UNIVERSIDAD FRANZ TAMAYO VIGENCIA: 2024
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA CODIGO: BQM -1
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA I
VERSIÓN: 1
Manual de Procedimiento PAGINAS: 8
PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
1. OBJETIVO GENERAL
▪ Realizar la curva de tolerancia a la glucosa en el laboratorio en estudiantes aleatorios
por el método glucosa oxidasa.
2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
▪ Conocer los tipos de diagnóstico en laboratorio para la Diabetes Mellitus tipo II
▪ Conocer el fundamento bioquímico para la determinación de la glucemia
▪ Conocer el procedimiento analítico para la determinación de la glucemia
▪ Interpretar de manera correcta el resultado obtenido en base a la fisiopatología
3. INTRODUCCIÓN
Los hidratos de carbono son compuestos orgánicos formados fundamentalmente por C, O e H a
partir de los cuales se puede obtener energía con gran rapidez y que aportan, aproximadamente, el
50% de las calorías que recibimos de la dieta. Se ingieren en forma de polisacáridos (almidón),
disacáridos (ej. sacarosa y fructosa) o monosacáridos (ej. glucosa y galactosa). En cualquier caso,
se desdoblan en el intestino hasta obtener monosacáridos que son absorbidos y transformados en
glucosa a nivel hepático. Los niveles de glucosa en sangre (glucemia) se mantienen dentro de unos
límites muy estrechos y constantes gracias, fundamentalmente, a la acción de dos hormonas: la
insulina (hipoglucemiante) y el glucagón (hiperglucemiante). Así, tras la ingestión aumenta la
glucemia, pero, en las personas con un correcto metabolismo hidrocarbonado, estos niveles
descienden rápidamente (gracias a la liberación de insulina) de manera que tras 1,5-2 horas la
glucemia vuelve al nivel basal. Cuando la homeostasis de la glucosa se rompe por disfunción de
cualquier elemento que la mantiene, sobrevienen los síndromes hiper o hipoglucémicos que, como
su nombre indican, conllevan el aumento (>120 mg/dL en ayunas) o la disminución (<45
50mg/dL) de la glucemia, respectivamente.
3.1. HOMEOSTASIS DE LA GLUCOSA
La porción endocrina del páncreas está constituida por los islotes de Langerhans, los cuales son
estructuras numerosas, de tamaño variable, que se encuentran distribuidas por todo el páncreas
especialmente en la cola, y representan apenas el 2% del volumen total de este órgano. Dentro de
los islotes destacan las células α y β pancreáticas encargadas de la síntesis y secreción de glucagón
e insulina respectivamente, siendo estas 2 hormonas las principales reguladoras de la
homeostasis y el metabolismo de la glucosa
Elaborado por: Dario Ayca Mamani – Bioquímico [Link].
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Figura 1. Homeostasis de la glucosa
3.1. DIABETES
La diabetes mellitus, generalmente conocida solo como “diabetes” o “diabetes sacarina”, es un
grupo de trastornos metabólicos caracterizados por la presencia de hiperglucemia si no se recibe
tratamiento. Su etiopatogenia es diversa y comprende deficiencias en la secreción de insulina, en
la actividad de la insulina o en ambas. Las complicaciones específicas de la diabetes a largo plazo
son la retinopatía, la nefropatía y la neuropatía. Las personas con diabetes también corren un mayor
riesgo de sufrir otros trastornos, como cardiopatías, arteriopatía periférica, afecciones
cerebrovasculares, cataratas, disfunción eréctil y hepatopatía grasa no alcohólica. También son
más propensas a ciertas enfermedades infecciosas, como la tuberculosis, con un pronóstico más
desfavorable.
Elaborado por: Dario Ayca Mamani – Bioquímico [Link].
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La diabetes no puede curarse, pero puede tratarse con éxito. Pueden evitarse las complicaciones
ocasionadas por la diabetes mediante el control del nivel de glucosa en sangre, de la presión
arterial (tensión arterial) y de los niveles altos de colesterol cuando se presenten
Actualmente la diabetes se clasifica en:
A. Diabetes tipo I (déficit total de insulina).
Destrucción de las células beta (generalmente por mecanismos inmunitarios) deficiencia
absoluta de insulina; en general, suele aparecer durante la niñez y los primeros años de la
edad adulta
B. Diabetes tipo II (Resistencia a la insulina o defecto secretor con resistencia a la insulina)
Es el tipo más común; hay diversos grados de disfunción de las células beta y resistencia
