Universidad Privada Antenor Orrego Escuela Profesional de Psicologa Curso de Biologa Celular y Molecular

UNIDAD N 1:
Tema 7: ENZIMAS

TEMA 5. ENZIMAS
Caractersticas generales. Cofactor. Clasificacin. Especificidad. Sitio cataltico. Cintica enzimtica. Factores que afectan la actividad enzimtica.

ENZIMAS
Las enzimas son los catalizadores de las reacciones de los sistemas biolgicos. Su funcin es fundamental dentro de la bioqumica de los organismos, y cumplen con las siguientes caractersticas: a) Son termolbiles y su actividad depende en ciertos casos del pH del medio. b) El reconocimiento de la enzima con el reactivo a procesar (denominado sustrato) es altamente especfico. c) Tienen gran eficiencia, es decir, transforman un gran nmero de molculas de sustrato por unidad de tiempo. d) Estn sujetas a una gran variedad de controles celulares, genticos y alostricos.

e) Aceleran notablemente la velocidad de una una reaccin qumica y cumplen con las siguientes caractersticas: 1) Son efectivas en pequeas cantidades 2) No sufren modificaciones qumicas irreversibles durante la catlisis. 3) No afectan las concentraciones finales en equilibrio, sino que nicamente disminuyen la E de activacin requerida.

CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS

CLASE 1: OXIDORREDUCTASAS (E.C. 1)
Catalizan reacciones de oxido-reduccin, y con frecuencia utilizan coenzimas como el NAD, FAD o lipoato. - - Deshidrogenasas - Oxidasas - Oxigenasas - - Reductasas - Peroxidasas - Hidroxilasas

Alcohol deshidrogenasa

CLASE 2: TRANSFERASAS (E.C. 2)

Catalizan la transferencia de un grupo de tomos desde un sustrato a otro. Las porciones que con ms frecuencia Son transferidas son grupos: amino, acilo, fosfato, glucosilo, etc. - Transaminasas - Transmetilasas - Transcarboxilasas - Quinasas

Hexoquinasa

CLASE 3: HIDROLASAS (E.C. 3)

Cataliza reacciones en la que el sustrato es escindido siendo sus fragmentos transferidos a los componentes del agua (OH y H). Implican la rotura hidroltica de enlaces C-O, C-N, O-P y C-S. - Carbohidrasas - Esterasas - Fosfatasas - Peptidasas
H2O

OH

Hidrlisis

OH

OH

CLASE 4: LIASAS (E.C. 4)

Catalizan reacciones en la que se rompen enlaces C-C, C-N y C-O, sin intrevencin de agua y con prdida de grupos funcionales simultnea a la aparicin de dobles enlaces. - Descarboxilasas - Hidratasas - Desaminasas

CLASE 5: ISOMERASAS (E.C. 5)

Catalizan la interconversin de ismeros de cualquier tipo, pticos, geomtricos o de posicin. - Epimerasa - Racemasa - Mutasa

CLASE 6: LIGASAS (E.C. 6)

Participan en reacciones en las que se unen dos molculas a expensas de un enlace fosfato de alta energa procedente del ATP. - Tiocinasa - Carboxilasa - Sinetetasa

Piruvato carboxilasa

NATURALEZA QUIMICA DE LAS ENZIMAS

Casi todas las enzimas son de naturaleza proteica Algunas enzimas requieren cofactores para su funcionamiento. - Las coenzimas se va a unir a la enzima bien de forma dbil y temporal o en otros casos de forma permanente y covalente (grupo prosttico).

Holoenzima

Apoprotena
Peso molecular Termolbil No dializa

Cofactor

(Coenzima o in metlico)

Fe+ Mg+ Mn+ Zn+

Peso molecular Termorresistente Dializa

Molculas orgnicas complejas

CATALISIS ENZIMATICA
La enzima se une efectivamente al o a los sustratos, formando un complejo transitorio (ES), mediante una reaccin reversible, cuya energa de activacin es menor que la de la reaccin no catalizada. Las modificaciones que puede experimentar la molcula de la enzima durante dicha unin son pasajeras, ya que aparece inalterada al final de la reaccin. El proceso puede representarse con la ecuacin: E + S ES EP E + P

