de Qumica del Instituto de Servicios Periciales
de la P.G.J.E.M.