a la insulina; suele asociarse con el sobrepeso y la obesidad
C. Diabetes secundaria (enfermedades pancreáticas, tumores endocrinos, etc.)
D. Diabetes gestacional (se detecta durante el embarazo).
Diagnosticada solo durante el segundo o tercer trimestre del embarazo
El sobrepeso y la obesidad son los factores de riesgo más importantes y controlables para
prevenir la diabetes tipo 2. Alcanzar un peso saludable reduce notablemente el riesgo de
diabetes. Las personas con antecedentes familiares de diabetes también tienen más riesgo de
desarrollar diabetes. Hacer ejercicio (150 min a la semana caminando a paso rápido) y una dieta
con frutas, verduras, pescado y aceite de oliva virgen extra reduce el riesgo de diabetes un 40%)
Sin embargo, muchas personas con diabetes tipo 2 no presentan síntomas y la enfermedad se
descubre después de que el paciente ha sufrido algún problema médico como elevación de la
presión arterial, haber sufrido un infarto de miocardio o una trombosis cerebral.
Tabla 2. Síntomas y signos de la diabetes
Elaborado por: Dario Ayca Mamani – Bioquímico [Link].
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4. DIÁGNOSTICO
La glucosa en plasma venoso es el método convencional para la medición y la notificación
de la diabetes mellitus.
Para el diagnostico de la Diabetes Mellitus se puede utilizar los siguientes criterios:
1. Síntomas de diabetes más una glucemia casual que sea igual o mayor a 200 mg/dL.
Casual se define como cualquier hora del día sin relación con el tiempo transcurrido
desde la última comida.
2. En personas sin síntomas, un valor de glucosa superior a 126 mg/dL realizados tras
horas de ayuno (generalmente antes del desayuno).
3. Un valor de hemoglobina A1c superior a 6.5% realizado con un método de referencia en
un Laboratorio Certificado.
4. Glucemia medida que sea igual o mayor a 200 mg/dL dos horas (120 min) después de
una carga de 75 g de glucosa durante una prueba de tolerancia oral a la glucosa
1. DETERMINACIÓN DE GLUCEMIA BASAL
Consiste en determinar la glucemia tras un ayuno de 10-12h. En general se considera que:
▪ Valores menores de 110 mg/dL son normales.
▪ Valores entre 110 y 140 mg/dL son dudosos y deben ser confirmados.
▪ Valores mayores de 140 mg/dL son probablemente indicativos de diabetes.
Si una persona tiene una glucemia de ayuno mayor o igual a 100 mg/dl, pero inferior a
126 mg/ dL, se recomienda practicar una prueba de tolerancia oral a la glucosa, con el
objeto de identificar individuos con intolerancia a la glucosa o diabetes
2. HEMOGLOBINA GLICOSILADA (glicada)
La hemoglobina (Hb) de los seres humanos adultos normales, está compuesta por tres
fracciones llamadas: hemoglobina A, hemoglobina A2 y hemoglobina F. La hemoglobina A
(HbA), es la más abundante de todas, representando aproximadamente el 97%. A través de
reacciones bioquímicas, parte de esta HbA se puede combinar con azúcares, convirtiéndose
en glucohemoglobina (HbA1) que es la glicación con la glucosa.
A lo largo de la vida circulatoria de los hematíes, se forma continuamente hemoglobina
La HbA1c, ha constituido en la práctica clínica el principal método para evaluar el control
de los pacientes diabéticos.
Elaborado por: Dario Ayca Mamani – Bioquímico [Link].
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La determinación de la hemoglobina glucosilada A1C es el mejor sistema para valorar el
metabolismo de los carbohidratos, pues viene a ser como un índice integrado de la glicemia
a largo plazo. Se conoce que un nivel de HbA1c del 6% corresponde a 135 mg/dl de glicemia
y que por cada 1% de aumento de esta la glicemia aumenta un aproximado de 35 mg/dl,
según los estándares de la ADA (American Diabetes Association).
Para el diagnóstico de la DM que se establece en un valor de HbA1C igual o superior al
6,5%. En ausencia de clínica evidente se necesita de una segunda determinación de HbA1C
para confirmar el diagnóstico.
La HbA1c o hemoglobina glicosilada informa de la media de los valores de glucemia durante
las últimas 12 semanas (3 meses) anteriores a la extracción de sangre.
✓ Sus valores normales se encuentran entre 4.5 a 6%, aunque se considera que una persona
con diabetes está bien controlada cuando este valor está por debajo del 7%.