Glucosa

Fructosa

Sitio cataltico Enzima (sacarasa)

Productos son liberados

Sustrato (sacarosa)

Enzima disponible con sitio ctaltico vaco

3 Sustrato es convertido a productos

Sustrato se une a la enzima por encaje inducido

Figure 5.7

SITIO CATALITICO
El sitio cataltico, centro activo o centro de fijacin del sustrato, es una pequea grieta o hendidura en una molcula proteica grande, donde se fija el sustrato. La estructura terciaria de la enzima est plegada de tal manera que se origina una regin con las dimensiones moleculares idneas para acomodar un sustrato especfico. Contiene varias cadenas laterales de aminocidos que participan activamente en forma directa para formar o romper enlaces del sustrato Los aminocidos que estn presentes son: Serina, histidina, cistena, lisina, aspartato y glutamato
Sitio cataltico de carboxipeptidasa

ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS

Las enzimas catalizan una reaccin especfica, y en lo fundamental ninguna otra. Pueden presentar especificidad ptica absoluta para al menos, una porcin de la molcula del sustrato o ala totalidad de dicha molcula. Ej. Enzimas de va glucoltica catalizan la interconversin de los D-.fosfoazcares pero no as la correspondiente a los L-fosfoazcares. Las enzimas lticas actan sobre grupos qumicos especficos; p.ej. Glucosidasas sobre glucsidos, esterasa sobre los steres, etc. Ciertas enzimas lticas presentan una gran especificidad. Las carboxiopeptidasas y las aminopeptidasas remueven, de uno en uno, los aminocidos de los extremos de las terminales carboxilo o amino, en las cadena polipeptdicas.

Enzimas proteolticas

Tripsina

Trombina

TEORAS DE LA ACCIN ENZIMTICA

MODELO DE LLAVE Y CERRADURA (Emil Fischer) El sustrato y la enzima se acoplan de forma estereoespecfica, de la misma manera que una llave se ajusta a su cerradura.

TEORIA DEL AJUSTE INDUCIDO (Koshland) Considera a la enzima como una estructura dotada de plasticidad y flexibilidad. Cuando el sustrato se une a la enzima, induce cambios conformacionales en la molcula de sta, que recin entonces acomoda los grupos funcionales crticos para asegurar la ubicacin ms efectiva.

FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

1. CONCENTRACIN DEL SUSTRATO Si se mantiene constante la concentracin de la enzima y se varia la concentracin de sustrato se obtiene una curva hiperblica como la de la figura. Al principio un aumento de la concentracin de sustrato produce un aumento rpido de la velocidad de reaccin, pero si se sigue aumentando la concentracin de sustrato, la velocidad comienza a disminuir y a muy altas concentraciones de sustrato se observa que no cambia la velocidad de reaccin, se dice que los sitios catalticos de la enzima se encuentran saturados.

3. EFECTO DE LA TEMPERATURA Si bien el aumento de la temperatura incrementa la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima esto resulta vlido slo en un intrevalo de T estrictamente limitado. Inicialmente, la velocidad de reaccin se incrementa conforme la T aumenta, debido al incremento de la energa cintica de las molculas reactantes. Finalmente, sin embargo, la E cintica de la enzima excede la barrera energtica, para la ruptura de los enlaces dbiles, los cuales conservan la estructura secundaria, terciaria de dicha enzima, provocando la desnaturalizacin.
Temperatura ptima para una tpica enzima humana Temperatura ptima para enzima de termfila
(Bacteria termotolerante)

Actividad

20

40

80

100

Temperatura (C)

Temperatura ptima para dos enzimas

4. EFECTO DEL PH
Para la mayora de las enzimas, la actividad ptima se encuentra entre valores de pH de 6 a 8. Por debajo o por encima de esos valores, la velocidad de reaccin cae ms o menos rpidamente. Se sabe que los cambios de pH del medio afectan el estado de ionizacin de ciertos grupos funcionales en la molcula de la enzima y tambin en la del sustrato. Por otra parte, los pH extremos provocan desnaturalizacin de la molcula enzimtica, con la consiguiente inactivacin.
ENZIMA Fosfatasa alcalina Lipasa pancretica Quimotripsina Tripsina Catalasa Carboxipeptidasa Amilasa salival Fosfatasa cida Pepsina pH 9.5 8.0 8.0 7.9 7.6 7.5 6.8 5.0 1.5 Actividad
pH ptimo para pepsina (enzima del estmago pH ptimo para tripsina (enzima intestinal)