✓ La determinación de HbA1c se debe realizar de forma rutinaria en todos los pacientes
con DM, en la evaluación inicial y luego, como parte de la atención continuada
✓ Se aconseja realizar la prueba de HbA1c por lo menos 2 veces al año en los pacientes
que están cumpliendo con el objetivo terapéutico
✓ El uso de pruebas de HbA1c rápidas o en el sitio de atención del paciente, permite la
modificación de los tratamientos de manera oportuna y rápida
3. PRUEBA DE TOLERANCIA
El fundamento de la prueba consiste en la dosificación de la glucemia luego sobrecarga con
75g de glucosa anhidra por vía oral, para evaluar si ella está siendo metabolizada por la
insulina (cuya función es transportar la glucosa al interior de las células y tejidos,
disminuyendo su concentración en la sangre). Cuando la insulina no actúa de manera correcta,
sea por menor producción por parte del páncreas, sea por resistencia periférica a su acción, los
niveles glucémicos se elevan, llevando a la diagnostico de Intolerancia a la Glucosa, o al de
Diabetes Mellitus, dependiendo de los niveles glucémicos alcanzados 2 horas luego la
ingestión de la glucosa anhidra.
La prueba no debe realizarse a personas con glucemia en ayunas iguales o mayores a 126
mg/dL o con glucemia al azar igual o superior a 200 mg/dL en los que basta una segunda
determinación para confirmar el diagnóstico. Las mediciones intermedias durante la PTOG
(prueba de tolerancia oral a la glucosa) no se recomiendan en forma rutinaria. Por este motivo
se eliminó el término “curva de tolerancia a la glucosa”.
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Para la realización de la PTOG la persona debe ingerir 75 gramos de glucosa diluidos en 300
ml de agua con o sin sabor, a temperatura ambiente, en un período no mayor de cinco minutos.
Además, debe reunir las siguientes condiciones:
1. Ayuno de 8 a 14 horas (se puede tomar agua).
2. Evitar restricciones en la dieta durante los tres días precedentes (Seguir su dieta
habitual). Hay evidencia que sugiere que la noche anterior se debe consumir una
comida con un contenido razonable de carbohidratos (30-50 g).
3. Evitar cambios en la actividad física habitual durante los tres días precedentes.
4. Durante la prueba el paciente debe mantenerse en reposo y no fumar
5. El paciente no debe tener una infección u otra enfermedad intercurrente. De lo
contrario, el resultado no será representativo de su estado habitual.
6. El paciente debe interrumpir el consumo de medicamentos que pudieran alterar los
valores de la glucemia como mínimo 12 horas antes de la realización de la prueba.
En niños, la carga de glucosa para la PTOG se calcula como 1.75 g de glucosa por kg de peso
sin exceder 75 g en total.
5. MATERIALES
▪ Analizador Químico BIOSYSTEM
▪ Macrocentrifuga ▪ Glucosa en polvo
▪ Vortex (glucosamin vita) 5
por grupo
▪ Micropipetas
▪ Jeringas desechables
▪ Tips amarillos
▪ Guantes desechables
▪ Tipos azules
▪ Algodón
▪ Kit Glucosa
▪ Alcohol
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6. PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO PRE ANALITICO
▪ Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 4 ml de
sangre de la flexura del codo con jeringa de 5 ml, a un paciente (estudiante).
▪ Una vez obtenida, colocarla en un tubo de ensayo y dejarlas reposar durante 5 minutos.
▪ Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a
3000 rpm durante 5 minutos.
▪ Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.
▪ Determinar la glucemia basal
▪ A un paciente (estudiante) se les dará a tomar 75 gramos de glucosa (Glucosamin)
después de primera extracción en ayunas disueltos en 300 ml de agua hervida
▪ Posterior a la ingesta de glucosa, realizar la determinación de glucemia a los tiempos de
30, 60 y 120 minutos.
▪ Valores a los 120 minutos inferiores a 139 mg/dl se consideran normales; entre 140 y 199
mg/dl se considera Tolerancia a la Glucosa Alterada (TGA) y si el valor es igual o
superior a los 200 mg/dl, es diagnóstico de DM
PROCEDIMIENTO ANALITICO
▪ Pipetear en tubos de ensayo:
▪ Agitar bien e incubar los tubos durante 5 minutos a 37ºC.
▪ Leer la absorbancia del Patrón y de la Muestra a 505 nm.
▪ Realizar el cálculo de la glucemia sérica a través de la siguiente formula:
Glucemia (mg/dl =
7. RESULTADOS
DIAGNOSTICO DE LA DIABETES MELLITUS
Condición Glucemia en ayuno Glucemia a los 120 min
post administración
Saludable < 100 mg/dL < 140 mg/dL
Intolerancia a la 100 a 125 mg/dL 140 – 199 mg/dL
glucosa
Diabetes Mellitus ≥ 126 mg/dL ≥ 200 mg/dL
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8. BIBLIOGRAFIA
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