3 4 0 2 1 pH ptimo para dos enzimas

INHIBICIN ENZIMTICA
Los inhibidores enzimticos son aquellos agentes que interfieren con la catlisis, disminuyendo o deteniendo la rx. enzimtica. Los inhibidores enzimticos se dividen en 2 grandes clases 1.- INHIBICIONES REVERSIBLES: Inhibicin no competitiva Inhibicin competitiva y Inhibicin anticompetitiva 2.- INHIBICION IREVERSIBLE INHIBICIN NO COMPETITIVA: El inhibidor se une a la enzima en un lugar de la molcula diferente del sitio cataltico, a menudo deformndola de modo que sta no forme el complejo ES a su velocidad normal. - No existe competencia entre el sustrato y el inhibidor. - El Inhibidor presenta poco parecido estructural o ninguno con el S. - Ej. Isoleucina que acta sobre enzima treonina deshidratasa

INHIBICIN COMPETITIVA:
El inhibidor puede combinarse con la enzima libre, de tal modo que compite con el sustrato normal por unirse al sitio cataltico. La estructura qumica de un inhibidor (I), por lo general es semejante a la del sustrato (S). Por tanto dicho inhibidor se combina de manera reversible, con la E para formar un complejo EI, en lugar del complejo ES. Una caracterstica de este tipo de inhibicin est dada por el hecho de que puede ser revertida aumentando la concentracin de sustrato.

La sulfamida compite con el cido para amino benzoico (PABA) por la enzima dihidropteroato sintetasa, lo que porduce como resultado la formacin de un producto que contiene sulfanilamida, que no puede ser transformado en cido flico.

Metotrexato (antileucmico) Anlogo estructural del tetrahidrofolato. Inhibe la dehidrofolato reductasa, una enzima esencial en la va de la biosntesis de bases nitrogenadas (timidina monofosfato). Se une 1000X mejor que el sustrato natural. Las clulas leucmicas no se pueden dividir.

INHIBICIN IRREVERSIBLE:
El inhibidor produce un cambio permanente en la molcula de enzima, que resulta en un deterioro definitivo de su capacidad cataltica. Por lo general estos inhibidores modifican qumicamente residuos de aminocidos en la enzima que tienen funciones fundamentales en la catlisis. Ej. los gases nerviosos, como el fluorofosfato de diisopropilo (DIFP) que reaccionan con aminocido serina de la enzima acetilcolinesterasa, el cido iodoactico y iodoacetamida que reaccionan con cistena.

PROENZIMAS
Varias enzimas se sintetizan y almacenan en forma de precursores inactivos denominados proenzimaso zimgenos. Los zimgenos se convierten en enzimas activas por la rotura irreversible de uno o varios enlaces peptdicos.
Sitio de sntesis Estmago Pncreas Pncreas Pncreas Pncreas Zimgeno Pepsingeno Quimotripsingeno Tripsingeno Procarboxipeptidasa Proelastasa Enzima activa Pepsina Quimotripsina Tripsina Carboxipeptidasa Elastasa

IMPORTANCIA DE LAS ENZIMAS EN EL DIAGNOSTICO

Enzima srica
Aspartato aminotransferasa Alanina aminotransferasa Amilasa Creatinfosfocinasa Colinesterasa Fosfatasa cida Fosfatasa alcalina Glutamato Dhasa -Glutamil transferasa CPK CHE ACP AP GLDH GT

Abrev.
AST ALT

Enfermedad en que est alterada

Enfermedades hepticas Isquemia miocrdica Enfermedades hepticas Isquemia miocrdica Pancreatitis aguda Isquemia miocrdica Intoxicacin alcohlica aguda Carcinoma de Prstata Ictericia obstructiva. Tumores Ictericia obstructiva Cirrosis alcohlica.

Lipasa

Pancreatitis aguda